O modelo de transplante de fígado ortotópico de ratos é uma ferramenta poderosa para estudar múltiplos aspectos do transplante hepático. De uma resposta imune sobre a infecção, para aspectos técnicos do procedimento. As principais vantagens dessa técnica são que ela pode reduzir complicações, representando melhor o transplante de fígado e melhorar a sobrevivência do receptor.
Este protocolo modificado de transplante hepático ortotópico de ratos imita de perto aspectos do transplante de fígado humano e servirá como modelo de pesquisa variável e clinicamente relevante. Esperamos que através da demonstração visual, os espectadores possam aprender todos os detalhes e encurtar a curva de aprendizado para dominar a habilidade de microcirurgia necessária para essa técnica. Depois de injetar 300 unidades internacionais de sódio heparina na veia cava inferior intrahpática de um rato anesthetizado de 12 a 14 semanas, faça uma incisão de cinco milímetros abaixo da bifurcação do ducto biliar, e insira o stent do ducto biliar no ducto biliar comum.
Fixar o stent com uma ligadura de seda 7-0, um milímetro acima da incisão, e uma ligadura 10 milímetros abaixo da bifurcação. Corte o ducto biliar entre os dois laços e exponha a artéria hepática adequada. Divida a artéria gastroduodenal entre duas ligaduras de seda 7-0, e exponha a artéria gástrica esquerda, artéria esplênica e tronco celíaco.
Em seguida, corte a artéria gástrica esquerda, artéria esplênica e tronco celíaco entre as amarras da artéria. Use uma seringa de 20 mililitros equipada com uma agulha calibre 21,5 para injetar lentamente 20 mililitros de quatro graus Celsius A solução de lactato de Ringer na veia portal. Para preparar o fígado doador, abra a bifurcação do tronco celíaco, a artéria esplênica e a artéria gástrica esquerda para formar um manguito de manga arterial maior e insira o stent arterial de 1,5 milímetros de comprimento 24 milímetros na artéria hepática comum do doador através do punho.
Em seguida, fixar o stent com um 8-0 ligadura de polipropileno e lave o stent com a solução de lactato de Ringer. Depois de expor a veia portal de um receptor de rato de 12 a 14 semanas, divida o ducto biliar receptor a 0,5 centímetros abaixo de uma bifurcação de ladrilho, e insira um stent do ducto biliar no ducto biliar comum distal. Exponha as artérias hepáticas esquerda, média e direita e amarre os vasos distal à bifurcação hepática da artéria.
Corte as artérias perto do fígado acima das amarras e coloque um longo pedaço fino de gaze atrás da super hepática veia cava inferior. Coloque um suporte de vena cava intraháptica impresso em 3D atrás da cava vena intrahpática e use uma sutura de monofilamento não absorvível Tenno para costurar as extremidades da alça impressa 3D juntas. Amarre livremente uma ligadura de seda 7-0 abaixo do suporte impresso em 3D entre a veia intrahpática cava e a veia portal, e aperte a veia intraháptica cava logo acima da veia renal direita abaixo do suporte de cava impresso em 3D.
Fixar a veia do portal logo acima da veia pilêmica e abaixo do suporte PV impresso em 3D. Usando uma seringa de três mililitros com uma agulha calibre 27 presa, lave dois mililitros de 37 graus Celsius A solução de lactato de Ringer através da bifurcação da veia portal, e fixar a veia super hepática cava acima do fígado com um grampo kitzmiller. Em seguida, corte abaixo do grampo o mais próximo possível do fígado e corte acima dos suportes impressos em 3D tanto para a veia portal quanto para a veia cáptica inter hepática cava para remover o fígado receptor.
Para transplante de fígado doador, oriente cuidadosamente o fígado doador dentro da cavidade corporal do receptor de tal forma que uma anastomose de paralelepípedo superior possa ser criada. Insira a braçadeira de portal do doador na veia do portal do receptor e aperte a gravata de seda 7-0. Remova o grampo atrauático da cava vena super hepática e remova o clipe microvascular para a veia portal.
Depois de re-perfumar o fígado com sangue quente, insira o receptor intraháptico vena cava no receptor intrahepático vena cava e proteja o vaso com a gravata de seda 7-0. Em seguida, remova o clipe de vena cava intraháptica do doador antes de remover o clipe do receptor. Para realizar uma anastomose arterial, corte a porção do tronco celíaco do doador que se estende além do stent, e aperte a artéria hepática adequada do receptor.
Corte a gravata no final e qualquer tecido extra ao redor do vaso. E use a solução de lactato de Ringer para lavar os lúmens das extremidades do doador e do vaso receptor. Usando uma agulha curva, coloque uma sutura de 10-0 ethilon através do aspecto esquerdo da artéria hepática do doador, 2,5 milímetros acima do orifício distal do stent, e saia pela extremidade do stent.
Transfixe a artéria hepática adequada do receptor 0,5 milímetros abaixo do orifício do vaso do lado esquerdo da embarcação, para o lado direito da artéria. Coloque a próxima sutura através da parede direita da artéria hepática do doador de dentro para fora, a uma distância do orifício de stent idêntico ao ponto original, e puxe para cima nas duas extremidades do monofilamento nãoabsorbável 10-0 para deslizar o receptor artéria hepática adequada para cima, e para o stent da artéria hepática hepática. Em seguida, amarre o monofilamento 10-0 nãoabsorbável consigo mesmo sobre a artéria hepática do doador.
Lave os dutos biliares do receptor e do doador e insira o stent dos dutos biliares do doador no ducto biliar receptor. Em seguida, aperte a gravata que foi previamente colocada ao redor do ducto biliar receptor. Neste experimento representativo, o modelo de transplante de fígado ortopédico da artéria não hepática demonstrou taxas de sobrevivência de 50 e 37,5%, em 21 dias e 60 dias, após a operação, respectivamente.
Em contrapartida, o procedimento otimizado de reconexão da artéria hepática aumentou significativamente a sobrevivência a longo prazo. A análise histológica de um subconjunto representativo de animais transplantados sem reconexão da artéria hepática revelou sinais de lesão hepática hipóxica com necrose lobular central, nos dias seis e treze pós-transplante. A necrose hepática extensiva foi associada a níveis tremendamente elevados de imunotransferidos de alanina e amino transferase aspartate nesses animais.
Em contraste, ratos transplantados com reconexão da artéria hepática não apresentaram sinais de lesão hepática e análise histológica revelou uma estrutura normal de parenchyma hepática, com acini organizado, lobulos, artérias e ductos biliares. Além disso, a análise histológica dos fígados de ratos modelo de reconexão da artéria não hepática revelou alterações reativas após lesão hepática hipóxica. Incluindo proliferação de ducto biliar de mercado, fibrose e inflamação do portal peri, e parenchyma hepático distorcido.
Este protocolo pode ser adaptado para estudar muitos aspectos imunológicos e cirúrgicos do transplante hepático e pode servir como modelo para testar novas intervenções terapêuticas relevantes para o transplante.
