АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

It is critical in neurobiology and neurovirology to have a reliable, replicable in vitro system that serves as a translational model for what occurs in vivo in human neurons. This protocol describes how to culture and differentiate SH-SY5Y human neuroblastoma cells into viable neurons for use in in vitro applications.

Аннотация

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and the neurosciences. Traditional in vitro experimental models used in neurobiology include primary neuronal cultures from rats and mice, neuroblastoma cell lines including rat B35 and mouse Neuro-2A cells, rat PC12 cells, and short-term slice cultures. While many researchers rely on these models, they lack a human component and observed experimental effects could be exclusive to the respective species and may not occur identically in humans. Additionally, although these cells are neurons, they may have unstable karyotypes, making their use problematic for studies of gene expression and reproducible studies of cell signaling. It is therefore important to develop more consistent models of human neurological disease.

The following procedure describes an easy-to-follow, reproducible method to obtain homogenous and viable human neuronal cultures, by differentiating the chromosomally stable human neuroblastoma cell line, SH-SY5Y. This method integrates several previously described methods1-4 and is based on sequential removal of serum from media. The timeline includes gradual serum-starvation, with introduction of extracellular matrix proteins and neurotrophic factors. This allows neurons to differentiate, while epithelial cells are selected against, resulting in a homogeneous neuronal culture. Representative results demonstrate the successful differentiation of SH-SY5Y neuroblastoma cells from an initial epithelial-like cell phenotype into a more expansive and branched neuronal phenotype. This protocol offers a reliable way to generate homogeneous populations of neuronal cultures that can be used for subsequent biochemical and molecular analyses, which provides researchers with a more accurate translational model of human infection and disease.

Введение

Возможность использования в пробирке модельных систем значительно расширили поля нейробиологии и неврологии. Клетки в культуре обеспечивают эффективную платформу для характеристики функциональности белка и молекулярные механизмы, лежащие специфические явления, чтобы понять патологию заболевания и инфекции, а также для выполнения предварительных оценок по тестированию на наркотики. В нейробиологии, основные типы моделей клеточных культур включают первичные нейрональные культуры, полученные от крыс и мышей, и клеток нейробластомы линий, таких как крысы B35 клеток 5, нейро-2A клетками мышиной 6 и крысы РС12 клетки 7. Хотя использование таких клеточных линий значительно продвинулась поле, существует несколько сопутствующих факторов, связанных с обработкой клетки и ткани, отличных от человека. Речь идет о понимании видоспецифические различия в метаболических процессах, фенотипы проявления заболевания и патогенезе, по сравнению с людьми. Важно также отметить, чтоRe значительные различия между мышью и экспрессии генов человека и сигнализации фактора транскрипции, выделяя ограничений моделях грызунов и важности понимания, какие пути обеспечить сохранение грызунов и человека 8-11. Другие использовали использование нейронных клеточных линий человека, включая N-ТЕРА-2 (NT2) линии человеческого тератокарцинома клеток и индуцируемых плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК). Эти клеточные линии обеспечивают хорошие модели для в пробирке человеческих систем. Тем не менее, дифференциация NT2 клеток с ретиноевой кислотой (RA) приводит к образованию смешанной популяции нейронов, астроциты и радиальных глиальных клеток 12, что требует дополнительной стадии очистки для получения чистых популяций нейронов. Кроме того, NT2 клетки демонстрируют высокую переменную кариотип 13, с более 60 хромосом в 72% клеток. иПСК продемонстрировать вариабельность дифференциации между различными клеточными линиями и различаются по эффективности дифференцировки 14. Поэтому желательно иметь последовательную и воспроизводимую модель нейрона человека дополнить эти альтернативы.

SH-SY5Y Нейробласт-подобные клетки являются подклон из клеток нейробластомы родительской линии SK-N-SH. Клеточная линия родительская сформировалась в 1970 из биопсии костного мозга, который содержит как Нейробласт, как и эпителиальные клетки, как 15. SH-SY5Y клетки имеют стабильный кариотип, состоящую из 47 хромосом, и могут быть дифференцированы от нейробластов состояние, подобное в зрелые человека нейронов с помощью разнообразных различных механизмов, включая использование RA, форболовыми эфиров и конкретных нейротрофинов, таких как полученный из головного мозга нейротрофический фактор (BDNF). До данные свидетельствуют о том, что использование различных методов можно выбрать для конкретных нейронных подтипов, таких как адренергических, холинергических и дофаминергических нейронов 16,17. Этот последний аспект делает SH-SY5Y клетки полезные для множества нейробиологии экспериментов.

