JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Промоутер выражение анализа имеют решающее значение для улучшения понимания регуляции генов и пространственно-временных выражение генов-мишеней. Здесь мы представляем протокол идентификации, изолировать и клонирования растений промоутера. Кроме того мы описывают характеристики конкреций конкретной промоутера в общие корни волосатые бин.

Аннотация

Вверх по течению последовательности кодирования последовательностей гена называются в качестве промоутера последовательности. Изучая выражение закономерности промоутеров очень важны в понимании гена регулирования и моделей пространственно-временных выражение генов-мишеней. С другой стороны важно также установить промоутер оценки инструментов и методов генетической трансформации, которые являются быстрый, эффективный и воспроизводимость. В этом исследовании мы исследовали пространственно-временных выражению ризобиальной симбиоз конкретных конкреций начала (НИН) промоутер Phaseolus vulgaris трансгенных волосатые корни. Использование баз данных генома растений и инструменты анализа, мы определили, изолированные и клонированных P. vulgaris Нин промоутер в transcriptional fusion журналисту химерных β-глюкуронидазы (GUS) гусь enhanced::GFP. Кроме того этот протокол описывает быстрое и универсальная система генетической трансформации в P. vulgaris , используя Agrobacterium rhizogenes индуцированных волосатые корни. Эта система создает ≥2 см волосатые корни на 10-12 дней после преобразования. Далее мы оценивали пространственно-временных выражение Нин промоутер в волосатые корни Rhizobium прививку периодическими интервалами после прививки. Наши результаты, изображенные на активность GUS показывают, что промоутер Нин был активен в процессе узелки. Вместе настоящий Протокол показано, как определить, изолировать, клонировать и характеризуют завод промоутер в общие корни волосатые бин. Кроме того этот протокол является простой в использовании в неспециализированных лабораториях.

Введение

Промоутеров являются важными молекулярных биологических инструментами, которые играют решающую роль в понимании регуляции экспрессии генов интерес. Учредителями являются последовательностей ДНК, расположенных вверх по течению перевода последовательностей инициации кодон гена и они несут Центральной нормативная информация генов; Таким образом их правильные аннотации и характеристика имеют жизненно важное значение для понимания функции гена. В зависимости от выражения шаблоны завод промоутеров, классифицируются как учредительный, ткане-, или развития этап конкретных и индуцибельной1. Достижения в области транскриптомики технологий, улучшение компьютерного моделирования и наличие все большего числа последовательности генома для различных видов растений способствовали крупномасштабных предсказание промоутер последовательности2.

С другой стороны важно также установить промоутер оценки инструментов и методов генетической трансформации, которые являются быстрый, эффективный и воспроизводимость. В отличие от других растений, модель функциональные характеристики общих генов бин бобовых (P. vulgaris) препятствует главным образом благодаря непокорных характер sp. фасоль для стабильной генетической трансформации. Переходных преобразований системы служат в качестве альтернативы для быстрого гена функциональная характеристика исследования3. В бобовых симбиоза научные исследования взаимодействие между бобовых растения-хозяина и ризобиальной бактерия является одним из самых шансов справиться с возникающими модель систем для функционального анализа конкреций специфичных генов и промоутер исследований. До настоящего времени, были несколько бобовых промоутеров, связанные с этим симбиозов характеризуется, viz., PT4 Люцерна truncatula 4, SWEET115, Lotus japonicus Циклоп, UBQ6, VAG17, глицин макс PT5 8, Exo70J9, P. vulgaris RbohB10,11,12, TRE113, PI3K14, TOR15, и т.д. СНГ элементы непосредственно влияют на регулирование ген. Фактор транскрипции ENBP1A связывается с регулирования региона СНГ (−692 bp) ранних nodulin VfENOD12, и это облегчает экспрессии гена репортера в конкреций Примордия Vicia Фаба16. Замена регулирования регионов СНГ (−161 для −48 bp) конкреций конкретной промоутера Легоглобин GLB3 с гетерологичных усечено промоутеров δ-p35S и δ-pNOS, привели к потере специфики конкреций и снижение активности промоутер17 .

