포유류, 근육 섬유 수와 마찬가지로, 궁극적 인 근육 질량의 주요 결정 인자는 가금류 배아 발생 중에 확립됩니다. 이 방법을 통해 연구자들은 ovo 근형성과 근육 섬유 과형성의 조작에서 가금류를 연구 할 수 있습니다. 이 기술은 장비에 대한 투자가 거의 필요하지 않으며 근형성 조작을 연구하는 쉽고 상대적으로 저렴한 방법입니다.
이 기술을 처음 접하는 연구자들은 알을 제대로 배양하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 이 기술을 시연하는 것은 나 자신과 모건 그레이블리, 우리 실험실의 과학 대학원생 둘 다 될 것입니다. 실험을 시작하기 전에 품질이 좋지 않은 알을 검사하고 버리십시오.
선택한 계란에 개별 계란 번호를 할당하고 기록 한 다음 계란의 무게를 측정하십시오. 다음으로, 적절한 인큐베이션 트레이에 알을 넣고 섭씨 26.6도에서 상대 습도 40 %로 6 시간 동안 미리 배양하십시오. 인큐베이션 후, 인큐베이션 18일까지 인큐베이터 온도를 섭씨 37도에서 40% 상대 습도로 증가시키고 유지한다.
열 표면 온도계로 인큐베이터 전체에서 하루에 두 번 여러 알의 표면 온도를 측정하여 계란의 표면 온도가 섭씨 37도가되도록하십시오. 매 시간마다 회전하여 달걀의 위치를 계속 유지하십시오. 10 % ~ 12.5 %의 계란 체중 감소를 보장하려면 배양 첫 18.5 일 동안 매일 달걀 무게를 기록하십시오.
인큐베이션 10일째에, 원고에 기재된 바와 같이 오보 주사 처리에서 각 100 마이크로리터에 필요한 니코틴아미드 리보시드 용액을 준비하고 수조에서 섭씨 37도에서 용액을 유지한다. 인큐베이터에서 한 번에 하나의 트레이로 달걀을 제거하고 따뜻한 수건으로 덮은 후 각 달걀을 양초로 촛불로 만들어 노른자 주머니를 찾습니다. 달걀 껍질 깊숙이 1 센티미터 깊이에 멸균 20 게이지 2.54 센티미터 피하 주사 바늘을 삽입하기 전에 70 % 에탄올로 주사 부위를 청소하여 100 마이크로 리터의 멸균 식염수로 니코틴 아미드 리보시드 처리의 할당 된 용량을 노른자 주머니에 주입하십시오.
과도한 수분 손실을 피하기 위해 주사 부위를 절대 방수 테이프의 작은 조각으로 즉시 덮었습니다. 모든 계란이 치료를 받으면 트레이를 인큐베이터에 다시 넣으십시오. 잠복기 18 일에 쟁반에서 알을 꺼내 처리에 따라 할당 된 부화 상자에 넣은 다음 부화 상자를 모든 알이 부화 할 때까지 또는 부화 23 일까지 습도가 60 %로 증가하여 인큐베이터에 놓습니다.
샘플 수집 전에 머리를 아래로 집어 넣고 몸 아래에 다리를 얹은 병아리를 옆으로 놓고 머리 꼭대기에서 꼬리까지의 길이를 측정 한 다음 부리 뒤쪽에서 두개골 뒤쪽까지 머리 길이의 한쪽 귀 구멍에서 다른 귀 구멍까지의 머리 너비를 측정하여 안락사 된 병아리의 엉덩이를 엉덩이로 만듭니다. 머리 둘레를 평가하려면 한쪽 귀 구멍에서 다른 귀 구멍으로 두개골 주위에 비 탄성 끈을 감싼 다음 메트릭 눈금자로 문자열의 측정을 구하십시오. 같은 방식으로, 측정을 획득하기 위해 미터법 통치자에 끈을 놓기 전에 날개가 신체와 접촉하는 곳 아래에 가슴 주위에 끈을 감싸서 가슴 둘레를 결정하십시오.
병아리의 가슴에 70 % 에탄올을 뿌리고 손가락으로 깃털과 피부를 당겨 가슴 근육을 드러내고 디지털 캘리퍼로 측정하십시오. 날개가 몸에 닿는 가슴을 가로 질러 가슴 너비를 측정하고 쇄골 바닥에서 뚱뚱한 패드 상단까지의 가슴 길이를 측정하십시오. 오른쪽 가슴 뼈 주요 근육을 추출하려면 외과 용 가위 또는 메스와 포셉을 사용하여 용골 뼈를 따라 자르고 체벽에서 근육을 방출하십시오.
가슴 주요근육을 제거한 후 Popsicle 스틱에 근육을 평평하게 놓아 디지털 캘리퍼를 사용하여 측정값을 수집합니다. 두개골에서 근육의 꼬리 부분까지의 근육 길이와 근육의 두개골 부분의 가장 넓은 부분에서 근육 너비를 찾으십시오. 근육 두께를 결정하려면 포셉으로 유방을 집어 들고 근육의 두개골 부분의 가장 두꺼운 부분을 측정하십시오.
측정으로 완료되면, 오른쪽 및 왼쪽 가슴 가슴 주요 근육은 영하 80도에서 최대 일 년 동안 추가 분석을 위해 저장 될 수 있습니다. 배아에 네 개의 니코틴아미드 리보시드 투여량 또는 용량을 주사하여 난소 공급에서의 효과를 연구하였다. 18일째 배아와 부화한 병아리의 체중에 대한 투여 효과가 없는 것으로 관찰되었다.
유사하게, 하루 종일 18개의 배아에 대한 가슴 결핵 주요 근육 측정에서 용량 효과는 검출되지 않았다. 부화 한 병아리의 경우, 가슴의 주요 근육 길이 및 너비 측정에 대한 용량 영향은 없었습니다. 그러나 복용량은 근육 무게와 깊이에 영향을 미쳤습니다.
니코틴아미드 리보시드를 주입하지 않은 배아에서 발달된 병아리는 501, 000 밀리몰 니코틴아미드 리보시드를 주입한 배아의 병아리보다 무게가 적은 가슴 근육을 가지고 있었다. 0 및 250 밀리몰 니코틴아미드 리보시드를 주입한 배아의 병아리는 501, 000 밀리몰 니코틴아미드 리보시드를 주입한 배아의 병아리보다 펙토랄리스 주요 깊이가 적었다. 강력한 실험을 수행하는 열쇠는 결함이없고 균일 한 알을 선택하는 것입니다.
이것은 모든 효과가 치료를 촉매한다는 것을 보장 할 것입니다. 가슴 주요 근육의 수확으로 조직학을 사용하여 근육 섬유 형태 측정을 측정 할 수 있으며 유전자 및 단백질 발현 분석을 위해 총 RNA 및 단백질을 추출 할 수 있습니다. 우리는 현재이 기술이 처리 된 새의 신선한 육질의 성장 성과에 미치는 영향을 연구하고 있습니다.