ontent "> Несколько исследований отметили важные различия между клетками SH-SY5Y в их недифференцированных и дифференцированных состояний. При SH-SY5Y клетки недифференцированные, они быстро размножаются и кажутся Неполяризованное, с очень немногими, коротких отростков. Они часто растут в комки и экспрессируют маркеры, указывающие незрелых нейронов 18,19. Когда дифференцированы, эти клетки распространяются длинные разветвленные процессы, уменьшение пролиферации, а в некоторых случаях поляризуют 2,18. Полностью дифференцированные клетки SH-SY5Y ранее продемонстрировано выразить множество различных маркеров зрелых нейронов в том числе роста-ассоциированный белок (GAP-43), нейронных ядер (Neun), синаптофизином (SYN), синаптических пузырьков белка II (SV2), нейрон энолаза (NSE) и ассоциированный с микротрубочками белка (MAP) 2,16,17,20 и лишены экспрессии глиальных маркеров, таких как глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) 4. в дальнейшей поддержки, что, дифференцированное SH-SY5Y клетки represeнт однородный нейронов населения, удаление BDNF приводит сотовой апоптоза 4. Это говорит о том, что выживаемость дифференцированных клеток SH-SY5Y зависит от трофических факторов, подобных зрелые нейроны.

Использование SH-SY5Y клеток увеличилось с подклон была создана в 1978 3. Некоторые примеры их использования включают расследование болезни Паркинсона 17, болезнь Альцгеймера 21 и патогенез вирусных инфекций, включая полиовируса 22 энтеровирусной 71 (EV71) 23,24 , вирус ветряной оспы (VZV) 1, цитомегаловируса человека 25, и вирус простого герпеса (ВПГ) 2,26. Важно отметить, что ряд исследований с использованием SH-SY5Y клетки использовали эти клетки в их недифференцированном виде, особенно в области neurovirology 27-36. Разница в наблюдаемом фенотипа недифференцированные против дифференцированных клеток SH-SY5Y поднимает вопрос о Wheтермо наблюдаемое прогрессирование инфекции будет отличаться в зрелых дифференцированных нейронов. Например, дифференцированные клетки SH-SY5Y имеют более высокую эффективность HSV-1 поглощение в сравнении недифференцированных пролиферирующих SH-SY5Y клеток, которые могут быть из-за отсутствия поверхностных рецепторов, которые связываются HSV и модулируют запись на недифференцированных клеток SH-SY5Y 2. Поэтому очень важно, что при проектировании эксперимент, направленные на установление нейронов в пробирке, клетки SH-SY5Y следует дифференцировать с целью получения наиболее точных результатов для перевода и сравнения с моделями в естественных условиях.

Создание надежного способа для генерации культур нейронов человека важно, чтобы исследователи для выполнения поступательные эксперименты, которые точно моделируют нервную систему человека. Протокол, представленные здесь это процедура, которая очерчивает лучшие практики, полученные из предыдущих методов 1-4 для обогащения человеческих нейронов, которые дифференцируютсяиспользуя ретиноевой кислоты.

протокол

1. Общие соображения

  1. См Таблицу материалы / Оборудование для списка необходимых реагентов. Выполните все шаги под строгим асептических условиях.
  2. Используйте инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (hiFBS) для всех препаратов медиа, которые включают FBS. Для того чтобы нагреть-Деактивировать, нагреть 50 мл аликвоты FBS при 56 ° С в течение 30 мин, переворачивая каждые 10 мин (смотри также таблицу 1).
    Примечание: Когда ФБС используется без термической инактивации, эпителиальный-подобный фенотип прогрессирует быстрее всей культурах клеток SH-SY5Y.
  3. Перед использованием перегрузки носители нагреться и уравновешивают в инкубаторе установить надлежащий баланс рН перед каждым шагом. Например, 50 мл сред занимает около часа, чтобы полностью уравновешиваться (рН 7, 37 ° C, 5% CO 2).
    Примечание: Этот протокол использует процедуру расщепления двухступенчатую который требует частично дифференцированные клетки SH-SY5Y быть трипсином и повторно покрытием. Это напряженныйСпособ этих исключительно хрупких клеток. Поэтому, важно, чтобы инкубировать клетки в трипсин для минимального количества времени. Это позволит льготного отрыва нейронов, оставляя эпителиальные клетки, как до сих пор приложенные к блюду.
  4. Выполнение Растирание дифференцированных клеток медленно с 10 мл пластиковый пипеткой с наконечником против нижней части конической трубе, содержащей клетки. Провести растирание на медленной скорости, вверх и вниз не более чем в пять раз.

