Caracterização de moduladores de receptores ativados por protease com um ensaio de mobilização de cálcio usando um leitor de placas

Nosso laboratório está trabalhando para entender como a modulação dos receptores ativados por protease pode inibir a inflamação. Desenvolvemos uma nova classe de pequenas moléculas chamadas parmodulinas que modulam a atividade de PAR1. O objetivo é descobrir parmodulinas com propriedades melhoradas para uso potencial como candidatos a fármacos, e também entender seu modo de ação.

Em estudos pré-clínicos com nossos colaboradores, determinamos que as parmodulinas podem ser particularmente promissoras para o tratamento de distúrbios causados pela tromboinflamação, incluindo doenças renais, hepáticas e cardiovasculares. Seu modo de ação também pode permitir o desenvolvimento de compostos com um perfil de segurança melhor do que o PAR1 anterior direcionado a candidatos a medicamentos. O receptor PAR1 é importante para a ativação de plaquetas, mas sua sinalização nas células endoteliais também é importante e relevante em inúmeras patologias.

Portanto, queríamos desenvolver um protocolo barato e conveniente para testar a atividade de parmodulinas e células endoteliais cultivadas. Estamos aqui para compartilhar um protocolo atualizado que mede a mobilização de cálcio que usa um leitor de placas padrão e não requer um manipulador automatizado de líquidos. É adequado para rastrear ligantes PAR1 em células endoteliais, mas, em teoria, pode ser usado para medir a atividade de quaisquer compostos que afetem a mobilização de cálcio.