A simultânea e as interações entre o cérebro e a microbiota intestinal permanecem desconhecidas. Use esta técnica, alterações na microbiota intestinal após lesão cerebral traumática em camundongos podem ser examinados. A principal vantagem dessa técnica é que ela é relativamente simples e eficiente.
Demonstrando o procedimento será Wendong Você, um estudante de pós-graduação do meu laboratório. Para indução traumática de lesão cerebral, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato anestesiado, e aplique pomada nos olhos do animal. Após a barba, desinfete a pele exposta do couro cabeludo com 70% de etanol antes de incisar o couro cabeludo em um plano sagital.
Usando fórceps, retraia a incisão em ambos os lados e separa ligeiramente o periósteo. Use um marcador para desenhar um círculo de três milímetros de diâmetro na área parietal direita do crânio a dois milímetros da linha média. Use uma broca elétrica para penetrar cuidadosamente o crânio sem danificar a dura.
Remova a aba óssea para expor uma janela óssea de três milímetros e coloque uma cânula de lesão plástica sobre a craniotomia. Depois de cimentar a cânula no crânio com acrílico dental, use uma seringa de cinco mililitros para encher a cânula com soro fisiológico estéril de 0,9%, tomando cuidado para evitar bolhas. Ligue o osciloscópio e o amplificador.
Confirme que o tubo de alta pressão do dispositivo de lesão de percussão de fluido lateral está livre de bolhas de ar, e entregue cerca de 10 pulsos de teste, até que o dispositivo dê um sinal constante. Ajuste o ângulo da posição inicial do pêndulo para atingir uma intensidade de pulso de cerca de duas atmosferas padrão e conecte a cânula da lesão ao dispositivo de lesão de percussão do fluido lateral. Puxe o gatilho para liberar o pêndulo, induzindo a lesão cerebral.
Em seguida, obtenha e transmita um pulso para a dura dura através de todo o sistema de tubos fechado e cheio de fluidos. Após indução de lesão cerebral, remova a cânula e sutura a incisão. Em seguida, coloque o rato em uma almofada de aquecimento com monitoramento até que ele seja ambulatorial, antes de devolver o animal à sua gaiola de origem com acesso a ad libitum à comida e água.
Nos pontos de tempo experimentais indicados, exponha os intestinos de acordo com os protocolos padrão e use fórceps atrauáticos para separar suavemente o caeco dos outros tratos intestinais. Quando o tecido estiver localizado, corte o caecum com uma tesoura afiada e extraia manualmente o conteúdo do caeco em um curativo estéril. Em seguida, transfira o conteúdo para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro, para armazenamento de menos 80 graus Celsius até a análise do microbioma.
Sequenciamento de DNA recombinante 16S demonstra uma diversidade reduzida na microbiota de caecum em camundongos três dias após lesão cerebral traumática, com a taxa mais abundante dentro do conteúdo de caecum dos grupos de lesão cerebral sham e traumática mostrados na figura. Além disso, o dimensionamento multidimensional não métrico revela alterações na composição da microbiota do caecum após lesão cerebral traumática. Lembre-se de manter a duraza intacta ao perfurar o crânio, e ser gentil ao localizar e separar o caeco de outros tratos intestinais.
Após este procedimento, a coloração e análise de hematoxilina e eosina pode ser realizada para examinar a alteração histológica e a resposta inflamatória dentro dos tratos intestinais após lesão cerebral traumática.
