이 프로토콜은 유전자 환경 상호 작용의 효력을 포함하여 파리에서 불리한 연관 학습 및 기억 통합을 공부하기 위해 허용하는 간단한 행동 분석법을 기술합니다. 여기에 제시된 분석법은 몇 가지 사용 가능한 소모품으로 쉽게 조립할 수 있는 메모리 메커니즘을 연구하기 위한 간단하고 재현 가능한 비용 효율적인 절차입니다. 이 분석은 다양한 유전, 약리학 및 식이 조작으로 인한 기본 학습 및 기억 장애에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다.
이 절차를 시연하는 것은 모건 테더와 스티븐 브래들리, 내 실험실에서 학부 학생이 될 것입니다. 시작하려면 14 밀리리터 폴리프로필렌 배양 튜브 내에서 바닥에서 약 4밀리미터 의 구멍을 수직으로 드릴링합니다. 배양 튜브의 상부를 제거하여 하부 구획으로 활용되는 45mm 바닥 조각을 만듭니다.
1000 마이크로리터 파이펫 팁의 상단을 잘라 12 밀리미터 조각을 만듭니다. 파리를 전송하는 로딩 도크로 배양 튜브의 4밀리미터 구멍에 조각을 삽입합니다. 투명한 비닐 튜브 15mm 조각을 자르고 반대쪽 끝에서 아래쪽 및 상부 구획을 튜브에 삽입합니다.
2갈래 조절 가능한 클램프를 사용하여 어셈블리를 수직으로 부착합니다. 충격 튜브가 수직으로 부착된 상부 구획을 찾습니다. 충격 튜브를 전기 자극기와 연결하여 감전을 생성합니다.
얼음 차가운 블록을 사용하여 3-4일 된 파리를 고정하고 실험 24시간 전에 음식과 함께 별도의 바이알로 옮춥시다. 텍스트 원고에 설명된 대로 모든 바이알에 코드를 할당합니다. 공기를 끌어입 흡입기로 부드럽게 빨아.
로딩 도크에 가볍게 불어 비행을 입금하고 즉시 1 분 타이머와 스톱워치를 시작합니다. 자극기켜서 충격튜브에 날아갈 때 감전을 전달합니다. 스톱워치를 눌러 첫 번째 대기 시간을 기록합니다.
비행이 충격 튜브에 다시 들어가면 추가 충격을 전달합니다. 탈리 또는 아두이노 기반 카운터를 사용하여 1분 간의 시험 에서 충격 수를 기록합니다. 1분 간의 시험 끝에 유리병으로 날아갑니다.
대기 시간, 수신된 충격 수 및 동작의 주목할 만한 변화를 기록합니다. 70% 에탄올을 사용하여 하부 및 충격 구획을 청소하십시오. 보풀이 없는 청소 조직으로 닦아 헤어 드라이어를 사용하여 말리십시오.
다음 비행으로 재판을 반복합니다. 실험을 완료한 후 물과 무취 세제로 하부 구획을 청소하십시오. 70%에탄올을 사용하여 낮음 및 충격 구획을 닦아내고 밤새 공기 건조를 닦아냅니다.
24시간 후에 위의 과정을 반복하여 두 번째 시험을 수행하십시오. 비슷한 순서로 파리를 테스트합니다. Drosophila 멜라노가스터 수컷 파리에서 수동 회피 분석법을 수행 한 후, 결과는 대기 시간이 증가하고 충격의 수가 감소하여 파리가 상부 구획과 감전 사이의 연관성을 배웠다는 것을 보여줍니다.
주파수 분포는 대부분의 파리가 상부 구획에 들어가 첫 번째 시험에서 1 ~3 개의 충격을받는 것으로 나타났습니다. 네 번째 시험으로 대부분의 파리는 상부 구획에 들어가지 않고 충격이 없습니다. 후속 실험에서, 시험 기간은 대기 시간에 대한 주파수 분포가 첫 번째 시험에서 60 초 이내에 상부 구획에 진입하지 않으면 일반적으로 전혀 입력되지 않는다는 것을 명확하게 보여주었기 때문에 1 분으로 감소되었다.
수동 회피 분석 실험은 Drosophila simulans 남성과 여성 파리에서 반복되었다. 결과는 파리가 남성과 여성의 파리의 연체 및 충격에 대한 주파수 분포의 변화에서 분명하게 로 수동 회피 행동을 학습에 효과적이었다는 것을 보여 주었다. 늦은 시간 및 남성과 여성 사이의 충격의 수를 비교하는 것은 어떤 통계적으로 유의한 차이를 밝히지 않았다.
그러나, 여성 파리는 각 재판에서 약간 더 많은 충격을 받았다. 시험 2와 3에서 그루밍 시합의 분석은 그루밍의 총 기간이 시험 1에서 시험 3에 여성 파리에서 현저하게 감소한다는 것을 밝혔습니다. 이것은 파리가 설치류 불안 같이 행동을 평행하게 하는 행동 스트레스를 경험한다는 것을 건의합니다.
수동 적인 회피 행동에 서양 규정식과 비행 운동의 효력의 비교는 서양 규정식이 대기 시간을 감소시키고 서양 규정식이 파리에서 역경 연관 학습을 손상한다는 것을 나타내는 충격의 수를 증가시킨다는 것을 보여줍니다. 반대로, 비행 운동은 서양 식단의 부정적인 영향을 완화시켰습니다. 이 절차를 시도 할 때, 파리스트레스를하지 기억하십시오.
응력 파리는 너무 빨리 상부 구획에 들어가거나 전혀 들어가지 않습니다. 모든 실험은 동일한 환경 조건하에서 당일 같은 시간에 수행해야 합니다. 이 기술은 연구원에게 파리에서 학습및 메모리 통합의 본질적인 기계장치를 해부하는 데 사용할 수 있는 새로운 간단한 분석법을 제공합니다.