2. Прохождение SH-SY5Y культур эксплуатационные

  1. Split культуры обслуживания, когда клетки достигли 70-80% слияния, и не превышают 10 до 15 проходов. Культуры обычно нужно пассировать каждые 3-5 дней (при условии культуры не разбавляют более чем в 5 раз при раскалывании).
  2. Для прохода клеток из Т-75 колбу, аспирация от средств массовой информации, а затем промыть приблизительно 10 мл 1x PBS.
    Примечание: Мы не рекомендуем разделения SH-SY5Y культур обслуживание фуrther чем 1: 5 в течение пассажей, потому что это может привести к клеткам, чтобы умереть из-за низкой слияния.
  3. Аспирировать PBS, а затем добавить 2,5 мл 0,05% трипсина-ЭДТА (1x).
  4. Инкубируйте в инкубатор 2-3 мин и наконечник осторожно, чтобы освободить клетки с поверхности колбы.
  5. Добавьте 10 мл основной рост носителей (смотри таблицу 2) и растирают 1-2 раза.
  6. Спин вниз в течение 2 мин при 1000 мкг в, аспирата средств массовой информации, а затем ресуспендируют осадок в 5 мл основной рост Media.
  7. Развести клетки от 1: 3 до 1: 5 в общем объеме 20 мл в течение нормального обшивки в Т-75 колбу, или рассчитывать и пластина для дифференциации (раздел 5).

3. Замораживание SH-SY5Y Клетки

  1. Замораживание ранние проходы клетках нейробластомы SH-SY5Y в основной рост, дополненной 5% (V / V) ДМСО.
  2. Первоначально заморозить аликвот при -80 ° С в течение 24 ч, а затем перенести в жидком азоте в течение длительного хранения.
    Примечание: Для справки, сливающийся (75-85%) Т-75 колбу даст пять1 мл аликвоты клеток SH-SY5Y для замораживания. Каждый из этих аликвот должны содержать от 2-5 миллионов клеток общее.

4. Оттепель и культура Недифференцированный SH-SY5Y клетках нейробластомы

  1. Подготовьте основной рост Media.
  2. Быстро разморозить замороженных клеток в C водяной бане 37 ° (приблизительно 2 мин).
  3. Ресуспендируют клеток в 9 мл основной рост средств массовой информации в 15 мл коническую трубку, а затем центрифуги в течение 2 мин при 1000 х г.
  4. Аспирата супернатант, стараясь при этом не нарушить осажденные клетки и осторожно ресуспендируют клетки в 10 мл основной рост Media.
  5. Пластина клеток на колбу Т-25 или 60 мм 2 блюдо.
  6. На следующий день, заменить носитель для удаления мертвых клеток.

5. День 0: Покрытие Клетки для дифференциации

  1. На рисунке 1 график дифференциации.
  2. Промыть недифференцированные клетки с 1x PBS, аспирация, а затем Trypsinize использованием 1-2 мл нагревают1x 0,05% Трипсин-ЭДТА.
  3. Когда клетки находятся в трипсин, инкубировать в течение примерно 3 мин в инкубаторе.
  4. Quench трипсина путем добавления 10 мл Базовая питательной среды, промыть стенки колбы или блюдо и осторожно растирают 1-3 раза. Передача содержимого конической трубе 15 мл.
  5. Центрифуга в течение 2 мин при 1000 мкг в и аспирации СМИ, следя за тем, чтобы не нарушить гранул.
  6. Ресуспендируют осадок в 5 мл основной рост медиа и растирают 1-3 раза.
  7. Граф клеток с использованием гемоцитометра, затем разбавить с помощью обычной питательной среды до 50000 клеток / мл.
  8. Пластина 2 мл клеток в 35 мм 2 блюдо на общую сумму 100000 клеток на чашку и поместите обратно в инкубатор.

