O protocolo permite detectar o efeito do tratamento sobre a suscetibilidade da malária dos vetores africanos da malária. Por exemplo, compostos destinados a bloquear a transmissão do humano para o mosquito. Essa técnica permite que os pesquisadores avaliem um grande número de compostos em condições laboratoriais, mesmo antes da toxicidade que as GATEs estão disponíveis.
Dissecções midgut podem ser desafiadoras no início, mas é preciso apenas alguma prática. Além disso, ser capaz de identificar oocistos nem sempre é fácil. Primeiro, usando um aspirador bucal, coloque 25 mosquitos anofelinos de gâmbia fêmeas não alimentados em um copo de alimentação de 350 mililitros.
Rotule os copos claramente para distinguir entre grupos de controle e tratamento. Escolha o número de copos por tratamento de acordo com o número de réplicas técnicas incluídas. Conecte o sistema alimentador de vidro a um banho de água e mantenha a temperatura a 37 graus Celsius.
Em seguida, prepare o intestino da vaca ou a membrana sintética enxaguando-o na água da torneira e cortando-o em pedaços que são montados para cada alimentador. Cubra a parte inferior de cada alimentador e aperte a membrana com uma faixa elástica. Para usar os copos de alimentação como xícaras de infecção, primeiro, mantenha a membrana em cima das redes dos copos.
Em seguida, coloque os copos de infecção debaixo dos alimentadores. Agora, adicione um mililitro de sangue infectado por gametocito aos alimentadores dos copos de controle, e sangue infectado por gametocito com um composto de teste aos alimentadores dos copos de tratamento. Em seguida, deixe os mosquitos se alimentarem por cerca de 40 minutos.
Após a alimentação, remova os alimentadores dos copos, enxágue os alimentadores e trate o excesso de sangue com hipoclorito. Em seguida, derrube todos os mosquitos no gelo por um a dois minutos, e selecione os mosquitos que fizeram uma refeição de sangue procurando abdômen inchado e vermelho. Substitua a água de açúcar que é dada em dias alternados para cada xícara de infecção por uma almofada de água 10% açucarada, e incubar os copos de infecção em uma câmara de biossegurança por oito a dez dias.
Oito a dez dias após a alimentação, derrube os mosquitos infectados colocando-os no gelo. Em seguida, transfira-os para tubos rotulados com 70% de etanol, mantendo o controle em cada grupo de tratamento em tubos separados. Mantendo os grupos de controle e teste separados, transfira os mosquitos para placas de Petri rotuladas forradas com papel filtro.
Adicione uma gota de PBS em um slide de vidro apropriadamente marcado e transfira um mosquito do papel filtro para a gota. Fixar o tórax do mosquito com agulha dissecando. Em seguida, remova o midgut puxando o sétimo segmento abdominal com fórceps, e transfira-o para uma gota de 0,1% mercurocromo em um novo slide de microscópio.
Deixe o intestino manchar por 8 a 10 minutos. Em seguida, coloque um deslizamento de cobertura no intestino manchado, e veja-o sob iluminação de campo brilhante em 20 a 40 vezes a ampliação. Registos oocistos por midgut para o controle e cada grupo de tratamento.
Neste estudo, o composto MMV1581558 restringiu significativamente o número de oocistos plasmodium falciparum no meio do mosquito Anopheles gambiae feminino em comparação com o controle. No grupo controle, a prevalência média de oocistos no midgut foi de 89% com intensidade média de 9,5 oocistos por midgut. Mas no grupo tratado MMV1581558, a prevalência média de oocistos foi de 36%, com intensidade média de apenas 1,5 oocistos por midgut.
Assim, o tratamento MMV1581558 resultou em 58% de atividade de bloqueio de transmissão e redução de 82% da atividade em todas as três réplicas biológicas. É fundamental garantir que os mosquitos se alimentem de uma cultura de gametocite saudável. Se estes são gametocitos imaturos, ou não gametocitos estágio cinco, a probabilidade de obter uma infecção no mosquito é limitada ou impossível.
O ensaio utiliza um método de identificação morfológica visual, no entanto, ensaios de quantificação molecular podem ser usados. Isso é, no entanto, mais caro e pode limitar seu uso em laboratórios com recursos restritos. Ter a capacidade de fazer essa técnica abre novos caminhos para avaliar a mudança da prevalência e intensidade da malária entre quase tudo no mosquito.
Por exemplo, comparando a capacidade vetorial das espécies.