Предыдущие доклады показывают, что фактор транскрипции Нин требуется для начала ризобиальной инфекции в клетках корневого волоска и необходимы также для органогенеза конкреций в japonicus л18. В настоящем исследовании мы описываем протокол для идентификации, изоляции, клонирование и характеристика конкреций конкретной промоутера в общие корни волосатые бин. Для достижения этой цели, мы выбрали ризобиальной промоутер Нин симбиоз конкретных P. vulgaris и клонирования в transcriptional fusion журналисту химерных гусь enhanced::GFP. Кроме того этот протокол описывает быстрое и универсальная система генетической трансформации в P. vulgaris , используя A. rhizogenes индуцированных волосатые корни. Эта система генерирует волосатые корни в менее чем за 2 недели после преобразования. Наконец мы оценивали пространственно-временных выражение Нин промоутер в rhizobia колонизировали корневого узелки, ГСУ окрашивание.

Процедура, описанная здесь может быть полезным не только для изучения11 узелки и микоризации бобовых растений, но и для изучения промоутер выражений шаблонов в корни19. Кроме того этот протокол является простой в использовании в неспециализированных лабораториях.

протокол

1. Идентификация, изоляции и клонирование P. Vulgaris Нин промоутер

  1. Определите последовательность промоутер для гена интереса. Есть несколько баз данных генома и инструменты анализа для растений, таких как Phytozome, Ensembl растения, NCBI, и т.д. А бобовых промоутер P. vulgaris Нин (PvNIN; В этом исследовании20использовалась Phvul.009G115800).
  2. Дизайн oligos или для шлюза или традиционных энзима ограничения, клонирование в зависимости от системы векторного используется (рис. 1A).
    Примечание: Стандарт (25-35 bp), обессоленной грунтовки работа отлично. Рекомендуется обратный oligo последовательностей, которые фланге между промоутер и ген.
  3. Усиливает PvNIN промоутер региона (или промоутера региона гена интереса) от свежевыделенных P. vulgaris геномной ДНК с помощью набора oligo конкретной промоутера. Используйте высококачественный полимеразы с соблюдением следующих условий PCR: 95 ° C за 5 мин; 30 циклов (95 ° C за 30 сек, 55 ° C за 30 сек, 72 ° C в течение 1 мин); и 72 ° C за 5 мин.
  4. Запустите амплифицированного фрагмента на гель агарозы 1% на 60 V на каппу для геля 7 х 10 см и элюировать соответствующего ампликон (700 bp, рис. 1B) и клонов в pENTR/D-TOPO вектор согласно инструкциям производителя.
  5. Преобразовать 2 мкл реакции в сведущее Escherichia coli клеток с помощью инструкции изготовителя и пластина 150 мкл преобразования смеси на lysogeny брата (LB) дополнены канамицин 50 мг/Л (Kan50). Растут покрытием клетки при 37 ° C на ночь.
  6. Выберите 3-6 колоний и культуры, которые их на ночь в LB среде, содержащей Kan50. Изолировать плазмидной ДНК с помощью метода выбора и анализ методом ПЦР с помощью конкретных M13 oligos вектор плазмиды. Для ПЦР, использования 100 нг плазмида, 0: 3 вечера из oligos, 10 X буфер ПЦР, 0,5 U полимеразы дна Taq и дНТФ 10 мм.
  7. Используйте следующие условия амплификации PCR; 95 ° C 3 мин; 30 циклов (95 ° C за 30 сек, 58 ° C за 30 сек, 72 ° C для 75 s); и 72 ° C для 7 min. визуализировать продуктов ПЦР на геле агарозы 1%. Обеспечьте правильное вставки группы 1,024 bp и векторы без вставки будет иметь 324 группа bp (рис. 1 c).
  8. Выполните LR реакции между вектора входа (pENTR/D-топо-PvNIN) и назначения векторных pBGWFS7.021 с использованием коммерческих фермент смесь согласно инструкциям производителя.
  9. Преобразовать 2 мкл LR реакции в сведущее Escherichia coli клеток с использованием стандартных методов, как описано в инструкции изготовителя и пластина 150 мкл преобразования смеси на LB, дополняется 100 мг/Л спектиномицин (Spe100). Растут покрытием клетки при 37 ° C на ночь.
  10. Выберите примерно 5 колоний и культуры их на ночь в LB среде, содержащей Spe100. Изолировать плазмидной ДНК с помощью метода выбора и анализа плазмида методом ПЦР с использованием конкретной промоутера oligos.
  11. Использование условия PCR в шаге 1.3. Визуализация продуктов ПЦР на геле агарозы 1% для подтверждения амплификации. Ампликонов являются 700 bp.
  12. С конкретной промоутера oligos проверить подлинность вставки последовательность положительных плазмид pBGWFS7.0/PvNIN::GUS-GFP (рис. 1 d).
  13. Трансформировать плазмид в A. rhizogenes штамм K599 (Однако, могут использоваться любые другие штаммы A. rhizogenes ). 2 мкл плазмида prep для 50 мкл electrocompetent клеток и electroporate в кювет 1 мм со следующими параметрами: 1,8 кв, 25 МКФ и 200 Ω.
  14. Восстановить клетки в ~ 500 мкл SOC среднего и погрозит 28 ° C в течение 2 ч. плиты на LB-Spe100 и расти на 28 ° C в течение 2 дней.
  15. Выполните колонии скрининг, как указано в шаге 1.7 и условия PCR как в шаге 1.3. Сделать Глицерин запасов от положительных клонов и хранить их в-80 ° C.
  16. Использование культуры а. rhizogenes , укрывательство пустой pBGWFS7.0 вектор как отрицательный контроль.

2. A. Rhizogenes преобразован волосатые корни общей бин

  1. Стерилизовать семена фасоли (cv. Негро ХамапаP. vulgaris ) (около 20) в 50 мл 96% этанола за 1 мин и отмены этанола; Затем добавьте 50 мл 20% хлорки (Гипохлорит натрия) для 10 мин, при постоянном перемешивании в Ламинарный шкаф. Удаление отбеливателя и мыть в избыток стерильной воде 3 раза.
    Примечание: Другие P. vulgaris сортов может использоваться для индукции волосатые корня.
  2. Прорастают стерилизованные семена на стерильную фильтр бумаги, смоченной Broughton & Dilworth (B & D) решения22 (Таблица 1) за 2 дня в темноте на 28 ° C.
  3. За день до преобразования подготовьте следующее:
    1. Полоса из 150 мкл A. rhizogenes культуры, укрывательство бинарный вектор (подготовлен в шагах 1.13 и 1.14) на твердых LB Spe100 и расти на 28 ° C на ночь.
    2. Заполнить трубу 15 мл с B & D решения и заменить колпачок с двойной слоистых алюминиевой фольгой. Собрать это в стеклянную трубку 22 см, содержащие 10 мл B & автоклава и D решения (рис. 2 c) его.
  4. В день Преображения, соберите следующие стерильных материалов в Ламинарный шкаф: проросшие семена из шага 2.2, культуры пластина из шага 2.3.1, трубы из шага 2.3.2, двойной стерильной дистиллированной воды (10 мл), пипетки и наконечники, стерильный пинцет, и 3 мл-шприцы.
  5. Используйте кончик изогнутых 200 мкл скрип A. rhizogenes клетки от пластины в пробки microcentrifuge и Ресуспензируйте в 1 мл стерильной воды двойной. Аналогичным образом отдельно готовить векторного управления ячейки.
    1. Смешайте нежно ресуспензируйте клетки. Сделать не вихря.
  6. Сделайте отверстие 3 мм на алюминиевой фольге труб из шага 2.3.2, используя кончик стерильной пипеткой.
  7. Собрать клетки (промоутер или векторного управления) с шагом 2,5 с шприц и слегка укол гипокотиля проросшие семена с кончик иглы (рис. 2 g).
    Примечание: Убедитесь в том, что игла проникает (4 - 6 раз) сосудистых тканей и вставляют небольшой (~ 5 мкл) капель на рану на различных позициях вокруг гипокотиля ячейки.
  8. Осторожно вставьте корни саженцев вводят в 3 мм отверстие трубки 15 мл, содержащих B & D решения. Вернуть все настройки в 22 мл стеклянных трубок и запечатать их для поддержания влажности.
  9. Инкубировать трубы в камере роста, поддерживается на 28 ° C с 16 h свет: 8 h темные фотопериода.
    Примечания: 3-4 дня после инкубации, растения растут на ободе 22 мл стеклянных трубок.
На данном этапе снимите крышки и уплотнение ОПРАВЫ с парафина вокруг ствола, как показано на рисунке 2I.
  • Соблюдать каллуса на ранение участках на 5-7 дней и найти ~ 2 см волосатые корни на 10-12 дней после преобразования.
    Примечание: Важно сохранить B & D решения постоянно в пластмассовых и стеклянных трубок.
  • После 2 недель удалите основной корень, резка стебля 2 см ниже волосатые корни и пересадить первичных корней в горшки, содержащие стерильные вермикулит. Поддерживать растения в камере роста (16 h свет: 8 h темно на 28 ° C) и орошения с B & D решения.

    • 3. промоутер анализ: Нин промоутер выражение в ризобиальной узелки общей бин

    1. Для индукции корневого узелки прививать Rhizobium tropici или Rhizobium Этли (, которые совместимы с общей бин) в 100 мл среды PY (Пептон 0,5 г, 0,3 г дрожжей экстракт) дополняется 700 мм CaCl2 и 20 мг мл−1 Налидиксовая кислота. Инкубируйте на 30 ° C в течение 24 ч с встряхивания на 300 об/мин.
      Примечание: Любые конкретные антибиотики могут использоваться в случае трансгенных Rhizobium.
    2. Пелле клетки в центрифуге для 3 мин при 2800 x g при комнатной температуре и Ресуспензируйте в 10 мл 10 мм MgSO4. Отрегулируйте ОД клеток до 0,6 на од600 разрежения с 10 мм MgSO4.
    3. Прививать 1-2 мл культуры (приготовленного из шага 3.2) на заводе (промоутер и вектор управления) для стимулирования роста конкреций на волосатые корешки. Поливать растения с B & D решения с ограниченным азота (2 мм KNO3) для содействия узелки.
    4. В зависимости от экспериментальных потребность собирают волосатые корни в разное время точках. Сбор образцов для изучения потоков инфекции между 3-5 дней пост прививка (dpi).
      Примечание: Первичных конкреций и молодые конкреций может быть учился в dpi 6-9 и 10-12 дней dpi, соответственно. Наконец, Зрелые и функциональные узлы могут быть изучены в 14-21 ДОИ и senesced узелки на > 28 dpi.
    5. Обработка корневого/конкреций для активность Репортер генов (GUS или GFP). Анализировать активность GUS согласно Протоколу описанные Джефферсон23. GFP наблюдать под флуоресцентным микроскопом. Возбуждения флуоресценции GFP с голубой Аргоновый лазер Иона (488 нм) и собирать испускаемого флуоресценции от 510 до 540 Нм.

    Результаты

    Цель этого исследования заключалась в оценке пространственно-временных выражению конкреций-конкретных P. vulgaris Нин. Для этого был выбран 700 bp региона вверх по течению кодон инициации перевода по Нин Джин и набор oligos был разработан, как изображено на

    Обсуждение

    Во время функционального анализа генов исследование картин выражения гена играет решающую роль в понимании пространственных и временных регуляции генов в естественных условиях. Хорошо известный метод для изучения картин выражения гена является клонирование гена промоутер обла...

    Раскрытие информации

    Авторы не имеют ничего сообщать.

    Благодарности

    Эта работа частично была поддержана дель Dirección General de по личной истории, DGAPA/PAPIIT-НАУ (Грант нет. IN219916 Мирча и IA205117 для М-K. A) и y Consejo Nacional de наук Tecnològia (КОНАСИТ Грант № 240614 м.л.).

    Материалы

    NameCompanyCatalog NumberComments
    Primers for qRT-PCR assay
    pNIN ForwardCACC ATA GCT CCC CAA AAT GGT AT
    pNIN ReverseCAT CTT CCT TCC ACT AAC TAA C
    M13 ForwardGTA AAA CGA CGG CCA G
    M13 ReverseCAG GAA ACA GCT ATG AC
    NameCompanyCatalog NumberComments
    REAGENTS
    pENTR/D-TOPO Cloning KitInvitrogenK243520
    Gateway LR Clonase II Enzyme Mix Invitrogen11791100
    pBGWFS7.0 Plant systems biologyhttps://gateway.psb.ugent.be/vector/show/pBGWFS7/search/index/
    Platinum Taq DNA PolymeraseThermoFisher Scientific10966018
    DNeasy Plant Mini KitQiagen69104
    PureLink Quick Gel Extraction KitThermoFisher ScientificK210012
    Platinum Pfx DNA PolymeraseInvitrogen11708013
    Certified Molecular Biology AgaroseBio-Rad1613102
    One Shot TOP10 Chemically Competent E. coliInvitrogenC404006
    NaclSigma-AldrichS7653
    TryptoneSigma-AldrichT7293-250G
    Yeast extractSigma-AldrichY1625-250G
    Bacteriological agarSigma-AldrichA5306-1KG
    Kanamycin sulfateSigma-Aldrich60615-25G
    Spectinomycin sulfateSigma-AldrichPHR1441
    Ethyl alcoholSigma-AldrichE7023
    Bacteriological peptoneSigma-AldrichP0556
    Calcium chlorideSigma-AldrichC1016
    Nalidixic acidSigma-AldrichN8878
    Magnesium sulfateSigma-AldrichM7506
    Gel loading solutionSigma-AldrichG7654
    NameCompanyCatalog NumberComments
    EQUIPMENT
    ThermocyclerVeriti Thermal Cycler4375786
    CentrifugeSigmaSigma 1-14K
    Gel documentation unitCarestreamGel Logic 212 PRO
    MaxQ SHKE6000 6000 Shaking Incubator - 115VACThermo scientificEW-51708-70
    Plant growth chamberMRCPGI-550RH
    Horizantal laminarair flow cabinateLumistellLH-120
    Fluorescent microscopeLeicaDM4500 B
    Petridishsym laboratorios90X15
    Scalpel BladeFisher scientific53223
    Falcon 15mL Conical Centrifuge TubesFisher scientific14-959-53A
    22 mL glass tubesThomas scientific45048-16150

    Ссылки

    1. Hernández-Garcia, C. M., Finer, J. J. Identification and validation of promoters and cis-actingregulatory elements. Plant Science. 217-218, 109-119 (2014).
    2. Dhanapal, A. P., Govindaraj, M. Unlimited Thirst for Genome Sequencing, Data Interpretation, and Database Usage in Genomic Era: The Road towards Fast-Track Crop Plant Improvement. Genetics Research International. , 684321 (2015).
    3. Nanjareddy, N., Arthikala, M. K., Blanco, L., Arellano, E. S., Lara, M. Protoplast isolation, transient transformation of leaf mesophyll protoplasts and improved Agrobacterium-mediated leaf disc infiltration of Phaseolus vulgaris: Tools for rapid gene expression analysis. BMC Biotechnol. 16 (1), 53 (2016).
    4. Pumplin, N., Zhang, X., Noar, R. D., Harrison, M. J. Polar localization of a symbiosis-specific phosphate transporter is mediated by a transient reorientation of secretion. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (11), E665-E672 (2012).
    5. Kryvoruchko, I. S., et al. MtSWEET11, a Nodule-Specific Sucrose Transporter of Medicago truncatula. Plant Physiol. 171 (1), 554-565 (2016).
    6. Suzaki, T., Yano, K., Ito, M., Umehara, Y., Suganuma, N., Kawaguchi, M. Positive and negative regulation of cortical cell division during root nodule development in Lotus japonicus is accompanied by auxin response. Development. 139 (21), 3997-4006 (2012).
    7. Suzaki, T., et al. Endoreduplication-mediated initiation of symbiotic organ development in Lotus japonicus. Development. 141 (12), 2441-2445 (2014).
    8. Qin, L., et al. The high-affinity phosphate transporter GmPT5 regulates phosphate transport to nodules and nodulation in soybean. Plant Physiol. 159 (4), 1634-1643 (2012).
    9. Wang, Z., Panfeng, L., Yan, Y., Chi, Y., Fan, B., Chen, Z. Expression and Functional Analysis of a Novel Group of Legume-specific WRKY and Exo70 Protein Variants from Soybean. Sci Rep. 6, 32090 (2016).
    10. Montiel, J., et al. A Phaseolus vulgaris NADPH oxidase gene is required for root infection by Rhizobia. Plant Cell Physiol. 53 (10), 1751-1767 (2012).
    11. Arthikala, M. K., et al. PvRbohB negatively regulates Rhizophagus irregularis colonization in Phaseolus vulgaris. Plant Cell Physiol. 54 (8), 1391-1402 (2013).
    12. Arthikala, M. K., Sánchez-López, R., Nava, N., Santana, O., Cárdenas, L., Quinto, C. RbohB a Phaseolus vulgaris NADPH oxidase gene, enhances symbiosome number, bacteroid size, and nitrogen fixation in nodules and impairs mycorrhizal colonization. New Phytol. 202 (3), 886-900 (2014).
    13. Barraza, A., et al. Down-regulation of PvTRE1 enhances nodule biomass and bacteroid number in the common bean. New Phytol. 197 (1), 194-206 (2013).
    14. Estrada-Navarrete, G., et al. An autophagy-related kinase is essential for the symbiotic relationship between Phaseolus vulgaris and both rhizobia and arbuscular mycorrhizal fungi. Plant Cell. 28 (9), 2326-2341 (2016).
    15. Nanjareddy, K., et al. A Legume TOR Protein Kinase Regulates Rhizobium Symbiosis and Is Essential for Infection and Nodule Development. Plant Physiol. 172 (3), 2002-2020 (2016).
    16. Frühling, M., Schröder, G., Hohnjec, N., Pühler, A., Perlick, A. M., Küster, H. The promoter of the Vicia faba L. gene VfEnod12 encoding an early nodulin is active in cortical cells and nodule primordia of transgenic hairy roots of Vicia hirsuta as well as in the prefixing zone II of mature transgenic V. hirsuta root nodules. Plant Science. 160 (1), 67-75 (2000).
    17. Szabados, L., Ratet, P., Grunenberg, B., de Bruijn, F. J. Functional analysis of the Sesbania rostrata leghemoglobin glb3 gene 5'-upstream region in transgenic Lotus corniculatus and Nicotiana tabacum plants. Plant Cell Online. 2 (10), 973-986 (1990).
    18. Madsen, L. H., Tirichine, L., Jurkiewicz, A., Sullivan, J. T., Heckmann, A. B., Bek, A. S., Ronson, C. W., James, E. K., Stougaard, J. The molecular network governing nodule organogenesis and infection in the model legume Lotus japonicus. Nat Commun. 12, 1-10 (2010).
    19. Montiel, J., Arthikala, M. K., Quinto, C. Phaseolus vulgaris RbohB functions in lateral root development. Plant Signal Behav. 8 (1), 1-3 (2013).
    20. Nanjareddy, K., Arthikala, M. K., Gómez, B. M., Blanco, L., Lara, M. Differentially expressed genes in mycorrhized and nodulated roots of common bean are associated with defense, cell wall architecture, N metabolism, and P metabolism. PLoS ONE. 12 (8), e0182328 (2017).
    21. Karimi, M., Inzé, D., Depicker, A. Gateway vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation. Trends Plant Sci. 7 (5), 193-195 (2002).
    22. Broughton, W. J., Dilworth, M. J. Control of leghemoglobin synthesis in snake beans. Biochem J. 125 (4), 1075-1080 (1971).
    23. Jefferson, R. A. Assaying chimeric genes in plants, the GUS gene fusion system. Plant Mol Biol Rep. 5 (4), 387-405 (1987).
    24. Cho, H. J., Farrand, S. K., Noel, G. R., Widholm, J. M. High-efficiency induction of soybean hairy roots and propagation of the soybean cyst nematode. Planta. 210 (2), 195-204 (2000).
    25. Deng, Y., Mao, G., Stutz, W., Yu, O. Generation of Composite Plants in Medicago truncatula used for Nodulation Assays. J. Vis. Exp. (49), e2633 (2011).
    26. Kumagai, H., Kouchi, H. Gene silencing by expression of hairpin RNA in Lotus japonicus roots and root nodules. Mol Plant Microbe Interact. 16 (8), 663-668 (2003).
    27. Okamoto, S., Yoro, E., Suzaki, T., Kawaguchi, M. Hairy Root Transformation in Lotus japonicus. Bio-protocol. 3 (12), e795 (2013).
    28. Jacobs, T. B., Martin, G. B. High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots. J. Vis. Exp. (110), e53843 (2016).
    29. Estrada-Navarrete, G., et al. Agrobacterium rhizogenes-transformation of the Phaseolus spp.: a tool for functional genomics. Mol Plant Microbe Interact. 19 (12), 1385-1393 (2006).

    Перепечатки и разрешения

    Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

    Запросить разрешение

    Смотреть дополнительные статьи

    130NINPhaseolus vulgarisRhizobium tropici

    This article has been published

    Video Coming Soon

    JoVE Logo

    Конфиденциальность

    Условия эксплуатации

    Политика

    СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

    РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

    НОВОСТИ JoVE

    Исследования

    Образование

    АВТОРЫ

    Библиотекарь

    О JoVE

    Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены