Isolamento de Núcleos do Tecido Adiposo Intermuscular Humano e Sequenciamento de RNA de Núcleo Único a Jusante

Nosso grupo de pesquisa está tentando entender a composição celular e os perfis transcricionais específicos da célula do tecido adiposo intermuscular ou IMAT em humanos. O IMAT é na verdade um depósito adiposo ectópico que reside entre e ao redor das fibras musculares. A tomografia computadorizada e a ressonância magnética foram capazes de quantificar o volume do IMAT e mostraram recentemente que ele aumenta com a idade e o IMC, e também está associado a doenças degenerativas musculares.

Estudos de secretoma in vitro mostraram recentemente que as proteínas secretadas por IMAT têm a capacidade de influenciar a sensibilidade à insulina, perfis inflamatórios e também expressões de proteínas contráteis no músculo esquelético humano. A quantidade limitada de tecido IMAT coletado durante as biópsias e a natureza carregada de lipídios dos adipócitos tornam esse tecido incompatível com a digestão tecidual e o RNA-Seq de célula única. Portanto, queríamos desenvolver um protocolo que realizasse o isolamento de núcleos em pequenas quantidades de tecido que pudesse ser usado em RNA-Seq de núcleo único a jusante.

Este protocolo permitirá aos pesquisadores determinar as alterações transcricionais composicionais e específicas da célula que ocorrem no IMAT em diferentes estados de doença metabólica e em resposta a intervenções. Esperamos que essas informações sejam cruciais no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para ajudar a aliviar a doença metabólica, visando diretamente o IMAT ou seus fatores secretados. O campo carece severamente de dados sobre a biologia do IMAT, suas origens celulares e comunicação com outras células, residentes dentro e fora do IMAT, bem como suas respostas moleculares a intervenções no estilo de vida, como dieta e exercícios ou farmacoterapia.

Todas essas são questões-chave de pesquisa para o nosso grupo.