Comece posicionando o animal anestesiado na plataforma cirúrgica. Aplique pomada lubrificante para os olhos nos olhos de cada animal para evitar o ressecamento da córnea durante a cirurgia. Desinfete o local da cirurgia raspada com três rodadas alternadas de iodopovidona e isopropanol.
Em seguida, posicione um rolo de papel toalha ou um tubo de 1,5 centímetro de diâmetro sob o animal apenas rostral aos quadris. Cubra o animal com um campo fenestrado, centralizando a fenestração sobre a coluna lombar para acesso cirúrgico. Para verificar a profundidade da anestesia no animal, aperte cada pata e observe a ausência de qualquer resposta de retirada.
Em seguida, usando uma lâmina de bisturi número 11, faça uma incisão na pele de três centímetros de comprimento na linha média das vértebras L2 a L6. Agora insira uma tesoura cirúrgica curva estéril entre o músculo e a pele e abra suavemente as pontas para separar a pele do músculo subjacente. Remova a fáscia que cobre os processos espinhosos das vértebras L2 a L5.
Pipete 25 a 35 microlitros do vetor AAV9 na tampa de um tubo de microcentrífuga estéril. Desenhe todo o volume do vetor da tampa para a seringa de insulina. Em seguida, identifique os processos espinhosos L5 e L4 no animal.
Posicione a agulha da seringa à esquerda do processo espinhoso L5, alinhando-a com a extremidade caudal do processo. Avance a agulha da seringa para frente cerca de oito milímetros sobre a lâmina L5 e, em seguida, sob a lâmina L4 na cisterna lombar até que o contato com o osso seja feito. Pressione o êmbolo da seringa lentamente por aproximadamente cinco segundos.
Em seguida, retire lentamente a agulha do local de inserção. Usando uma sutura 4-0 ou grampos cirúrgicos, comece a fechar a incisão em uma extremidade da ferida. Para avaliar o sucesso da injeção de corante, após a eutanásia do animal, faça uma incisão de quatro centímetros de comprimento no músculo paralelo à coluna vertebral em ambos os lados dos processos espinhosos.
Use uma pinça de coluna ou tesoura para remover delicadamente o músculo entre os processos espinhosos. usando um rongeur, extraia os processos espinhosos da L6 para a coluna torácica inferior. Insira a ponta inferior do rongeur sob a lâmina L5 e remova metodicamente o osso que recobre a medula espinhal, dando várias mordidas nele.
