Ce travail a été soutenu en partie par les National Institutes of Health (DK097335 & T32AI007260) et le Département de pédiatrie de l’Université de l’Iowa Stead Family.

Toutes les procédures animales ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Iowa (Protocole #8041401). Tous les animaux étaient logés dans un vivarium approuvé par l’Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) à l’Université de l’Iowa. Toutes les souris étaient souches sauvages C57Bl/6J.
1. Établissement de femi chez les souris enceintes
<ol><li>Préparation LPS<ol>
<li>Utilisez le LPS dérivé d’Escherichia coli O55:B5 (concentration de stock 2 mg/mL).</li>
		<li>Diluer la concentration de stock de LPS 1:100 avec la solution saline stérile pour une concentration de travail de 20 μg/mL.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injection maternelle de LPS<ol>
<li>Injecter des mères enceintes au jour de gestation e15. Ce point de temps est d’environ 75% par la grossesse murine, ce qui rend ce modèle développementairement similaire au début du troisième trimestre des grossesses humaines, qui est quand la majorité des naissances prématurées dues à la chorioamnionite se produisent.</li>
		<li>Pesez les souris enceintes immédiatement avant l’injection pour déterminer le dosage approprié du SLSP.</li>
		<li>Calculez la dose de concentration de travail en utilisant la formule suivante : 5 μL x gramme de poids corporel (gbw), pour une dose totale de LPS de 100 μg/kg. Pour les animaux de contrôle, utilisez un volume équivalent de solution saline normale pour l’injection.</li>
		<li>Vortex LPS solution trois fois pendant 15 secondes sur le haut avant chaque injection.</li>
		<li>Dessinez le volume LPS dans une seringue de 1 mL.</li>
		<li>Retenir la souris enceinte avec la technique de scruffing. Maintenez la position dorsale de la couchée et effectuez l’injection.<ol>
<li>Insérez une aiguille de calibre 30 de 8 mm qui se dénabère au-dessus du quadrant inférieur droit de l’abdomen (pour éviter les vaisseaux vésicaux et abdominaux) à un angle de 30\u201240°. Insérer environ 1/4 à 1/2 de la longueur de l’aiguille.</li>
			<li>Reculez sur le piston de seringue pour assurer une pression négative avant l’injection. Procéder à l’injection si une pression négative est présente.</li>
			<li>Après l’injection, surveiller les souris pendant environ 30 minutes, puis retourner dans des cages pour le reste de la grossesse.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Livraison et soin de la progéniture, et récolte intestinale
<ol><li>Livrer les chiots normalement par voie vaginale à e20. REMARQUE : Ce modèle a un taux de perte fœtale dépendant de la dose qui peut être vu à la figure 1 et qui est discuté dans les résultats ci-dessous.</li>
	<li>Permettre aux chiots de rester avec les mères et de recevoir des aliments ad libitum.</li>
	<li>Le jour de la récolte, généralement après le jour 14 (P14), euthanasier les petits par dislocation cervicale conformément aux protocoles du Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux.</li>
	<li>À l’aide de ciseaux et de forceps, faire une incision verticale sur la ligne médiane de l’abdomen, à travers la peau et le péritoine, sur toute la longueur de l’abdomen. Exciser l’intestin grêle de l’estomac au cécu avec des ciseaux et enlever la mesenterie avec des forceps.</li>
	<li>Isoler et garder le distal 1/3 de l’intestin grêle (section représentative de l’iléum humain), en jetant l’intestin grêle proximal, le cécu, et le côlon.</li>
	<li>Diviser la portion d’iléum en deux à l’aide de ciseaux.</li>
	<li>Placez la moitié proximale dans une solution de stabilisation de l’ARN pour une quantification ultérieure de l’ARN.</li>
	<li>Placer la moitié distale dans une formaline tamponnée neutre à 10 % pour la préparation des diapositives.</li>
</ol>3. Notation intestinale de blessure
<ol><li>Sectionz le tissu incorporé paraffine en tranches de 5 μm d’épaisseur et montez sur des glissières en verre. REMARQUE : Nous envoyons les spécimens à un noyau d’histologie pour l’intégration, la sectionne et le montage de paraffine sur des toboggans.</li>
	<li>Déparaffiniser les diapositives selon les procédures standard.</li>
	<li>Sections de tache avec l’hématoxyline et l’éosine selon les procédures standard.</li>
	<li>Marquer des sections sur une échelle de 3 points pour les blessures intestinales comme décritprécédemment 42,43.<ol>
<li>À l’aide d’une microscopie légère, évaluer les lésions intestinales généralisées par deux chercheurs aveugles distincts sur une échelle de 3 points évaluant l’intégrité et la séparation villus de la membranedu sous-sol 43 (Figure supplémentaire 1). Les dommages intestinaux sont mieux évalués au grossissement de 20x et à l’ouverture numérique 0.50.</li>