6. День 1: Изменить Медиа (дифференциация Медиа # 1)

  1. Аликвотные 50 мл среде для дифференцировки # 1 (смотри Таблицу 2) и инкубировать на водяной бане 37 ° C.
  2. Когда средства массовой информации подогревают, дают ей, чтобы уравновесить в инкубаторе (37° C, 5% CO 2) в течение по крайней мере одного часа, чтобы установить надлежащий баланс рН до использования.
  3. Добавить ретиноевой кислоты (RA) (Таблица 1), чтобы нагретый и уравновешенной СМИ непосредственно перед добавлением средств массовой информации для блюд.
    Примечание: ретиноевой кислоты является светочувствительным и должен храниться в темных бутылках при 4 ° С
  4. Аккуратно аспирата от старых СМИ и выбросить.
  5. Добавить 2 мл дифференцировки # 1 с РА на 35 мм 2 блюдо и вернуться к инкубатора.

7. День 3: Изменение Медиа (дифференциация Медиа # 1)

  1. Повторите Раздел 6 (шаги 1-5)

8. День 5: Изменение Медиа (дифференциация Медиа # 1)

  1. Повторите Раздел 6 (шаги 1-5)

9. День 7: Разбить ячейки 1: 1

  1. Добавить РА нагревают и уравновешивают среде для дифференцировки # 1 непосредственно перед добавлением средств массовой информации для блюд.
  2. Аккуратно аспирата от старых СМИ и выбросить.
  3. Добавить 200 мклнагревают 0,05% 1x трипсин ЭДТА за 35 мм 2 блюдо и тепло в инкубаторе примерно 2-3 мин или до клеток заметно поднятого с пластины, как под микроскопом.
  4. Quench трипсина путем добавления 2 мл дифференцировки # 1 с РА за 35 мм 2 блюдо и использовать средства массовой информации для полоскания остальные нервных клеток от пластины. Затем перенесите содержимое в коническую пробирку на 50 мл.
    Примечание: Во время обработки трипсином шагов, не Trypsinize слишком много блюд сразу. Это помогает обеспечить нейрональные культуры не инкубируют в трипсином слишком долго, который может быть цитотоксическое.
  5. Объединить содержимое от до 10 блюд в 50 мл коническую трубку и осторожно растирают медленно вверх и вниз не более чем в пять раз с 10 мл пластиковый пипетки.
  6. Алиготе клеточной суспензии 2 мл в свежие 35 мм 2 блюд и вернуться к инкубатора.

10. День 8: Изменение Медиа (дифференциация Медиа # 2)

  1. Добавить RA (см <сильный> Таблица 1) нагревают и уравновешивают СМИ непосредственно перед добавлением средств массовой информации для блюд.
  2. Аккуратно аспирата от старых СМИ и выбросить.
  3. Медленно добавить 2 мл дифференцировки # 2 (таблица 2) с РА на 35 мм 2 блюдо и вернуться к инкубатора. Не позволяют нейронам подвергаться воздействию воздуха в течение длительного периода времени, поскольку они могут быстро высыхают.

11. День 9: Подготовка внеклеточного матрикса (ЕСМ) с покрытием Посуда

  1. Оттепель один флакон раствора ECM на льду и разбавляют 1: 100 в холодную DMEM.
  2. Разлить 2 мл смеси в каждую 35 мм 2 блюдо и обеспечить весь база блюдо покрывается.
  3. Место в инкубаторе (37 ° С, 5% СО 2) в течение 1 ч или в течение ночи.
  4. Аспирируйте смесь и дайте высохнуть на воздухе в течение приблизительно 1 часа в капюшоне. Хранить при комнатной температуре в течение до 2 месяцев.

12. День 10: Передача клеток наECM пластинок, покрытых 1: 1

  1. Добавить RA (Таблица 1), чтобы нагретый и уравновешенной СМИ непосредственно перед добавлением средств массовой информации для блюд.
  2. Аккуратно аспирата от СМИ и выбросить.
  3. Добавить 200 мкл трипсина прогреваемых каждому 35 мм 2 блюдо и позволяют инкубировать при комнатной температуре в течение приблизительно 1-2 мин или до нейроны заметно поднял с блюда, как под микроскопом.
    Примечание: Выполнить этот шаг трипсином при комнатной температуре, чтобы не переусердствовать инкубировать нейроны с трипсином и вызвать повреждения. Нейроны освободить от пластинок гораздо быстрее, чем эпителиальных клеток, как на данном этапе.
  4. Quench трипсина путем добавления 2 мл дифференцировки # 2 за 35 мм 2 блюдо и использовать средства массовой информации для полоскания остальные нервных клеток от пластины. Затем перенесите содержимое в коническую пробирку на 50 мл.
  5. Объединить содержимое от до 10 блюд в 50 мл коническую трубку и осторожно растирают медленно вверх и вниз не более чем в пять раз с10 мл пластиковые пипетки.
  6. Разлить 2 мл клеточной суспензии в ECM-покрытием 35 мм 2 блюд и вернуться к инкубатора.

13. День 11: Изменение Медиа (дифференциация Медиа # 3)

  1. Добавить RA (Таблица 1), чтобы нагретый и уравновешенной СМИ непосредственно перед добавлением средств массовой информации для блюд.
  2. Аккуратно аспирата от старых СМИ и выбросить.
  3. Медленно добавить 2 мл дифференцировки # 3 (смотри таблицу 2) с РА за 35 мм 2 блюдо и вернуться к инкубатора. Не позволяют нейронам подвергаться воздействию воздуха в течение длительного периода времени.

14. День 14: Изменение Медиа (дифференциация Медиа # 3)

  1. Повторите Раздел 13 (шаги 1-3)

15. День 17: Последний Смена носителя (дифференциация Медиа # 3)

  1. Повторите Раздел 13 (шаги 1-3)

16. День 18: Нейронные Культуры готовы к использованию

  1. Изменение СМИ на свежий Differentiation Медиа # 3 с РА каждые 3 дня для поддержания здоровья нейронов.
    Примечание: Клетки должны быть дифференцированы в нейроны и демонстрируют нейронный фенотип. Культуры обычно стабильны в течение 14 дней, следующих терминальной дифференцировки, однако длительность жизнеспособности нейронов зависит от проходного числа недифференцированных клеток в начале дифференциации. Большее число прохождение дают дифференцированные нейроны с более короткой полезной жизни.

Результаты

В настоящее время существует много примеров в области нейробиологии и neurovirology где недифференцированные клетки SH-SY5Y которые используются в качестве функциональной модели для человека нейронов 27-36 и, что важно, недифференцированные клетки могут не фенотипов, такие как оптимально?...

Обсуждение

Выше протокол обеспечивает простой и воспроизводимый метод для создания однородных и жизнеспособных нейронов культур человека. Этот протокол использует методы и практики, которые объединяют несколько ранее опубликованных методов 1-4 и цели очертить лучшие практики друг. Диффер...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

We are grateful for the contributions of Yolanda Tafuri in optimizing conditions for SH-SY5Y differentiation, and for the support of Dr. Lynn Enquist, in whose lab this work was initiated. Y. Tafuri contributed the images shown in Figure 3. This work was supported by the NIH-NIAID Virus Pathogens Resource (ViPR) Bioinformatics Resource Center (MLS and L. Enquist) and K22 AI095384 (MLS).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
B-27Invitrogen17504-044See Table 1 for preparation
Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF)SigmaSRP3014 (10ug)/B3795 (5ug)See Table 1 for preparation
dibutyryl cyclic AMP (db-cAMP)SigmaD0627See Table 1 for preparation
DMSOATCC4-X-
Minimum Essential Medium Eagle (EMEM)SigmaM5650-
Fetal Bovine Serum (FBS) HycloneSH30071.03See Table 1 for preparation
GlutamaxILife Technologies35050-061-
GlutamineHycloneSH30034.01-
Potassium Chloride (KCl)Fisher ScientificBP366-1See Table 1 for preparation
MaxGel Extracellular Matrix (ECM) solutionSigmaE0282See step 11 of the protocol
NeurobasalLife Technologies21103-049-
Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep)Life Technologies15140-122-
Retinoic acid (RA)SigmaR2625Should be stored in the dark at 4° C because this reagent is light sensitive
SH-SY5Y CellsATCCCRL-2266-
0.5% Trypsin + EDTALife Technologies15400-054-
Falcon 35mm TC dishesFalcon (A Corning Brand)353001-

Ссылки

  1. Christensen, J., Steain, M., Slobedman, B., Abendroth, A. Differentiated Neuroblastoma Cells Provide a Highly Efficient Model for Studies of Productive Varicella-Zoster Virus Infection of Neuronal Cells. Journal of Virology. 85 (16), 8436-8442 (2011).
  2. Gimenez-Cassina, A., Lim, F., Diaz-Nido, J. Differentiation of a human neuroblastoma into neuron-like cells increases their susceptibility to transduction by herpesviral vectors. Journal of Neuroscience Research. 84 (4), 755-767 (2006).
  3. Biedler, J. L., Roffler-Tarlov, S., Schachner, M., Freedman, L. S. Multiple Neurotransmitter Synthesis by Human Neuroblastoma Cell Lines and Clones. Cancer Research. 38 (11 Pt 1), 3751-3757 (1978).
  4. Encinas, M., Iglesias, M., et al. Sequential Treatment of SH-SY5Y Cells with Retinoic Acid and Brain-Derived Neurotrophic Factor Gives Rise to Fully Differentiated, Neurotrophic Factor-Dependent, Human Neuron-Like Cells. Journal of Neurochemistry. 75 (3), 991-1003 (2000).
  5. Otey, C. A., Boukhelifa, M., Maness, P. B35 neuroblastoma cells: an easily transfected, cultured cell model of central nervous system neurons. Methods in Cell Biology. 71, 287-304 (2003).
  6. LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies. Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).
  7. Shafer, T. J., Atchison, W. D. Transmitter, ion channel and receptor properties of pheochromocytoma (PC12) cells: a model for neurotoxicological studies. Neurotoxicology. 12 (3), 473-492 (1991).
  8. Yue, F., Cheng, Y., et al. A comparative encyclopedia of DNA elements in the mouse genome. Nature. 515 (7527), 355-364 (2014).
  9. Cheng, Y., Ma, Z., et al. Principles of regulatory information conservation between mouse and conservation between mouse and human. Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).
  10. Stergachis, A. B., Neph, S., et al. Conservation of trans-acting circuitry during mammalian regulatory evolution. Nature. 515 (7527), 365-370 (2014).
  11. Lin, S., Lin, Y., et al. Comparison of the transcriptional landscapes between human and mouse tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (48), 17224-17229 (2014).
  12. Coyle, D. E., Li, J., Baccei, M. Regional Differentiation of Retinoic Acid-Induced Human Pluripotent Embryonic Carcinoma Stem Cell Neurons. PLoS ONE. 6 (1), e16174 (2011).
  13. Mostert, M. M., van de Pol, M., et al. Fluorescence in situ hybridization-based approaches for detection of 12p overrepresentation, in particular i(12p), in cell lines of human testicular germ cell tumors of adults. Cancer Genetics and Cytogenetics. 87 (2), 95-102 (1996).
  14. Hu, B. -. Y., Weick, J. P., et al. Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4335-4340 (2010).
  15. Biedler, J. L., Helson, L., Spengler, B. A. Morphology and growth, tumorigenicity, and cytogenetics of human neuroblastoma cells in continuous culture. Cancer Research. 33 (11), 2643-2652 (1973).
  16. Påhlman, S., Ruusala, A. I., Abrahamsson, L., Mattsson, M. E., Esscher, T. Retinoic acid-induced differentiation of cultured human neuroblastoma cells: a comparison with phorbolester-induced differentiation. Cell Differentiation. 14 (2), 135-144 (1984).
  17. Xie, H., Hu, L., Li, G. SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson’s disease. Chinese Medical Journal. 123 (8), 1086-1092 (2010).
  18. Kovalevich, J., Langford, D. Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology. Methods in Molecular Biology. 1078, 9-21 (2013).
  19. Påhlman, S., Hoehner, J. C., et al. Differentiation and survival influences of growth factors in human neuroblastoma. European Journal of Cancer. 31 (4), 453-458 (1995).
  20. Cheung, Y. -. T., Lau, W. K. -. W., et al. Effects of all-trans-retinoic acid on human SH-SY5Y neuroblastoma as in vitro model in neurotoxicity research. Neurotoxicology. 30 (1), 127-135 (2009).
  21. Agholme, L., Lindström, T., Kågedal, K., Marcusson, J., Hallbeck, M. An in vitro model for neuroscience: differentiation of SH-SY5Y cells into cells with morphological and biochemical characteristics of mature neurons. Journal of Alzheimer's disease: JAD. 20 (4), 1069-1082 (2010).
  22. La Monica, N., Racaniello, V. R. Differences in replication of attenuated and neurovirulent polioviruses in human neuroblastoma cell line SH-SY5Y. Journal of Virology. 63 (5), 2357-2360 (1989).
  23. Cordey, S., Petty, T. J., et al. Identification of Site-Specific Adaptations Conferring Increased Neural Cell Tropism during Human Enterovirus 71 Infection. PLoS Pathog. 8 (7), e1002826 (2012).
  24. Xu, L. -. J., Jiang, T., et al. Global Transcriptomic Analysis of Human Neuroblastoma Cells in Response to Enterovirus Type 71 Infection. PLoS ONE. 8 (7), e65948 (2013).
  25. Luo, M. H., Fortunato, E. A. Long-term infection and shedding of human cytomegalovirus in T98G glioblastoma cells. Journal of Virology. 81 (19), 10424-10436 (2007).
  26. Sun, Z., Yang, H., Shi, Y., Wei, M., Xian, J., Hu, W. Establishment of a cell model system of herpes simplex virus type II latent infection and reactivation in SH-SY5Y cells. Wei Sheng Wu Xue Bao = Acta Microbiologica Sinica. 50 (1), 98-106 (2010).
  27. Yun, S. -. I., Song, B. -. H., et al. A molecularly cloned, live-attenuated japanese encephalitis vaccine SA14-14-2 virus: a conserved single amino acid in the ij Hairpin of the Viral E glycoprotein determines neurovirulence in mice. PLoS pathogens. 10 (7), e1004290 (2014).
  28. Garrity-Moses, M. E., Teng, Q., Liu, J., Tanase, D., Boulis, N. M. Neuroprotective adeno-associated virus Bcl-xL gene transfer in models of motor neuron disease. Muscle & Nerve. 32 (6), 734-744 (2005).
  29. Kalia, M., Khasa, R., Sharma, M., Nain, M., Vrati, S. Japanese Encephalitis Virus Infects Neuronal Cells through a Clathrin-Independent Endocytic Mechanism. Journal of Virology. 87 (1), 148-162 (2013).
  30. Haedicke, J., Brown, C., Naghavi, M. H. The brain-specific factor FEZ1 is a determinant of neuronal susceptibility to HIV-1 infection. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (33), 14040-14045 (2009).
  31. Xu, K., Liu, X. -. N., et al. Replication-defective HSV-1 effectively targets trigeminal ganglion and inhibits viral pathopoiesis by mediating interferon gamma expression in SH-SY5Y cells. Journal of molecular neuroscience: MN. 53 (1), 78-86 (2014).
  32. Oh, J., Fraser, N. W. Temporal association of the herpes simplex virus genome with histone proteins during a lytic infection. Journal of Virology. 82 (7), 3530-3537 (2008).
  33. Stiles, K. M., Milne, R. S. B., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J., Krummenacher, C. The herpes simplex virus receptor nectin-1 is down-regulated after trans-interaction with glycoprotein D. Virology. 373 (1), 98-111 (2008).
  34. Thomas, D. L., Lock, M., Zabolotny, J. M., Mohan, B. R., Fraser, N. W. The 2-kilobase intron of the herpes simplex virus type 1 latency-associated transcript has a half-life of approximately 24 hours in SY5Y and COS-1 cells. Journal of Virology. 76 (2), 532-540 (2002).
  35. Handler, C. G., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J. Cross-linking of glycoprotein oligomers during herpes simplex virus type 1 entry. Journal of Virology. 70 (9), 6076-6082 (1996).
  36. Nicola, A. V., Hou, J., Major, E. O., Straus, S. E. Herpes Simplex Virus Type 1 Enters Human Epidermal Keratinocytes, but Not Neurons, via a pH-Dependent Endocytic Pathway. Journal of Virology. 79 (12), 7609-7616 (2005).
  37. Korecka, J. A., van Kesteren, R. E., et al. Phenotypic characterization of retinoic acid differentiated SH-SY5Y cells by transcriptional profiling. PloS One. 8 (5), e63862 (2013).
  38. Presgraves, S. P., Ahmed, T., Borwege, S., Joyce, J. N. Terminally differentiated SH-SY5Y cells provide a model system for studying neuroprotective effects of dopamine agonists. Neurotoxicity Research. 5 (8), 579-598 (2004).
  39. Qiao, J., Paul, P., et al. PI3K/AKT and ERK regulate retinoic acid-induced neuroblastoma cellular differentiation. Biochemical and Biophysical Research Communications. 424 (3), 421-426 (2012).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

108SH SY5Y

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены