Técnica de Alto Rendimento em Tempo Real para Quantificar a Formação de Armadilhas Extracelulares de Neutrófilos em Neutrófilos Humanos

Nossa pesquisa se concentra nos neutrófilos, que são socorristas essenciais no sistema imunológico e desempenham um papel significativo em várias doenças. Nas últimas duas décadas, tornou-se claro que os neutrófilos contribuem para o desenvolvimento de câncer, doenças autoimunes e outras condições inflamatórias, interrompendo a imunorregulação. Isso inclui a formação de armadilhas extracelulares neutrofílicas, redes, estruturas semelhantes a teias que respondem à inflamação e podem ser alvo de terapia nessas doenças.

No entanto, apesar de algumas moléculas promissoras visando redes, em desenvolvimento ainda não há terapia aprovada que afete especificamente esse mecanismo. Isso é pelo menos parcialmente atribuível à falta de um método de quantificação objetivo, imparcial, reprodutível e de alto rendimento para a formação de redes. Nosso protocolo emprega imagens de células vivas de duas cores para analisar o comportamento de neutrófilos usando corantes permeáveis e impermeáveis à membrana para rastreamento preciso da formação de líquidos.

Este método distingue entre neutrófilos formadores de rede e neutrófilos saudáveis com base na integridade da membrana e fornece uma diferenciação clara dos tipos de morte celular através de alterações morfológicas absorvidas na imagem com contraste de fase. Este método supera os problemas de técnicas previamente relatadas para quantificar a formação de rede e fornece uma quantificação de rede eficiente, reprodutível e precisa de forma automatizada. Este método ajudará no desenvolvimento de drogas direcionadas a neutrófilos, dando a capacidade de rastrear vários alvos terapêuticos contra a formação de redes de uma maneira de alto rendimento.