		<li>Attribuez un score de 0 pour décrire la muqueuse normale.</li>
		<li>Assignez une note de 1 décrire les blessures légères qui englobent le développement de l’espace subepithelial Gruenhagen, la vacuolisation ou le levage subepithelial limité à la propria lamina ou des pointes de villi.</li>
		<li>Attribuez une note de 2 pour décrire les blessures graves, indiquées par le levage épithélial et la vacuolisation supérieures à la moitié des villosités, la distorsion des villosités ou l’ulcération muqueuse et la désintégration des propria lamina.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Quantification des cellules de Paneth et de gobelet
<ol><li>Après la déparaffinisation, les glissements de tache des sections de tissu de l’étape 2.8 avec la tache bleue/périodique d’acide d’Alcian pour indiquer les cellules de gobelet et de Paneth commeprécédemment décrit 44,45 selon les étapes suivantes. REMARQUE : Tandis que la tache bleue/périodique de Schiff d’acide d’Alcian n’est pas spécifique aux cellules de Paneth ou de gobelet, dans notre expérience, les investigateurs expérimentés aveuglés ont la quantification cellulaire équivalente utilisant cette tache comparée aux anticorps ciblés cellulaires, avec sensiblement moins de taches de fond46.</li>
	<li>Déparaffiner, tacher et déshydrater les diapositives comme suit.<ol>
<li>Submerger les toboggans en xylène pendant 10 min deux fois. AVERTISSEMENT : Xylene doit être employé dans un capot de fumée.</li>
		<li>Rincer à 100% EtOH.</li>
		<li>Submergez les glissières en 100 % EtOH pendant 3 min, puis en 90% EtOH pendant 3 min, suivies de 70% d’EtOH pendant 3 min, et enfin submergez les diapositives dans 50% EtOH pendant 3 min.</li>
		<li>Laver sous l’eau courante du robinet pendant 5 min. MISE EN GARDE : Éloignez la section de l’eau courante pour éviter la perte d’échantillon de tissu.</li>
		<li>Filtrez la solution de tache bleue alcienne avec un filtre à café standard.</li>
		<li>Taches glissées dans la tache bleue alcienne pendant 15 min, puis laver sous l’eau courante du robinet pendant 2 min.</li>
		<li>Diluer 1 mg d’acide périodique dans 200 mL d’eau distillée double. Submergez les glissières dans cette solution pendant 5 min. Ensuite, laver sous l’eau courante du robinet pendant 1 min.</li>
		<li>Tache avec le réaménagement de Schiff pendant 10 min. Laver sous l’eau courante du robinet pendant 5 min.</li>
		<li>Tacher les toboggans avec de l’hématoxyline pendant 1 min, puis laver sous l’eau courante du robinet pendant 2 min.</li>
		<li>Submergez-les dans de l’alcool acide (1 mL d’acide chlorhydrique mélangé à 99 mL de 70% d’EtOH) pendant 1 min.</li>
		<li>Submerger dans l’eau du robinet de Scott (concentration de 0,1 % de NaHCO3 dans l’eau du robinet) pendant 1 min, puis laver sous l’eau courante du robinet pendant 1 min.</li>
		<li>Déshydratez les diapositives.<ol>
<li>Plongez chaque diapositive 10 fois dans 70% EtOH, puis plongez 10 fois dans 90% EtOH, et 10 fois dans 100% EtOH.</li>
			<li>Submergez les glissières dans 100% EtOH pendant 10 min, puis submergez deux fois en xylène frais pendant 3 min chacune.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Placez une goutte de supports de montage sur le spécimen et placez un coverslip sur elle.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Comptage des cellules de gobelet<ol>
<li>À l’aide d’une microscopie légère, compter les cellules de gobelet(figure supplémentaire 2). Pour chaque morceau de tissu intestinal, comptez le nombre de cellules gobelet et 500 cellules épithéliales et le rapport express de cellules de gobelet comme rapport par 100 cellules épithéliales. Les cellules de gobelet sont mieux comptées au grossissement de 20x et à l’ouverture numérique 0.5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Comptage des cellules de Paneth<ol>
<li>À l’aide d’une microscopie légère, compter les cellules de Paneth(figure supplémentaire 2). Pour chaque morceau de tissu intestinal, exprimer comme un rapport de cellules Paneth par crypte intestinale. Comptez 100 cryptes intestinales par morceau de tissu intestinal. Les cellules de paneth sont mieux comptées au grossissement de 20x-60x et à l’ouverture numérique 0.50-1.30.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Chorioamnionitis impacts 2\u20124% de terme et 25\u201230% des accouchements prématurés8,9. Cependant, l’impact de la chorioamnionite peut prolonger la naissance longue après car il a été montré pour avoir des effets significatifs sur le foetus et lenouveau-né 10,11,12,13,14,<sup cl...

Les membranes chorioniques jouent un rôle essentiel dans la grossesse chez les mammifères. Ils comprennent le chorion et l’amnion, qui servent de multiples fonctions. Ils entourent et protègent le foetus, facilitent la signalisation paracrine entre les compartiments maternel et fœtal1,et créent des boucles de rétroaction locales dans les membranes chorioniques, qui peuvent être impliquées dans l’initiation de la parturition1. La compréhension actuelle des membranes indique que l’amnion fournit la fonction structurale de barrière, et le chorion fournit un tampon immunologique principalement pour protéger le foetus en développement du système immunitaire maternel2. L’inflammation de ces membranes est connue sous le nom de chorioamnionite. Historiquement, le diagnostic de chorioamnionitis clinique a été fait suivant la présence de la fièvre maternelle plus un ou plusieurs résultats cliniques foetaux oumaternels 3,4. Cependant, bien que cette définition soit cliniquement utile, son manque de précision a rendu la recherche sur la chorioamnionite difficile. En 2015, dans le but de clarifier le diagnostic, un atelier d’experts de l’Eunice Kennedy Shriver National Institute for Child Health and Human Development a défini la chorioamnionite comme une inflammation intra-utérine, ou une infection, ou les deux (triple I)3. Cette clarification est importante parce que tandis que l’infection induite microbienne est une cause importante de l’inflammation utérine/amniotique, elle se produit moins généralement que l’inflammation utérine/amniotiquestérile 5,6,7. Dans l’ensemble, la chorioamnionite reste un problème de santé publique important, comme on le voit dans 2\u20124% des accouchements à terme et 25\u201230% des accouchements prématurés8,9.
Chorioamnionitis peut avoir des effets significatifs sur le foetus et le nouveau-né. Il a été bien documenté dans la littérature que chorioamnionitis est associé au risque accru de beaucoup des morbidités de la prématurité, y compris la dysplasie bronchopulmonaire10,dommages cérébraux de matière blanche11,hémorragie intraventriculaire12,rétinopathie de la prématurité13, et à la fois suspecté et confirmé sepsis néonatal de débuttôt 14,15. Comme nous nous intéressons aux mécanismes de blessure et de réparation du tractus intestinal immature, il est important de noter que la chorioamnionite est également associée au développement ultérieur de l’entérocolite nécrosante (NEC)15,16. Nec est une maladie gastro-intestinale dévastatrice des enfants en bas âge prématurés qui a comme conséquence une réponse dysregulated d’hôte à l’inflammation et à la nécrose intestinalesuivante 17. Chaque année, nec affecte plus de 4000 nourrissons aux États-Unis, et jusqu’à un tiers de ces nourrissons meurent de la maladie18. La pathogénie de NEC implique probablement une combinaison de l’immaturité intestinale, de la dysrégulation du système immunitaire immature, de l’inflammation intestinale, et de la translocationbactérienne 19,culminant dans une voie commune finale de nécrose intestinale. Fait important, le début du NEC se produit souvent des semaines après la naissance et l’exposition potentielle à la chorioamnionitis, rendant le lien mécaniste entre chorioamnionitis et développement suivant de NECpeu clair 20. Un mécanisme potentiel par lequel la chorioamnionite peut contribuer à la pathophysiologie de NEC est par la déréglementation du système immunitaire maternel, produisant plus tard une réponse inflammatoire foetale forte qui peut perturber les modèles développementaux foetauxnormaux 21,22,23.
Plusieurs modèles mammifères de chorioamnionite existent chez les rongeurs et les moutons24,25,26,27,28,29,30,31,32. Cependant, peu de données existent concernant le développement du tractus intestinal au-delà de la période initiale du nouveau-né suivant l’exposition foetale induite par chorioamnionitis à l’inflammation maternelle (FEMI). Afin d’explorer la relation entre FEMI et le développement ultérieur des dommages du tractus intestinal immature, nous avons adapté le modèle fEMI lipopolysaccharide (LPS) induit. Les lipopolysaccharides sont un composant majeur de la surface extracellulaire sur les bactéries gram négatives et sont un puissant stimulant du système immunitaire inné de multiples espèces eucaryotes, y compris leshumains 33. L’injection maternelle de LPS a comme conséquence une cascade inflammatoire stérile sans les effets confusionnels des bactéries vivantes, et c’est un modèle bien établi pour l’induction de la naissance prématurée34,aussi bien qu’un modèle de chorioamnionitis aiguë et du syndrome foetal de réponse inflammatoire (FIRS), qui est la forme la plus grave de chorioamnionitis24,35. Il a également été démontré qu’il induit à la fois des lésions cérébrales de matière blanche et grise dans un modèlede mouton 36 et un modèle murin37,38,39,40. Cependant, à notre connaissance, nous sommes les premiers à utiliser ce modèle de chorioamnionitis et FEMI pour étudier ses effets sur le développement du tractus gastro-intestinal après la naissance, ainsi que pour étudier un lien mécaniste possible entre chorioamnionitis et développement ultérieur de NEC41,42.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue stain</td>
			<td>Newcomer supply</td>
			<td>1003A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl6/J mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin stain</td>
			<td>Leica</td>
			<td>381562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ni-U Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2CE-MQVJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periodic Acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>H5106</td>
			<td>CAS# 10450-59-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>Am7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schiff&#39;s reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secor Imager 2400</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V-Plex Assay</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development

Chorioamnionitis est un précipité commun de la naissance prématurée et est associé à beaucoup des morbidités de la prématurité, y compris l’entérocolite nécrosante (NEC). Cependant, un lien mécaniste entre ces deux conditions reste à découvrir. Nous avons adopté un modèle murin de chorioamnionitis impliquant l’exposition foetale lipopolysaccharide (LPS)-induite à l’inflammation maternelle (FEMI). Ce modèle de FEMI induit une cascade inflammatoire maternelle, placentaire, et foetale stérile, qui est également présente dans beaucoup de cas de chorioamnionitis clinique. Bien qu’il existe des modèles qui utilisent des bactéries vivantes et imitent plus précisément la pathophysiologie d’une infection ascendante entraînant une chorioamnionite, ces méthodes peuvent causer des effets indirects sur le développement du tractus intestinal immature et du microbiome en développement associé. En utilisant ce protocole, nous avons démontré que l’IGF induite par le SLS entraîne une augmentation dépendante de la dose de la perte de grossesse et de la naissance prématurée, ainsi que la perturbation du développement intestinal normal chez la progéniture. En outre, nous avons démontré que FEMI augmente de manière significative les dommages intestinaux et les cytokines sériques chez la progéniture, tout en diminuant simultanément les cellules de gobelet et de Paneth, qui fournissent toutes deux une première ligne d’immunité innée contre l’inflammation intestinale. Bien qu’un modèle semblable de FEMI LPS-induit ait été employé pour modéliser l’association entre chorioamnionitis et anomalies suivantes du système nerveux central, à notre connaissance, ce protocole est le premier à essayer d’élucider un lien mécaniste entre chorioamnionitis et perturbations plus tard dans le développement intestinal comme lien potentiel entre chorioamnionitis et NEC.

L’exposition à l’IGF le jour embryonnaire 15 entraîne une perte de grossesse dépendante de la dose et un taux dépendant de la dose de travail prématuré (figure 1)42. Pour les expériences, nous avons choisi d’utiliser une dose de LPS de 100 μg/kg pour minimiser la perte de grossesse et la prématurité (perte de 50% entre la prématurité et la mort fœtale intra-utérine) tout en exposant les fœtus à une insulte inflammatoire significative.
<p clas...

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A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

Un modèle murin d’exposition foetale à l’inflammation maternelle pour étudier les effets de la chorioamnionite aiguë sur le développement intestinal nouveau-né

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

3.7K vues.  University of Iowa. Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

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Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopique aortique transplantation: un modèle de rat pour étudier le développement de la vasculopathie chronique

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Recherche

Médecine

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Évaluer les changements tératogènes dans un modèle de poisson zèbre de l&#39;exposition d&#39;alcoolisation fœtale

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ultrasound and fetal echocardiography. Increasingly, these imaging modalities are being employed clinically to examine cardiac function and assess wellbeing in utero, thereby guiding timing of birth decisions. Here, we used a rabbit model of IUGR that allows analysis of cardiac function in a clinically relevant way. Using isoflurane induced anesthesia, IUGR is surgically created at gestational age day 25 by performing a laparotomy, exposing the bicornuate uterus and then ligating 40-50% of uteroplacental vessels supplying each gestational sac in a single uterine horn. The other horn in the rabbit bicornuate uterus serves as internal control fetuses. Then, after recovery at gestational age day 30 (full term), the same rabbit undergoes examination of fetal cardiac function. Anesthesia is induced with ketamine and xylazine intramuscularly, then maintained by a continuous intravenous infusion of ketamine and xylazine to minimize iatrogenic effects on fetal cardiac function. A repeat laparotomy is performed to expose each gestational sac and a microultrasound examination (VisualSonics VEVO 2100) of fetal cardiac function is performed. Placental insufficiency is evident by a raised pulsatility index or an absent or reversed end diastolic flow of the umbilical artery Doppler waveform. The ductus venosus and middle cerebral artery Doppler is then examined. Fetal echocardiography is performed by recording B mode, M mode and flow velocity waveforms in lateral and apical views. Offline calculations determine standard M-mode cardiac variables, tricuspid and mitral annular plane systolic excursion, speckle tracking and strain analysis, modified myocardial performance index and vascular flow velocity waveforms of interest. This small animal model of IUGR therefore affords examination of in utero cardiac function that is consistent with current clinical practice and is therefore useful in a translational research setting.

We describe examination of fetal cardiac function with contemporary functional fetal echocardiography and fetoplacental Doppler ultrasound using the VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in a surgically induced model of intrauterine fetal growth restriction in a rabbit.

L&#39;échocardiographie fœtale et Pulsed-ondes ultrasons Doppler dans un modèle de lapin de la restriction de croissance intra-utérine

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Murin de transplantation de la cornée: Un modèle pour étudier la forme la plus courante de la transplantation d&#39;organes solides

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive nephropathy induced by unilateral ureteric obstruction (UUO), which can either be irreversible (UUO) or reversible (R-UUO). In the irreversible UUO model, the ureter may be obstructed for variable periods of time in order to induce increasingly severe renal inflammation and interstitial fibrotic scarring. In the reversible R-UUO model the ureter is obstructed to induce hydronephrosis, tubular dilation and inflammation. After a suitable period of time the ureteric obstruction is then surgically reversed by anastomosis of the severed previously obstructed ureter to the bladder in order to allow complete decompression of the kidney and restoration of urinary flow to the bladder. The irreversible UUO model has been used to investigate various aspects of renal inflammation and scarring including the pathogenesis of disease and the testing of potential anti-inflammatory or anti-fibrotic therapies. The more challenging model of R-UUO has been used by some investigators and does offer significant research potential as it allows the study of inflammatory and immune processes and tissue remodeling in an injured and scarred kidney following the removal of the injurious stimulus. As a result, the R-UUO model offers investigators the opportunity to explore the resolution of kidney inflammation together with key aspects of tissue repair. These experimental models are of relevance to human disease as patients often present with obstruction of the renal tract that requires decompression and are commonly left with significant residual kidney impairment that has no current treatment options and may lead to eventual end stage kidney failure.

The murine model of irreversible unilateral ureteric obstruction (UUO) is presented together with the model of reversible UUO in which the ureteric obstruction is relieved by anastomosis of the severed ureter into the bladder. These models enable the study of renal inflammation and scarring as well as tissue remodeling.

Un modèle murin d&#39;irréversible et réversible unilatérale obstruction urétérale

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

Poudre sèche et aérosol nébulisée L&#39;inhalation de produits pharmaceutiques à des souris Livrés L&#39;utilisation d&#39;un nez seul système d&#39;exposition

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be attributed to, in part, the dysregulation of autophagy. Aberrant changes in the expression of autophagy regulators in the placentas from obese pregnancies may be regulated by inflammatory processes associated with both obesity and pregnancy. Described here is a protocol for sampling of villous tissue and isolation of villous cytotrophoblasts from the term human placenta for primary cell culture. This is followed by a method for simulating the inflammatory milieu in the obese intrauterine environment by treating primary trophoblasts from lean pregnancies with tumor necrosis factor alpha (TNF&#945;), a proinflammatory cytokine that is elevated in obesity and in pregnancy. Through the implementation of the protocol described here, it is found that exposure to exogenous TNF&#945; regulates the expression of Rubicon, a negative regulator of autophagy, in trophoblasts from lean pregnancies with female fetuses. While a variety of biological factors in the obese intrauterine environment maintain the potential to modulate critical pathways in trophoblasts, this ex vivo system is especially useful for determining if expression patterns observed in vivo in human placentas with maternal obesity are a direct result of TNF&#945; signaling. Ultimately, this approach affords the opportunity to parse out the regulatory and molecular implications of inflammation associated with maternal obesity on autophagy and other critical cellular pathways in trophoblasts that have the potential to impact placental function.

Presented here is a protocol for sampling of human placental villous tissue followed by isolation of cytotrophoblasts for primary cell culture. Treatment of trophoblasts with TNF&#945; recapitulates inflammation in the obese intrauterine environment and facilitates the discovery of molecular targets regulated by inflammation in placentas with maternal obesity.

Un modèle trophoblastiques humaines primaires pour étudier l’effet de l’Inflammation associées à l’obésité maternelle sur la réglementation de l’autophagie dans le Placenta

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Mesure de la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris à l’aide de fil myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. Microbes have traditionally been classified based on their ability to use or tolerate oxygen. Supplemental oxygen is a common medical therapy administered to people with cystic fibrosis (pwCF); however, existing studies on oxygen and the airway microbiome have focused on how hypoxia (low oxygen) rather than hyperoxia (high oxygen) affects the predominantly aerobic and facultative anaerobic lung microbial communities. To address this critical knowledge gap, this protocol was developed using an artificial sputum medium that mimics the composition of sputum from pwCF. The use of filter sterilization, which yields a transparent medium, allows optical methods to follow the growth of single-celled microbes in suspension cultures. To create hyperoxic conditions, this model system takes advantage of established anaerobic culturing techniques to study hyperoxic conditions; instead of removing oxygen, oxygen is added to cultures by daily sparging of serum bottles with a mixture of compressed oxygen and air. Sputum from 50 pwCF underwent daily sparging for a 72-h period to verify the ability of this model to maintain differential oxygen conditions. Shotgun metagenomic sequencing was performed on cultured and uncultured sputum samples from 11 pwCF to verify the ability of this medium to support the growth of commensal and pathogenic microbes commonly found in cystic fibrosis sputum. Growth curves were obtained from 112 isolates obtained from pwCF to verify the ability of this artificial sputum medium to support the growth of common cystic fibrosis pathogens. We find that this model can culture a wide variety of pathogens and commensals in CF sputum, recovers a community highly similar to uncultured sputum under normoxic conditions, and creates different culture phenotypes under varying oxygen conditions. This new approach might lead to a better understanding of unanticipated effects induced by the use of oxygen in pwCF on airway microbial communities and common respiratory pathogens.

The goal of this protocol is to develop a model system for the effect of hyperoxia on cystic fibrosis airway microbial communities. Artificial sputum medium emulates the composition of sputum, and hyperoxic culture conditions model the effects of supplemental oxygen on lung microbial communities.

Conception et développement d’un modèle pour étudier l’effet de l’oxygène supplémentaire sur le microbiome des voies respiratoires de la fibrose kystique

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...

Manipulation standardisée du Tuina pour l’arthrose du genou chez le rat

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its mechanism. Therefore, the manipulation of animal models of knee osteoarthritis is critical. This protocol provides a standard process for Tuina manipulation on KOA rats and a preliminary exploration of the mechanism of Tuina for KOA. The press and kneading manipulation method (a kind of Tuina manipulation that refers to pressing and kneading the specific area of the body surface) is applied on 5 acupoints around the knee joint of rats. The force and frequency of the manipulation were standardized by finger pressure recordings, and the position of the rat during manipulation is described in detail in the protocol. The effect of manipulation can be measured by pain behavior tests and microscopic findings in synovial and cartilage. KOA rats showed significant improvement in pain behavior. The synovial tissue inflammatory infiltration was reduced in the Tuina group, and the expression of tumor necrosis factor (TNF)-&#945; was significantly lower. Compared to the control group, chondrocyte apoptosis was less in the Tuina group. This study provides a standardized protocol for Tuina manipulation on KOA rats and preliminary proof that the therapeutic effects of Tuina may be related to reducing synovial inflammation and delayed chondrocyte apoptosis.

Pleins feux sur l’auteur : Comprendre le mécanisme de manipulation du tuina chez le rat 

We present a protocol for Tuina manipulation performed on plaster-immobilized-induced knee osteoarthritis rats. Based on the preliminary results, it suggested that the efficacy of the method relied on the reduction of inflammation and cartilage loss.

Manipulation du tuina pour réduire l’inflammation et la perte de cartilage chez les rats souffrant d’arthrose du genou

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...