JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь мы опишем наш подробный протокол для подготовки одной когорты пчелиных семей - полезный инструмент для анализа роли ассоциированного работник физиологии. Мы также описали подробные протоколы для лечения работников с ювенильным гормоном и экдизона оценить участие этих гормонов в регуляции поведения работников и / или физиологии.

Аннотация

Honeybee workers are engaged in various tasks related to maintaining colony activity. The tasks of the workers change according to their age (age-related division of labor). Young workers are engaged in nursing the brood (nurse bees), while older workers are engaged in foraging for nectar and pollen (foragers). The physiology of the workers changes in association with this role shift. For example, the main function of the hypopharyngeal glands (HPGs) changes from the secretion of major royal jelly proteins (MRJPs) to the secretion of carbohydrate-metabolizing enzymes. Because worker tasks change as the workers age in typical colonies, it is difficult to discriminate the physiological changes that occur with aging from those that occur with the role shift. To study the physiological changes in worker tissues, including the HPGs, in association with the role shift, it would be useful to manipulate the honeybee colony population by preparing single-cohort colonies in which workers of almost the same age perform different tasks. Here we describe a detailed protocol for preparing single-cohort colonies for this analysis. Six to eight days after single-cohort colony preparation, precocious foragers that perform foraging tasks earlier than usual appear in the colony. Representative results indicated role-associated changes in HPG gene expression, suggesting role-associated HPG function. In addition to manipulating the colony population, analysis of the endocrine system is important for investigating role-associated physiology. Here, we also describe a detailed protocol for treating workers with 20-hydroxyecdysone (20E), an active form of ecdysone, and methoprene, a juvenile hormone analogue. The survival rate of treated bees was sufficient to examine gene expression in the HPGs. Gene expression changes were observed in response to 20E- and/or methoprene-treatment, suggesting that hormone treatments induce physiological changes of the HPGs. The protocol for hormone treatment described here is appropriate for examining hormonal effects on worker physiology.

Введение

Европейская медоносной пчелы, Apis MELLIFERA, является eusocial насекомое с высокоорганизованной общества 1. Работник медоносные (труд кастовые) занимаются различными задачами для поддержания деятельности колонии, и эти задачи меняются в зависимости от возраста трудящегося Пчелы после вылупления, который упоминается как связанных с возрастом разделения труда 2-4. Молодые рабочие (<13 дней) заботиться о выводка в улье секретируя маточное молочко (медсестра пчел), в то время как пожилые работники (> 15 дней) собирают нектар и пыльцу за пределами улья (фуражиров) 2-4. Физиология рабочих меняется в связи с этой ролью сдвига. Например, функция гипофарингеальных желез (HPGs), парные экзокринных желез , расположенных в голове, изменения в связи с переходом от роли медсестер к нагула 2,5. Медсестра пчелы HPGs в основном синтезировать основные маточное молочко белки, которые являются основными компонентами пчелиного молока. С другой стороны, фуражиры HPGs в основномсинтезировать углеводные метаболизировать ферменты, такие как альфа-глюкозидазы III, обрабатывать нектара в мед путем превращения сахарозы в глюкозу и фруктозу. Наши предыдущие исследования показали , что экспрессия mrjp2, который кодирует основную протеинами маточного молочка и Hbg3, которая кодирует альфа-глюкозидазы III, изменения во время роль сдвига 6-9.

Для того, чтобы определить, являются ли физиологические изменения в тканях рабочих, в том числе HPGs, связано с ролью сдвига или с возрастом рабочих, было бы полезно, чтобы манипулировать состав популяции медоносных пчел колонии, например, подготовить одинарной когорту колонии , в которых работники почти того же возраста выполняют разные задачи 10,11. Робинсон и др. (1989) описали метод создания одной когорты колонии 10. Single-когорты колонии изначально содержат ферзя и 0-2 суточных рабочих. Через несколько дней после установления колоний, работники УАПОСТ же возраста принимать различные задачи. Некоторые работники выполняют задачи медсестер, как в типичных колоний, в то время как другие работники выполняют фуражировать задачи раньше, чем обычно, и, таким образом, называется скороспелых фуражиров. Экспрессии генов сравнения между медсестрой пчел и скороспелых фуражиров бы дать полезную информацию о роли ассоциированных физиологии рабочих тканей 12-16. Здесь мы описываем подробный протокол для подготовки одной когорты колоний для анализа и ролевой / или возрастной физиологии из HPGs 16. Мы также кратко описать , как исследовать экспрессию генов mrjp2 и Hbg3 с помощью количественной обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (RT-PCR) для оценки HPG физиологии.

В дополнение к анализу рабочего физиологии в одной когорты колоний, исследование эндокринной системы имеет важное значение для анализа регуляторных механизмов роли ассоциированного работника физиологии. Ювенильного гормона (JH), который KNOшп как гормон "статус - кво" у личинок насекомых, ускоряет сдвиг в роли от медсестер к нагула в рабочих медоносных 11. Кроме того, экдизол, который известен как линьки гормона во время метаморфоза, могут быть вовлечены в ролевой сдвиг в качестве генов , кодирующих экдизол сигнальных молекул экспрессируются в грибовидных телах, более высокий центр работника головного мозга 17-19. Таким образом, мы также описываем подробный протокол , используемый в нашем предыдущем исследовании 16 для лечения работников с 20E, который является активной формой экдизон и метопрен, а JH аналог, для анализа влияния эндокринной системы на HPG физиологии (выражение mrjp2 и Hbg3).

протокол

1. Получение Single-когорты Колонии

  1. Подготовьте три пчелиных семей для создания двух когорт одной колонии и получить достаточное количество вновь появившихся работников.
    1. Убедитесь, что некоторые куколки в удаляемого периферических клеток в сотах имеют карие глаза и пигментированного кутикулу, открыв блокированы расчески с помощью пинцета. Если эти куколки существуют в клетках периферической гребенки, большинство из куколок в целых сотах появится приблизительно через 1-3 дней.
    2. Затем собирают гребни, содержащие эти куколки после того, как все прилипшие взрослые пчелы были удалены с помощью кисти, и смешать гребни из трех колоний, чтобы минимизировать изменчивость среди колоний.
  2. Поместите собранные гребенки в пустом улье поле и инкубировать при температуре 33 ° С в условиях повышенной влажности (> 60% относительной влажности). Сбор около 6000 новых рабочих появившихся в течение 3-х дней (3000 рабочих в колонии) из собранных сотов.
  3. Определить количество ВоркеRS, основанные на весе пять вновь появившихся работников случайным образом собирали из unmanipulated колоний.
    1. Взвесьте пять вновь появившихся рабочих случайно собранных из unmanipulated колоний с использованием взвешивающих устройств.
      Примечание: вес пяти вновь появившихся работников, как правило, 500-600 мг.
    2. Оценки количества собранных рабочих путем деления массы собранных работников в среднем весе пять вновь появившихся работников.
  4. Нанесите краску марки на thoraces около 1,800 рабочих (900 рабочих в колонии) с использованием маркеров плаката краски на водной основе.
    Примечание: моющийся маркер , который используется для нанесения краски перечислен в таблице материалов.
  5. Представьте королеву и приблизительно 3000 из 0-2-дневных рабочих на новый улей ящик, который содержит два расчески, один гребень, содержащий меда и пыльцы, как консервированных продуктов, а другой пустой расческа для откладки яиц королевой. Соберите гребень, содержащий мед и пыльца фром другой unmanipulated колонии после всех прилипших пчел удалены.
    Примечание: Использование улья коробки ядерного (небольшие размеры улья коробки) рекомендуется.
  6. Собирают медсестра пчел и скороспелых фуражиров с краской марок от 6 до 8 дней после создания одной когорты колоний.
    1. Для сбора медсестра пчел, подобрать работников, которые ставят свои головы в гребень клетки, чтобы заботиться о выводке. Используйте пинцет, чтобы собрать медсестрой пчел от сотов, которые содержат много расплода и взрослых рабочих.
      Примечание: Если HPGs из собранных рабочих разрабатываются, когда расчлененный, как описано на стадии 1.7, эти рабочие определяются как медсестра пчел. Проведение thoraces пинцетом рекомендуется подобрать работников из сотов.
    2. Собрать фуражиров, использовать сетку от насекомых, чтобы захватить работников, которые возвращаются в свои ульи с пыльцой нагрузок на задних ногах.
      Примечание: Если HPGs захваченных рабочих появляются усохшие, когда вскрывали, как описано на стадии 1.7, эти рабочие определяются как фуражиров.
  7. Класфицировать в HPG на три группы, «развитых», «промежуточный» и «Усохшие» по рассечение под стереомикроскопа.
    1. не Обезболить 10-15 пчел в качестве клетки насекомых в холодильнике в течение 10-15 мин, пока пчелы не могут летать или ходить. Затем переместить пчел на лед и завершить анестезии на льду в течение 5 мин.
      Примечание: Это занимает около 15-20 мин общей для достижения анестезии. Если время анестезии необходимо укоротить, количество пчел в клетке должна быть уменьшена до 1-3 пчел на клетку.
    2. Рассеките голову от тела с ножницами и пинцетом. Зафиксируйте голову на зубной воск, помещенного на чашку Петри с булавками. Вставьте два штифта в основания усиков, чтобы зафиксировать голову. Замочите фиксированные головы в физиологическом растворе насекомых (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 1 мМ CaCl 2).
    3. Снимите переднюю сторону кутикулы головы с использованием тонких пинцетом и хирургический нож под бинокулярным микроскопом.
      Примечание: HPGs можно легко найти в голову после удаления Cuticle. HPG является кистевидный орган, который существует вокруг мозга в голове.
    4. Удалите трахеи ткани, которая является белой мембранозной ткани под кутикулой. Затем, рассекать HPGs из головы, медленно вытягивая их с помощью пинцета.
    5. Классифицировать HPGs с большой и круглой ацинусов как «развитых». Классифицировать HPGs с малым и искаженной ацинусов как "усохшие". Классифицировать HPGs, соответствующий ни "Развитая", ни "усохшие", как "Промежуточное".
      Примечание: Представитель фотографии , которые показывают эти три класса состояний HPG показаны на рисунке 2.
    6. Тема "Разработано" и HPGs "усохшие" до выделения РНК как "медсестра пчелы HPGs 'и' фуражиры HPGs ', соответственно, и сравнение экспрессии генов в HPGs между медсестрой пчел и фуражиров (раздел 4).

2. Инъекция 20E

  1. Собирают медсестра пчел от типичных колоний как Described в процедуре 1.6.1.
    Примечание: HPGs нельзя рассматривать в этих пчел, как пчелы будут выращены.
  2. Обезболить пчел при 4 ° С в холодильнике (не на льду).
    Примечание: Это займет около 30 мин для достижения анестезии. Если время анестезии сокращается, число пчел в клетке должна быть снижена до 1-3 пчел в клетку.
  3. С помощью пинцета иммобилизации пчел на зубной воск, размещенными на чашку Петри.
  4. Вводят 1 мкл раствора 20E в переднюю часть головки, используя наконечник инъекции, сделанный из калиброванного капилляра микропипетки с помощью стеклянной иглы съемника.
    1. Растворите 20Е в этаноле-насекомым растворе (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 1 мМ CaCl 2) смеси (1: 4) в дозе 2,5 мкг / мкл.
    2. Подключение наконечника инъекционного к резиновой трубкой, и соединить желтый кончик микропипетки к противоположной стороне трубки.
    3. Поместите 1 мкл раствора 20E на парафином с помощью микропипетки, удерживая желтый кончик микропипетки во рту, А.Н.d обратить решение в наконечник инъекции.
    4. Вставьте кончик инъекцией в основание усиков, и впрыскивают раствор путем продувки через желтый наконечник микропипетки.
      Примечание: Протокол показано на этом этапе является представителем метод инъекции, но использование автоматизированной литьевой машины рекомендуется для обеспечения безопасности по мере необходимости 20.
  5. Задний инъецированные пчелы в клетках насекомых при 33-36 ° С (идеальная температура составляет 35 ° С) в темных и влажных условиях (> 60% относительной влажности) в течение 1 или 3 дня. Поставка медово-водной смеси (1: 1) к пчелам. В случае необходимости, подсчет живых пчел после инъекции.

3. Применение Метопрен

  1. Соберите гребни, которые содержат куколок из типичных колоний после того, как все прилипшие взрослые пчелы удаляются с помощью кисти. Выдержите гребенки при 33-36 ° С (идеальная температура составляет 35 ° С) в условиях повышенной влажности (> 60% относительной влажности) на срок до 1 суток.
    2. Collect вновь появились пчелы из собранных гребни и применять краски марки к их thoraces с использованием плаката краски, как описано в протоколе для подготовки одной когорты колоний. Возвращение отмеченные пчел в свои колонии.
  2. Через 6 дней, собирают расписные рабочих (6-дневных) из колоний. Возьмите нарисованные рабочих из сотов, держа их thoraces с помощью пинцета.
  3. Обезболить пчел при 4 ° С в холодильнике (не на льду), как в процедуре 2.2. С помощью пинцета иммобилизации пчел на зубной воск, размещенными на чашку Петри и применять 1-5 мкл раствора метопрена (50-250 мкг / мкл), растворенного в ацетоне, чтобы их головы с помощью микропипетки. С помощью фильтрующего мундштука, который устойчив к ацетону.
    Примечание: Ацетон может иметь вредное воздействие на пчел, приводящих к смерти. Если наблюдается высокая смертность пчел, рекомендуется уменьшение объема ацетона до 1 мкл на минимальном уровне.
  4. Задние пчелы в клетках насекомых при 33-36 ° С (идеал темпера тура составляет 35 ° C) в течение 7 дней при темных и влажных условиях (> 60% относительной влажности воздуха). Поставка медово-водной смеси (1: 1) к пчелам. В случае необходимости, подсчет живых пчел после местного применения.
    Примечание: В этой статье, выживающие пчелы подсчитывают через 7 дней после применения (таблица 3).

4. Экстракция РНК и количественный RT-PCR

  1. Обезболить пчел и рассекают HPGs как описано в пунктах 1.7.1 1.7.4.
  2. Собирают отсеченных HPGs в микроцентрифужных трубки на сухом льду и хранят при -80 ° С до использования.
  3. Добавьте 400 мкл реагента для денатурации белка.
    Примечание: Этот реагент является коммерчески доступным (смотри таблицу материалов).
  4. Однородный ткани HPG с использованием ручного миксером с гомогенизацией пестиком, который помещается внутрь трубки микроцентрифужных. Однородный при скорости вращения приблизительно 300 оборотов в минуту в течение 1 мин на льду ломаться и клеток, лизировать ткани.
    Примечание: ручной электрический миксер является коммерчески доступным (смотри таблицу материалов).
  5. Добавляют 80 мкл хлороформа и хорошо перемешать. Выдержите в течение 5 мин при комнатной температуре.
  6. Центрифуга микроцентрифужных пробирки при 14,170 мкг в течение 15 мин при 4 ° С. Передача водной фазы в новую пробирку. Добавить равный объем изопропанола и 1 мкл гликогена (5 мг / мл). Инкубируйте при -20 ° С в течение по меньшей мере 20 мин.
  7. Центрифуга микроцентрифужных пробирки при 14,170 х г в течение 10 мин при 4 ° C и удалить супернатант.
  8. Добавить 400 мкл 75% этанола к осадку и хорошо перемешать, центрифугировать микроцентрифужных пробирки при 14,170 х г в течение 15 мин при 4 ° С, и удалить супернатант. Повторите эту процедуру еще раз.
  9. Высушите осадок в течение 5-10 мин, а затем растворить его в 10 мкл РНКазы без воды.
    Примечание: Полное высыхание крупинки может вызвать нерастворимую осадок РНК в воде. Таким образом, осадок, который немного влажный подходит дляРастворение.
  10. Измерение концентрации РНК с использованием спектрофотометра такой, как NanoDrop или аналогичный.
  11. Treat 500 нг тотальной РНК с 2,0 U ДНКазы I путем инкубирования при 37 ° С в течение 30 мин для разрушения любого загрязняющего геномной ДНК.
  12. Реверс-транскрибировать 200 нг ДНКазы I-обработанной РНК и проводить ПЦР в реальном времени с использованием коммерчески доступных наборов (см список в Таблице материалов и реагентов) и праймеры геноспецифических (mrjp2, 5'-AAATGGTCGCTCAAAATGACAGA-3 'и 5 '-ATTCATCCTTTACAGGTTTGTTGC-3', Hbg3; 5'-TACCTGGCTTCGTGTCAAC-3 'и 5'-ATCTTCGGTTTCCCTAGAGAATG-3'). Выполните ПЦР следующим образом: [95 ° С х 30 сек + (95 ° С × 5 сек + 60 ° С х 15 сек + 72 ° С х 20 сек) х 45-55 циклов].
  13. Нормализация количества транскрипта с этим фактора элонгации 1 & alpha-F2 (EF1α˗F2) или рибосомального белка 49 (rp49) 9,16,21,22. Эти гены являются надежное управление гены для анализа экспрессии генов в HPGs с использованием QRT-PCR.
  14. Выполните Стьюдента-тест для выявления существенных различий между двумя группами эксперимента (медсестра пчел против скороспелых фуражиров, 20E обработанных пчел по сравнению с контролем пчел и Метопрен обработанных пчел по сравнению с контролем пчел) с использованием статистического программного обеспечения.
    Примечание: Если F-тест предполагает гомогенность дисперсии, т-тест Стьюдента может быть использован. Если нет, то Т-тест Уэлша может быть использован.

Результаты

Обзор протокола для подготовки одного когорты колоний показан на рисунке 1А. Время-ход экспериментов от подготовки одной когорты колонии для сбора проб показан на рисунке 1В. Работники , которые удовлетворяют поведенческие критерии поведения медсес...

Обсуждение

Получение одной когорты колоний

Здесь мы описали протокол , используемый в нашем предыдущем исследовании 16 для подготовки одной когорты колонии для анализа HPG физиологии , связанной с переходом в роли рабочих пчел. Медсестра пчелы и не по годам фуражиров , которые ?...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

This work was supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research (B) and a Grant-in Aid for Scientific Research on Innovative Areas 'Systems Molecular Ethology' from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT) of Japan. T.U. was the recipient of a Grant-Aid from the Japan Society for the Promotion of Science for Young Scientists.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
UNIPOSCAMitsubishi pencilPC-5MMarker pen for the application of marks to bees  
20-hydroxyecdysoneSigma AldrichH5142
MethopreneSigma Aldrich33375
Breeding case insectIRIS OHYAMACP-SS
Electromotion mixier ISO23M-R25homogenization of tissue
TRIZol ReagentInvitrogen15596-026the reagent for total RNA extraction
DNase I Takara2270A
PrimeScript RT reagent kitTakaraRR037Athe reagent for reverse transcription
SYBR Premix ExTaq IITakaraRR820Athe reagent for real-time PCR
LightCycle 1.2 InstrumentRoche12011468001the instrument for real-time PCR
LightCycle Capillaries (20μl)Roche4929292001the material for real-time PCR

Ссылки

  1. Wilson, E. O. . The insect societies. , (1971).
  2. Winston, M. L. . The biology of the honey bee. , (1987).
  3. Lindauer, M. Ein Beitrag zur Frage der Arbeitsteilung im Bienenstaat. Zeitschrift für vergleichende Physiologie. 34 (4), 299-345 (1952).
  4. Sakagami, S. Untersuchungen uber die Arbeitsteilung in einen Zwergvolk der Honigbienen. Beitrage zur Biologie des Bienenvolkes, Apis mellifera L. I. Jap J Zool. 11, 117-185 (1953).
  5. Kubo, T., et al. Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role. J Biochem. 119 (2), 291-295 (1996).
  6. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Change in the mode of gene expression of the hypopharyngeal gland cells with an age-dependent role change of the worker honeybee Apis mellifera L. Eur J Biochem. 249 (3), 797-802 (1997).
  7. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Expression of amylase and glucose oxidase in the hypopharyngeal gland with an age-dependent role change of the worker honeybee (Apis mellifera L). Eur J Biochem. 265 (1), 127-133 (1999).
  8. Ohashi, K., Sawata, M., Takeuchi, H., Natori, S., Kubo, T. Molecular cloning of cDNA and analysis of expression of the gene for alpha-glucosidase from the hypopharyngeal gland of the honeybee Apis mellifera L. Biochem Biophys Res Commun. 221 (2), 380-385 (1996).
  9. Ueno, T., Nakaoka, T., Takeuchi, H., Kubo, T. Differential gene expression in the hypopharyngeal glands of worker honeybees (Apis mellifera L.) associated with an age-dependent role change. Zoolog Sci. 26 (8), 557-563 (2009).
  10. Robinson, G. E., Page, R. E., Strambi, C., Strambi, A. Hormonal and genetic control of behavioral integration in honey bee colonies. Science. 246 (4926), 109-112 (1989).
  11. Sullivan, J. P., Fahrbach, S. E., Robinson, G. E. Juvenile hormone paces behavioral development in the adult worker honey bee. Horm Behav. 37 (1), 1-14 (2000).
  12. Ben-Shahar, Y., Robichon, A., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. Influence of gene action across different time scales on behavior. Science. 296 (5568), 741-744 (2002).
  13. Lehman, H. K., et al. Division of labor in the honey bee (Apis mellifera): the role of tyramine beta-hydroxylase. J Exp Biol. 209 (Pt 14), 2774-2784 (2006).
  14. Mutti, N. S., Wang, Y., Kaftanoglu, O., Amdam, G. V. Honey bee PTEN--description, developmental knockdown, and tissue-specific expression of splice-variants correlated with alternative social phenotypes). PLoS One. 6 (7), e22195 (2011).
  15. Whitfield, C. W., Cziko, A. M., Robinson, G. E. Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees. Science. 302 (5643), 296-299 (2003).
  16. Ueno, T., Takeuchi, H., Kawasaki, K., Kubo, T. Changes in the Gene Expression Profiles of the Hypopharyngeal Gland of Worker Honeybees in Association with Worker Behavior and Hormonal Factors. PLoS One. 10 (6), e0130206 (2015).
  17. Paul, R. K., Takeuchi, H., Matsuo, Y., Kubo, T. Gene expression of ecdysteroid-regulated gene E74 of the honeybee in ovary and brain. Insect Mol Biol. 14 (1), 9-15 (2005).
  18. Takeuchi, H., et al. Identification of a novel gene, Mblk-1, that encodes a putative transcription factor expressed preferentially in the large-type Kenyon cells of the honeybee brain. Insect Mol Biol. 10 (5), 487-494 (2001).
  19. Takeuchi, H., Paul, R. K., Matsuzaka, E., Kubo, T. EcR-A expression in the brain and ovary of the honeybee (Apis mellifera L). Zoolog Sci. 24 (6), 596-603 (2007).
  20. Yamane, T., Miyatake, T. Reduced female mating receptivity and activation of oviposition in two Callosobruchus species due to injection of biogenic amines. Journal of Insect Physiology. 56 (3), 271-276 (2010).
  21. Ben-Shahar, Y., Leung, H. T., Pak, W. L., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. cGMP-dependent changes in phototaxis: a possible role for the foraging gene in honey bee division of labor. J Exp Biol. 206 (Pt 14), 2507-2515 (2003).
  22. Danforth, B. N., Ji, S. Elongation factor-1 alpha occurs as two copies in bees: implications for phylogenetic analysis of EF-1 alpha sequences in insects. Mol Biol Evol. 15 (3), 225-235 (1998).
  23. Pandey, A., Bloch, G. Juvenile hormone and ecdysteroids as major regulators of brain and behavior in bees. Current Opinion in Insect Science. 12, 26-37 (2015).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

Neuroscience115QRT PCR

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены