에드hazardia aedis는 Aedes aegypti 모기를 구체적으로 감염시키는 현미경 기생충입니다. 이 기생충을 양육하는 것은 기생충의 수명 주기의 복잡성 때문에 새로운 연구원을 위해 도전할 수 있습니다. 이 프로토콜은 절차에 대한 단계를 적절하게 시간화하고, 전염성 포자를 식별하고, 차세대 기생충을 전파하는 방법을 포함하여 E.aedis를 양육하기 위한 단계별 지침을 제공합니다.
이 프로토콜의 정확한 타이밍은 어려울 수 있으며 일부 시행 착오가 필요할 수 있습니다. 포자를 식별하는 것도 어려울 수 있습니다. 이 프로토콜의 시각적 보조 장치는 도움을 제공해야 합니다.
우선, E.aedis에 감염된 A.Aegypti 계란을 1리터의 탈온화 된 물로 애벌레 사육 트레이에 넣고 50 밀리그램의 생선 음식을 추가하십시오. 14시간 빛, 10시간 암울한 주기로 모기를 섭씨 27도, 상대 습도 80%로 보관하십시오. 부화 후, 유충의 밀도를 트레이 당 약 100 애벌레로 줄여 필요에 따라 새로운 트레이를 만듭니다.
각 트레이에 마른 고양이 사료 를 넣습니다. 고갈 될 때 음식을 보충하지만 과도한 음식을 제공하지 않습니다. 3일마다 200밀리그램의 고양이 사료 1개가 충분합니다.
감염된 애벌레가 3~4번째 별이 되면 감염되지 않은 A.aegypti 알을 새 트레이에 부화시습니다. 건강한 A.aegypti가 48~72시간 안에 3위까지 두 번째로 도달하는 것과 같은 밀도에서 모기를 사육합니다. 며칠 동안 건강한 계란을 부화하면 필요할 때 애벌레가 올바른 단계에 있음을 보장 할 수 있습니다.
단핵포지를 수확하고 정량화하려면 이송 파이펫을 사용하여 감염된 4번째 인스타 애벌레 10을 1.5 밀리리터 미세센트심분리기 튜브로 이동합니다. 이송 파이펫으로 사육수를 제거하고 깨끗한 탈이온 수의 약 1 밀리리터를 추가하여 한 번 애벌레를 씻으라. 세척수를 제거하고 10 개의 유충에 깨끗한 탈이온 화 된 물 500 마이크로 리터를 추가하고 유봉과 기계적 균질화를 사용하여 균질화하십시오.
10 마이크로리터의 균질계를 혈류계에 적재하고 포자를 400X 배율로 정량화합니다. 간 분말 1.2 그램, 브루어 효모 0.8 그램, 물 100 밀리리터를 혼합하여 신선한 애벌레 음식 슬러리를 만드십시오. 100초에서 3위 인스타 건강한 A.aegypti 애벌레를 150밀리리터 비커 또는 시편 컵으로 옮기고 파이펫으로 각 컵에 10번에서 10번씩 5번 10번을 추가합니다.
100 밀리리터의 최종 볼륨에 애벌레 음식 슬러리와 탈이온 물의 두 밀리리터를 추가합니다. 12~24시간 노출 후 유충을 사육 트레이로 옮킨다. 음식을 추가하고 성인기에 양육하십시오.
새끼를 위해 폐유를 모니터링하고 새끼를 케이지의 출현 컵으로 옮기. 설탕 사료 성인 광고 리비툼. BEI 자원을 통해 사용할 수있는 표준 프로토콜에 따라 혈액 공급 성인.
혈액을 공급하는 성인에게서 계란을 수집합니다. E.aedis의 수직 전송은 이 단계에서 발생합니다. 완료되면 오염을 방지하기 위해 10 %의 표백제와 오토클레이빙으로 E.aedis와 접촉한 모든 재료를 청소하십시오.
이 프로토콜은 A.aegypti 모기에 E.aedis를 전파하는 데 필요한 전체 절차를 보여줍니다. E.aedis에 감염된 A.aegypti 계란은 부화되었고 애벌레는 네 번째 인스타 단계로 사육되었습니다. 네 번째 인스타 단계에서감염의 시각적 징후는 감염된 애벌레의 지방 몸 전체에 걸쳐 백색 스포로시스트와 같은 관찰될 수 있었습니다.
유니뉴클레아테 포자는 4번째 인스타 애벌레로부터 500마이크로리터의 500마이크로리터에서 10개의 유충을 균질화하여 수확되었다. 이 포자는 piriform이고 400X 배율에서 쉽게 볼 수 있었습니다. 소글리터 당 4, 050 포자를 포자 수를 계산하고 이러한 포자는 수평 투과를 통해 건강한 애벌레를 감염시키기 위해 사용되었다.
감염 상태 및 25개의 filial 생성 애벌레의 E.aedis 하중은 부화 후 7일 후에 평가되었습니다. filial 세대에 있는 E.aedis의 수직 감염비율은 96%로 나타났고 7일 후에 감염된 개별의 평균 포자 하중은 3.31배 10배 에서 5분의 1로 이었다. 애벌레 스테이징을 적절히 조정하려면 양육 시간의 일부 변동성을 고려하는 것이 좋습니다.
또한 포자를 감지하지 못하면 다음 날 다시 시도하면 포자 수가 급격히 증가합니다. 행운을 빌어.
