O objetivo geral deste procedimento é criar um modelo de murina reprodutível de ferida de queimadura de espessura total reconstruída com um enxerto de pele alérgica. A pele é dividida em dois componentes, a epiderme e a derme. Abaixo da dermis está a gordura subcutânea, que cobre osso, tendão ou fáscia.
A classificação de espessura da lesão por queimadura é frequentemente usada para definir a extensão da profundidade da lesão por queimadura. Queimaduras superficiais envolvem apenas epiderme, queimaduras de espessura parcial superficial envolvem epiderme e apenas pelourinho ou derme superior. Queimaduras de espessura parcial dérmica profunda envolvem epiderme e derme, a derme reticular contendo vasos sanguíneos, folículos capilares, óleo e glândulas sudoríparas.
Queimaduras de espessura total são caracterizadas pelo evidente envolvimento de toda a espessura da pele e possivelmente tecido subcutâneo. Este tipo de ferida só pode curar por contração ou com enxerto de pele. O objetivo geral deste procedimento foi criar uma ferida de queimadura de espessura total e reconstruída com um enxerto de pele de espessura total.
Isso foi conseguido colocando um bloco de latão circular pré-aquecido a 80 graus Celsius e aplicado na pele da boca durante a duração de 20 segundos. O tecido necrosado foi cirurgicamente extirpado 24 horas após a lesão da queimadura. Enxertos de pele de espessura total colhidos da cauda de um rato doador foram colocados sobre as queimaduras excisadas.
Os enxertos serão então protegidos com um adesivo cirúrgico. Tanto os animais doadores quanto os receptores vêm da mesma variedade de camundongos. Camundongos biópsia são usados durante o estudo.
No entanto, também pode ser usada uma variedade de camundongos. Isso inclui camundongos imunocompetuntes sem pelos, que são particularmente úteis em estudos de cicatrização de feridas. Como depilação e inflamação associada, um mendigo fez e o recrescimento capilar não interfere na análise digital da imagem, quando as medidas da área e outros tipos de avaliação de feridas microscópicas.
Isso é especialmente verdade em modelos de infecção, onde nossa suspensão de biorganismo e bactérias é aplicada a este seu rosto da ferida e sinal de biorganismo é medido para indicar a taxa de crescimento bacteriano. O dispositivo de lesão térmica consiste em um bloco de latão circular feito sob medida medindo 10 milímetros de diâmetro pré-aquecido a 80 graus Celsius. A temperatura do bloco de latão é verificada usando uma câmera de imagem térmica infravermelha.
Para criar uma ferida de queimadura de espessura total, o bloco de latão é aplicado por 20 segundos usando uma pressão constante de 0,15 Newtons que é monitorada por manômetro digital. A analgesia multimodal é a melhor prática para o manejo da dor em procedimentos invasivos de pesquisa animal. O regime de administração ideal da analgesia inclui administração analgésica preventiva ou preventiva.
O paracetamol a três miligramas por refeição foi adicionado à água potável e fornecido 12 horas antes e por 72 horas após o procedimento. Buprenorfina a 0,05 microgramas por grama foi administrada subcutâneamente 30 minutos antes do procedimento e a cada seis horas para as primeiras 72 horas após o procedimento. A lidocaína a cinco miligramas por quilograma foi administrada subcutâneamente ao redor do dormente de cada rato 15 minutos antes do procedimento, um volume total de 200 microliters da Solução de Ringers Lactated a 5%dextrose foi injetado subcutâneamente antes do procedimento, e seis horas após o procedimento para evitar a desidratação.
Os camundongos eram nisertida usando uma injeção intraperitoneal de Xylazine a 10 miligramas por quilograma, e cetamina a 100 miligramas por quilograma. A profundidade anestésico pode ser avaliada através de uma pitada de dedo do dedo do sol. A anestesia aboli o reflexo pisca-pisca, impedindo o refresco da película lacrimal necessária para a manutenção da hidratação córnea e o olho continuamente exposto ao ar rapidamente fica desidratado, um lubrificante foi aplicado nos olhos para manter a hidratação da córnea.
O dorso de cada rato é cortado e creme de depilação é aplicado por um minuto para remover o cabelo. O animal nisertídeo é posicionado propenso a uma mesa plana e a queimadura térmica é criada aplicando um bloco de latão circular pré-aquecido a 80 graus Celsius durante a duração de 20 segundos. O rato é colocado de volta na almofada de aquecimento para mantê-lo aquecido e prevenir hipotermia, um efeito colateral frequente dos agentes anestésicos.
Uma vez recuperado da anestesia, o rato pode ser colocado em uma gaiola individual. 24 horas após a indução da queimadura. Tecido necrosado é cirurgicamente excita.
Quatro enxertos de pele doentes são colhidos da cauda do rato doador de eutanásia. Embora outro lado, então há sob cauda também pode estar usando o modelo do mouse. Assim, o grau de resposta humana pode variar dependendo da origem do enxerto de pele do doador.
Por exemplo, a pele do ouvido e das costas não têm mais em vendas em comparação com a pele da cauda e provocam uma resposta humana mais robusta, o que pode levar à rejeição do enxerto. A espessura dos enxertos de pele também pode ser levada em conta, pois pode desempenhar um fator determinante no enxerto bem sucedido da tomada de enxerto de pele. Pele segura como a da parte de trás tem maior probabilidade de falha devido às maiores demandas metabólicas do tecido.
Consequentemente, o sucesso relatado do enxerto de enxerto de enxerto de pele alergênica para a pele traseira é menor do que o sucesso relatado para o enxerto de pele da cauda. A anestesia foi induzida pela inalação de 5% isoflurane em 100% oxigênio a uma vazão de quatro litros por minuto, seguida pela manutenção da anestesia utilizando 2% Isoflurane a dois litros por minuto para a manutenção durante a cirurgia. A buprenorfina foi administrada no início do procedimento para fornecer analgesia pós-operatória.
As queimaduras foram preparadas com povidone-iodo, seguidas por 70% de álcool. Queimadura necrosada é extirpada com tesoura para remover o defeito circular de espessura total da pele, a camada panniculus carnosus da hipoderme é removida para criar um leito receptor de enxerto de pele estável alguns autores sugerem preservar a camada panniculus carnosus da hipoderme, pois acredita-se ser necessário para a revascularização do enxerto. No entanto, neste caso, a mobilidade dessa camada e as forças potenciais resultantes de tesoura entre o enxerto e o leito receptor podem se tornar problemáticas.
A remoção da camada panniculus carnosus não impactou negativamente o sucesso do procedimento de enxerto. Enxertos de espessura total são colhidos da cauda do rato doador eutanizado. A cauda é incisada longitudinalmente, permitindo que a pele seja separada do tecido mole subjacente.
A pele da cauda é então espalhada em uma placa de Petri cheia de salina estéril e normal e cortada em manchas circulares usando uma régua. Os enxertos são então transferidos para uma placa de Petri com uma gaze estéril encharcada em soro fisiológico normal e mantiveram os quatro graus até estarem prontos para serem enxertados. Os enxertos são então fixados no leito receptor com cola cirúrgica.
As lacunas entre enxerto de pele doador e cama de ferida receptora são suavemente pressionadas para alinhar as bordas da pele. As feridas estão vestidas dentro de gaze de parafina inerte e curativo secundário adesivo. Fotografias digitais, de feridas enxertadas foram tiradas em um, três e sete dias após ferimentos de queimadura.
Na autópsia, as queimaduras dorsais foram cirurgicamente excisadas à fáscia, as feridas foram bisseccionadas com metade fixada em formalina 10% tamponada, e processadas para histologia e imunismquímica. Enxertos de pele fornecem um sistema de andaimes para migração celular. A integração bem-sucedida do enxerto depende de fibroblastos eficientes e migração de queratinócitos da oferta de receptor para o enxerto doador que é lentamente degradado e substituído por células capazes de produzir a matriz extracelular.
A seção histológica das feridas em massa foi submetida à hematoxilina e à coloração de eosina. Imagens representativas de hematoxilina e eosina manchadas de feridas, mostraram que o comprimento da epiderme próxima destacada em amarelo é significativamente aumentado no sétimo dia, em comparação com o terceiro dia após a lesão por queimadura. Para estimar a taxa de re-epitelização, a área da ferida coberta com epiderme próxima foi expressa em percentagem de toda a ferida.
A matriz extracelular é o componente não celular da pele, que fornece andaimes para os componentes celulares. A matriz extracelular é composta de proteínas fibrosas, como colágeno e fibronectina. Essas moléculas aumentam a maturidade das feridas e mantêm a integridade estrutural da imunohistoquímica semiquantitativa da pele para o tipo um de colágeno, e manchas histológicas como o tricromo de Mason podem ser usadas para auxiliar a integridade da matriz extracelular a partir do micrografo fotográfico.
Métodos mais sofisticados, como a microscopia de segunda geração harmônica, surgiram como uma poderosa ferramenta para análise quantitativa da estrutura do colágeno. O enxerto de pele de Murine fornece um excelente modelo pré-clínico potencial para investigar a integração de gráficos no lado receptor. Este estudo demonstra um método confiável para realizar com sucesso enxertos de pele em um modelo de camundongo, bem como a avaliação histológica das feridas curativas.
