Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de lesões de queimaduras sobre o manuseio de feridas de guerra ou como tratar feridas queimadas após o acidente de incêndio. A principal vantagem desse modelo de lesão por queimadura suína é o grau de similaridade entre a estrutura anatômica e a fisiológica do tecido suíno e humano da pele. Embora este método possa fornecer uma visão dos efeitos dos curativos de polissacarídeos de cálcio na cicatrização de feridas de queimadura, ele também pode ser aplicado a estudos de manejo de queimaduras.
Antes de entregar a queimadura, raspe e umidade uma área de pele de aproximadamente 25 centímetros de largura desde a coluna vertebral até a axila em ambos os lados da coluna vertebral de um porco adulto anestesiado. Em seguida, esfregue a pele exposta com povidone-iodo por aproximadamente cinco minutos. Use gaze estéril molhada para remover o sabonete povidone-iodo e esterilizar a pele limpa com loção povidone-iodo.
E use uma caneta de marcação cirúrgica para demarcar o centro de seis locais de queimaduras no dorso do animal. Em seguida, cubra o animal com cortinas cirúrgicas estéreis, tendo em conta que a distância entre cada área é pelo menos maior do que o raio da área. Quando todas as áreas tiverem sido marcadas, encha um ferro de solda modificado equipado com uma área plana de aproximadamente nove centímetros quadrados com 50 mililitros de glicerina, e insira um termômetro eletrônico no ferro para monitorar a temperatura.
Depois de aquecer o ferro a 137 a 139 graus Celsius em uma placa quente, pressione suavemente o ferro em cada área marcada por 30 segundos por área para criar seis feridas de queimadura uniformes. Quando o ferro aquecido tocar a pele, o calor se dissipará imediatamente através da superfície da área queimada, por isso certifique-se de pré-aquecer o ferro e a glicerina por pelo menos 10 minutos antes de aplicar as queimaduras. Em seguida, lave as feridas com solução salina de 0,9%, e meça e regise as dimensões da ferida por fotomicrografia.
Quando todas as feridas tiverem sido medidas, aplique os curativos diretamente em cada ferida, seguido pela aplicação de uma película impermeável sobre a camada interna de curativo para servir como uma barreira contra a penetração bacteriana. Em seguida, grave um pedaço de gaze de 5 centímetros de espessura sobre cada ferida para servir como a camada média do curativo, e fixe a gaze com uma camada externa de gesso adesivo, estendendo o gesso ao tronco para evitar o deslocamento do curativo. Troque os curativos clínicos a cada dois dias durante os primeiros 10 dias, depois duas vezes por semana até o dia 42, limpando e medindo as feridas de acordo com a Escala de Cicatrizes de Vancouver antes de cada reaplicação do curativo.
Co swab a ferida para testes antibacterianos nos dias pós-queimadura zero, sete, 21 e 42, e coloque os cotonetes em 100 mililitros de solução salina 0,9%. Vórtice suavemente os cotonetes para obter uma suspensão homogênea e diluir serialmente a solução celular resultante. Em seguida, a placa 100 microliters de cada diluição em meio seletivo ou não seletivo, e incubar a cultura da ferida em condições aeróbicas a 37 graus Celsius por 24 a 72 horas.
No final da incubação, a placa 10-microliter alíquotas de cada cultura de diluição em triplicado em placas de ágar sanguíneo suplementada com 5% de sangue de ovelha para cultura durante a noite a 37 graus Celsius. Na manhã seguinte, use um marcador e uma pequena régua para dividir o fundo de cada prato em quatro quadrantes iguais, e determinar o número de unidades formadoras de colônias em cada quadrante sob um microscópio dissecando. Neste experimento representativo, a re-epitelialização das queimaduras foi avaliada pela inspeção bruta no dia 42 pós-queimadura.
Observou-se redução significativa na área da ferida em relação ao dia zero. A taxa de cicatrização foi definida como a maior distância média de margem de ferida do centro da ferida dividida pelo tempo de fechamento completo da ferida, demonstrando mais de 73% de fechamento de feridas no dia após a queimadura 42. As marcas de cicatrizes de Vancouver atingiram o pico no dia 21 pós-queimadura e diminuíram para abaixo do tamanho inicial da ferida no dia 42 pós-queimadura.
O exame histológico das amostras de pele colhidas no dia 42 confirmou que foram alcançadas queimaduras de espessura total e que as feridas pareciam estar totalmente curadas. A necrose resultante das queimaduras pode ser observada na epiderme, derme e componentes dérmicos da ferida sem afetar significativamente o músculo subjacente. A espessura abaixo do curativo experimental foi de 5,4 milímetros, e foram observadas manchas dérmicas e infiltração linfocítica.
As culturas bacterianas de cotonetes de feridas coletadas nos dias de queimadura zero, sete, 21 e 42 demonstraram um ligeiro aumento nas unidades formadoras de colônias dos dias zero para 21 que foram significativamente aumentadas no dia 42, confirmando que este modelo suíno de lesão grave pode ser usado para monitorar o desempenho clínico de curativos experimentais. Ao tentar esse procedimento, é importante lembrar de saber como manusear o animal e, em seguida, monitorar adequadamente o sinal vital do animal durante o período de eventos. Após este procedimento, outros métodos como experimentos de crescimento bacteriano podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre como os materiais naturais de polissacarídeo funcionam em casos de queimaduras graves.
Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo da cicatrização de feridas queimadas explorarem os efeitos dos curativos naturais de polissacarídeos de cálcio na cicatrização da pele humana. Não se esqueça que trabalhar com ferro aquecido e glicerina pode ser extremamente perigoso e que precauções como equipamentos de funcionamento devem ser sempre tomadas durante a realização do procedimento.
