АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Мы описываем процедуры изоляции растущих яйцеклеток от фолликулов яичников на ранних стадиях развития, а также установку системы культуры in vitro, которая может поддерживать рост и дифференциацию до полностью выращенной стадии.

Аннотация

Ограниченный резерв зрелых, удобренных яйцеклеток представляет собой основной барьер для успеха вспомогательной репродукции у млекопитающих. Учитывая, что в период репродуктивной жизни только около 1% яйцеклеток в яичниках зрелых и овуляции, несколько методов были разработаны для увеличения эксплуатации яичников резерва для растущей популяции неовуляторных фолликулов. Такие технологии позволили проведить сохранение плодородия, программы отбора скота и сохранения исчезающих видов. Тем не менее, огромный потенциал резерва яичников по-прежнему в значительной степени неэксплуатируются. У коров, например, предпринимались некоторые попытки поддержать культуру экстракорпорального использования яйцеклеток на конкретных стадиях развития, однако эффективные и надежные протоколы еще не разработаны. Здесь мы описываем культурную систему, которая воспроизводит физиологические условия соответствующей фолликулярной стадии, определяемой для развития в пробирке растущих яйцеклеток, собранных из ранних антральных фолликулов крупного рогатого скота на полностью выращенную стадию, соответствующую среднему антральную фолликулу in vivo. Сочетание гормонов и ингибитора фосфодиэстеразы 3 было использовано для предотвращения несвоевременного мейотического возобновления и для руководства дифференциацией яйцеклеток.

Введение

Во время репродуктивной жизни, только минимальная доля яйцеклеток, которые присутствуют в яичнике зрелые, высвобождаются в фаллопиевых труб после овуляции, и доступны для оплодотворения и развиваться в жизнеспособный эмбрион1. С другой стороны, большинство яйцеклеток в яичнике проходят атрезию и никогда не овуляции. Технологии производства эмбрионов in vitro (IVP) пытались увеличить эксплуатацию резерва яичников2,,3. До сих пор такие технологии позволяли мероприятия по сохранению плодородия, программам отбора скота и сохранению исчезающих видов. Тем не менее, большинство протоколов использовать яйцеклетки, которые в основном завершили фазу роста в антрал яичников фолликула, и, следовательно, называются полностью выращенных яйцеклеток. В крупного рогатого скота, где технологии IVP широко используются, полностью выращенные яйцеклетки достигают конечного диаметра около 120 мкм и собираются из фолликулов, которые охватывают от 2 до 8 мм в диаметре (средние антрал фолликулы)1. После изоляции от фолликулов такие яйцеклетки созревают и оплодотворяются в пробирке. Зиготы затем культурны до стадии бластоцист и либо переданы получателю или криоконсервированы. У крупного рогатого скота, как и у многих других видов, несмотря на потенциал, предлагаемый IVP, количество эмбриона в пробирке на корову в значительной степени не улучшась в течение последних 40 лет. Отчасти это связано с ограниченным числом полностью выращенных яйцеклеток, которые населяют яичник в данный момент времени, которые могут быть извлечены и подвергнуты стандартным методам IVP4,,5,,6.

Ооциты, заключенные в ранние антрал фолликулы, т.е. те фолликулы диаметром менее 2 мм, представляют собой потенциальный источник, который будет использоваться впрограммах сохранения плодородия 7, так как яичник примерно содержит в 10 раз больше ранних антрал-фолликулов, чем среднийантрал 8. Тем не менее, эти яйцеклетки все еще находятся в фазе роста и еще не достигли полностью выращенной стадии9. Таким образом, они по-прежнему транскрипционно активны, производя mRNAs, которые будут храниться для более поздних шагов развития, и еще не прошли весь процесс дифференциации, необходимые для придать яйцеклетки с возможностью спонтанного возобновления и завершения мейоза я когда-то изолированы от фолликулярногоотсека 10,11. Поэтому они не могут быть непосредственно представлены к стандартным протоколам созревания in vitro (IVM), но они требуют дополнительного периода культуры, который позволил бы им завершить фазу роста и правильно дифференцировать.

Переход от выращивания к полностью выращенной стадии, которая у крупного рогатого скота происходит, когда фолликул развивается от ранней антраля к средней антральную стадию, является одним из важнейших шагов во время развития яйцеклеток. В крупного рогатого скота, несколько исследований пытались повторить эти события впробирке2,12,,13,,14,,15,,16,,17,,18,19. Однако до настоящего времени никаких надежных протоколов не разрабатывалось, и сообщалось лишь об ограниченном успехе. Согласно предыдущим исследованиям20, эти растущие яйцеклетки представляют собой однородную популяцию. Помимо транскрипционной активной, их хроматин рассеивается в зародышевой везикуле (GV), в конфигурации, которая называется GV02,21. И наоборот, популяция полностью выращенных яйцеклеток, полученных из средних антрал фолликулов, является более неоднородной, состояние, которое отражается в различных степенях уплотнения хроматина (GV1, GV2 и GV3), которыеможно наблюдать 20. Среди них, предыдущие данные показали, что GV2 и GV3 ооцитов в целом характеризуется лучшим качеством и более высокойэмбриональной компетенции развития 20,21,22,23,24.

Начиная с вышеуказанных наблюдений, здесь мы описываем 5-дней культурную систему ооцитов (L-IVCO), которая позволяет дифференцировать ооциты, изолированные как кумулятиво-ооцитные комплексы (COCs) от ранних антралальных фолликулов. Эта стратегия культуры развивалась из 10 лет исследований, проведенных в нашей лаборатории и корни его землю на ранее разработанных 24-48 часов в пробирке ооцитов культуры (IVCO)2,недоношенных систем 23,25 и цинк добавок во время культуры яйцеклеток . Использовалась комбинация фолликулостимулирующего гормона (ФФГ) и ингибитора фосфодиэстеразы-3 (PDE3), способного усилить кумулятивно-ооцитнуюсвязь 2, предотвратитьнесвоевременное межиоптическое возобновление 2,атакже поддержать рост яйцеклеток 2.

протокол

Яичники были собраны от 4 до 8 лет Гольштейн молочных коров, восстановленных на местной скотобойне (INALCA S.p.A., Ospedaletto Lodigiano, LO, IT 2270M CE, Италия).

1. Подготовка средств массовой информации

ПРИМЕЧАНИЕ: Все средства массовой информации должны быть подготовлены по крайней мере за четыре часа до использования. Бикарбонат натрия буферизированных средств массовой информации инкубируются при 38,5 градусов по Цельсию и 5% CO2 в воздухе, максимальная влажность. В термостатической печи средства массовой информации с буфером HEPES поддерживаются при температуре 38,5 градусов по Цельсию.

  1. Длинная культура пробирки яйцеклеток (L-IVCO) среды
    1. Подготовка 15 мл базовой среды культуры (M199-B): Дополнение M199 с 2 мМ глутамин, 0,4% жирных кислот свободной бычьей сыворотки альбумин (BSA), 0,2 м натрия пируват, 25 мМ натрия бикарбонат, 0,1 мМ цистимин, 21,3 мкг/мл фенола красного, 75 мкг/мл канамицина и 4% поливинилпирролидон (PVP; 360 к молекулярному весу).
    2. Приготовьте 3 мл среды холдинга (M199-H): К M199-B добавьте 5 мкм цилостамида и вылейте его в чашку Петри диаметром 35 мм.
    3. Подготовка L-IVCO среды (M199-L): Дополнение M199-B с 0,15 мкг / мл сульфата, 10-4 МЕ / МЛ ФФГ, 10 нг / мл эстрадиола, 50 нг / мл тестостерона, 50 нг / мл прогестерона и 5 МК Цилостамид.
    4. Поместите 200 мкл среды M199-L в каждом колодец из 96 хорошо покрытием пластины. Заполните колодцы в четырех краях пластины стерильной культурной водой, чтобы компенсировать испарение и поддерживать соответствующую влажность во время культуры.
    5. Инкубировать пластину 96 хорошо и M199-H среды в инкубаторе при 38,5 градусов по Цельсию и 5% CO2 в воздухе, максимальная влажность.
  2. Среда вскрытия
    1. Подготовка среды вскрытия (M199-D): Дополнение M199 с 0,4% BSA фракции V, 0,164 мМ пенициллин, 0,048 мМ стрептомицин, 1790 единиц / L гепарин. M199-D может быть подготовлен оптом, распределяется в 20 мл aliquots и хранится при 4 кк в течение 6 месяцев. При необходимости, тепло и дополнить 1 aliquot.
    2. Приготовьте 20 мл M199-D, дополненный 5 цилостамидом (M199-D цилостамид).

2. Сбор и обработка яичников

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры проводятся при комнатной температуре (26 градусов по Цельсию), если не указано иное.

  1. Восстановление яичников на скотобойне от коров.
  2. Поместите яичники в стерильный солевой раствор (NaCl, 9 г/л) при 26 - 28 градусах Цельсия, добавленных пенициллином 100 U/mL и стрептомицином 0,1 мг/мл.
  3. Транспорт органов в лабораторию в теплом стерильном солинии в пределах 4 ч.
  4. Вымойте яичники 4x в стерильном солевом растворе, поддерживаемом при 26 градусах Цельсия.
  5. Удалите все средние и большие антрал фолликулы, аспирируя все фолликулы диаметром более 2 мм с помощью иглы диаметром 18 Г, подключенной к аспирированному насосу с вакуумным давлением, установленным на уровне -28 мм рт. ст., и поместите аспирированные яичники в стакан со стерильным солевым раствором при 26 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Удаление содержимого фолликулов 2 мм является критическим шагом, чтобы удалить как можно больше источника полностью выращенных яйцеклеток, которые бы "загрязнять" эксперимент.
  6. Под горизонтальным капотом ламинарного потока поместите один яичник в то время на стерильную полиэтиленовую разделольную доску. С помощью хирургического лезвия No 22, установленного на скальпеле, вырезать ломтики коры яичников (внешняя часть яичника, которая содержит фолликулы), толщиной 1,5 - 2 мм и параллельно основной оси органа.
  7. Поместите ломтики коры яичников в стерильную стеклянную чашку Петри, покрытую препаравной средой, на теплую тарелку при 38,5 градусов по Цельсию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Отныне все процедуры выполняются при 38,5 градусов по Цельсию с помощью теплой пластины.

3. Отбор и изоляция фолликулов и извлечение COCs

  1. Поместите один ломтик коры яичников в 60 мм стеклянную чашку Петри с 2-3 мл M199-D.
  2. Используя рассечение микроскопа, выберите фолликулы между 0,5 - 2 мм с помощью микрометра оборудованных окуляр.
  3. Определите здоровые, неатретические фолликулы под стереомикроскопом. Оцените атрезию фолликула, наблюдая морфологические параметры, такие как очень ясный полупрозрачный вид, с темным COC внутри. Отбросьте атретические фолликулы и обработать все остальные.
  4. С помощью хирургического лезвия No 22, установленного на ручке скальпеля, удаляют ткани яичников, окружающие фолликул с одной стороны, пока фолликул не будет выставлен на одном краю.
  5. Используя иглу 26G, установленную на шприце, тщательно сделайте щель в открытой стенке фолликула. Это действие выпустит фолликулярное содержание, состоящее из КОК, фолликулярной жидкости и скоплений клеток.
  6. Определите COC под микроскопом и изучить на целостность cumulus, zona pellucida целостности и однородности цитоплазмы. Если эти критерии будут выполнены, аспирировать COC с помощью P20 пипетки.
  7. Поместите изолированный COC в M199-D цилостамида.
  8. Продолжить процедуру изоляции в течение 30 минут.

4. Отбор КОК, подлежащих культуре in vitro

  1. Под микроскопом вскрытия выберите здоровые COC на основе критериев в шаге 3.6.
  2. В 60 мм чашке Петри, подготовить 16 капель 20 МКЛ M199-D цилостамида и место один здоровый КОК на каплю (Рисунок 1A).
  3. С помощью перевернутого микроскопа, прикрепленного к камере, измеряет диаметр яйцеклетки, исключая зону pellucida, используя программное обеспечение, предоставляемое камерой.
  4. С четкой визуализацией яйцеклетки, сделать два перпендикулярных измерений, исключая zona pellucida (Рисунок 1B).
  5. Убедитесь, что среднее измерение двух яйцеклеток, за исключением зоны pellucida, находится в пределах 100 - 110 мкм. Откажитесь от COC с не округлыми ооцитами или ооцитами, которые не измеримы.
  6. Передача выбранных COCs в 35 мм блюдо, содержащее M199-H среднего и держать их в инкубаторе при 38,5 градусов по Цельсию и 5% CO2 в воздухе, максимальная влажность до шага 5,1.
  7. Повторите шаги 3 и 4 до 4x. Общее рабочее время не должно превышать 2 ч.

5. Длинная культура пробирки яйцеклеток (L-IVCO)

  1. Передача одного COC на колодец в центре хорошо 96 пластины, которые будут подготовлены в шаге 1.1.5.
  2. Инкубировать пластину в течение 5 дней при 38,5 градусов по Цельсию и 5% CO2 в воздухе, максимальная влажность.
  3. Каждый день (день 2 и день 4) подготовить свежие M199-L, как описано в шаге 1.
  4. Обновив половину среды, удалив 100 л среды и заменив 100 л свежеприготовленного M199-L. Выполните среднее обновление под стереомикроскопом и избегайте перемещения COCs в колодец.

6. Классификация COC после культуры

  1. В конце L-IVCO проанализируйте морфологию COCs под микроскопом вскрытия.
  2. Классифицировать, как по изображено на рисунке 2.
    1. Классифицировать как класс 1, если COCs показать компактный кучевые клетки инвестиций без признаков расширения cumulus и дегенерации клеток.
    2. Классифицировать как класс 2, если COCs показать компактный cumulus ячейки инвестиций без признаков расширения cumulus и дегенерации клеток и с antrum-как образование в кучевые массы.
    3. Классифицировать как класс 3, если COCs показывают несколько слоев кучевых клеток без признаков расширения cumulus и некоторые дезагрегированные клетки во внешнем слое кучевых клеток и не antrum-как образование.
    4. Классифицировать как класс 4, если COCs показывает обильные потери кучевых клеток, простирающихся на более чем 50% поверхности яйцеклеток, и признаки дегенерации клеток и клеточного мусора.

7. Оценка мейотической прогрессии после культуры

  1. Денудация яйцеклеток яйцеклеток ооцитов
    1. Поместите каждый КОК в один колодец из четырех хорошо пластины, содержащей 400 МКЛ 199D на колодец.
    2. Под микроскопом вскрытия аккуратно удалите кучевые клетки механически, повторив пипетку, установленную на уровне 130-140 МКЛ.
    3. После того, как яйцеклетки свободны от кумулятивных инвестиций, перенесите их в другой колодец, содержащий 199D.
    4. Повторите процесс до тех пор, пока все яйцеклетки полностью оголикнул.
  2. Ооциты ядерного окрашивания
    ПРИМЕЧАНИЕ: Отныне все процедуры выполняются при комнатной температуре. Реагенты находятся при комнатной температуре.
    1. Зафиксировать яйцеклетки в параформальдегиде 4% в фосфатной буферной солевой растворе (PBS) в течение 1 ч.
      ВНИМАНИЕ: Носите средства индивидуальной защиты при обработке параформальдегида и утилизируете загрязненные материалы в соответствии с руководящими принципами удаления опасных отходов.
    2. Вымойте яйцеклетки 3x в течение 5 мин каждый в PBS, содержащий 1% поливинилалкохол (PVA).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы могут быть обработаны сразу или храниться при 4 кк в течение максимум одной недели.
    3. Поместите яйцеклетки в PBS, содержащие 0,1% Тритон X в течение 10 мин.
    4. Вымойте яйцеклетки 3x в течение 5 мин каждый в PBS, содержащий 1% PVA.
    5. Поместите ооциты сингулярно в капли 5 МКЛ антифадной среды, дополненной 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) дилактатом (1 мкг/мл) над горкой.
    6. Поместите две полосы двусторонний ленты вдоль длинных сторон слайда, чтобы избежать чрезмерного уплощения яйцеклеток при вводе крышки скольжения на вершине.
    7. Поместите крышку скольжения на вершине, сделать его придерживаться ленты и держать в темноте при обработке всех образцов.
    8. Проанализируйте ооциты с помощью обычного микроскопа эпифлюоресценции, оснащенного фильтрами DAPI (Возбуждение/Выброс: 358⁄461) для оценки мейотической прогрессии яйцеклеток.
    9. Классифицировать яйцеклетки в соответствии с их мейотической прогрессии: GV - яйцеклетки с разной степенью конденсации хроматина в GV; МИ – яйцеклетки от GV, разбиваемые на метафазу I; и вырожденных - яйцеклетки, которые не могут быть определены как на любом из предыдущих этапов.

Результаты

В конце L-IVCO, валовая морфология COCs изменилась и 4 класса были определены на основе внешнего вида кучевых клеток, как показано на рисунке 2. Основываясь на морфологических критериев, обычнопринятых для выбора здоровыхCOCs 11,26,2...

Обсуждение

Здесь мы описываем культурную систему выращивания яйцеклеток, которая способствует развитию яйцеклеток в течение 5 дней, поддерживая их жизнеспособность и предотвращая мейотические возобновления. Этот последний аспект имеет первостепенное значение, чтобы обеспечить дальнейший рост...

Раскрытие информации

Авторов нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Регион Ломбардия PSR INNOVA N.201801061529 и UNIMI n.PSR 2019_DIP_027_ALUCI_01

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
4-well dishesNunclon179830
96-well dishBecton Dickinson Biosciences356649BioCoat™ Collagen I
Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)SigmaA8806
Bovine Serum Albumin (Fraction V)SigmaA3311
Cell culture waterSigmaW3500
CilostamideSigmaC7971
CysteamineSigmaM9768
Digital cameraNikon CorpCamera DS-5M
Disodium phosphateSigmaS5136
EstradiolSigmaE2758
Glutamax SupplementThermo Fisher Scientific35050061
Gonal FMerck Serono
HeparinSigmaH3149
HepesSigmaH3784
Vacuum pumpCook-IVF
IncubatorSanyo
Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticusSigmaK1377
Medium 199SigmaM3769Powder for hepes-buffered TCM199
Medium 199SigmaM2520Powder for M199-D
MicroscopeNikon CorpNikon Diaphot
MicroscopeNikon CorpEclipse E 600
Monopotassium phosphateSigmaP5655
ParaformaldehydeSigma158127
PenicilinSigmaP3032
Phenol RedSigmaP5530
Polyvinyl alcoholSigmaP8137
PolyvinylpyrrolidoneSigmaP5288360k molecular weight
Potassium chlorideSigmaP5405
ProgesteroneSigmaP8783
Sodium bicarbonateSigmaS5761
Sodium chorideSigmaP5886
Sodium pyruvateSigmaP4562
StreptomycinSigmaS9137
TestosteroneSigma86500
Triton XSigmaT9284
Vectashield with DAPIVector LaboratoriesH1200
WaterSigmaW3500
Zinc sulfate heptahydrateSigmaZ0251

Ссылки

  1. Lonergan, P., Fair, T. Maturation of Oocytes in Vitro. Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).
  2. Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s). Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).
  3. McLaughlin, M., Telfer, E. E. Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system. Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).
  4. Galli, C. Achievements and unmet promises of assisted reproduction technologies in large animals: a per-sonal perspective. Animal Reproduction. 14 (3), 614-621 (2017).
  5. Luciano, A. M., Sirard, M. A. Successful in vitro maturation of oocytes: a matter of follicular differentiation. Biology of Reproduction. 98 (2), 162-169 (2018).
  6. Lonergan, P., Fair, T. In vitro-produced bovine embryos: dealing with the warts. Theriogenology. 69 (1), 17-22 (2008).
  7. Clement, M. D. F., Dalbies-Tran, R., Estienne, A., Fabre, S., Mansanet, C., Monget, P. The ovarian reserve of primordial follicles and the dynamic reserve of antral growing follicles: what is the link. Biology of Reproduction. 90 (4), 85 (2014).
  8. Lussier, J. G., Matton, P., Dufour, J. J. Growth rates of follicles in the ovary of the cow. Journal of Reproduction and Fertility. 81 (2), 301-307 (1987).
  9. Fair, T., Hulshof, S. C., Hyttel, P., Greve, T., Boland, M. Oocyte ultrastructure in bovine primordial to early tertiary follicles. Anatomy and Embryology (Berlin). 195 (4), 327-336 (1997).
  10. Pavlok, A., Lucas-Hahn, A., Niemann, H. Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles. Molecular Reproduction and Development. 31 (1), 63-67 (1992).
  11. Blondin, P., Sirard, M. A. Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes. Molecular Reproduction and Development. 41 (1), 54-62 (1995).
  12. Harada, M., et al. Bovine oocytes from early antral follicles grow to meiotic competence in vitro: effect of FSH and hypoxanthine. Theriogenology. 48 (5), 743-755 (1997).
  13. Hirao, Y., et al. In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium. Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).
  14. Alm, H., Katska-Ksiazkiewicz, L., Rynska, B., Tuchscherer, A. Survival and meiotic competence of bovine oocytes originating from early antral ovarian follicles. Theriogenology. 65 (7), 1422-1434 (2006).
  15. Taketsuru, H., et al. Bovine oocytes in secondary follicles grow in medium containing bovine plasma after vitrification. Journal of Reproduction and Development. 57 (1), 99-106 (2011).
  16. Endo, M., et al. Estradiol supports in vitro development of bovine early antral follicles. Reproduction. 145 (1), 85-96 (2013).
  17. Makita, M., Miyano, T. Steroid hormones promote bovine oocyte growth and connection with granulosa cells. Theriogenology. 82 (4), 605-612 (2014).
  18. Yamamoto, K., et al. Development to live young from bovine small oocytes after growth, maturation and fertilization in vitro. Theriogenology. 52 (1), 81-89 (1999).
  19. Alam, M. H., Lee, J., Miyano, T. Inhibition of PDE3A sustains meiotic arrest and gap junction of bovine growing oocytes in in vitro growth culture. Theriogenology. 118, 110-118 (2018).
  20. Lodde, V., Modina, S., Galbusera, C., Franciosi, F., Luciano, A. M. Large-scale chromatin remodeling in germinal vesicle bovine oocytes: interplay with gap junction functionality and developmental competence. Molecular Reproduction and Development. 74 (6), 740-749 (2007).
  21. Lodde, V., et al. Oocyte morphology and transcriptional silencing in relation to chromatin remodeling during the final phases of bovine oocyte growth. Molecular Reproduction and Development. 75 (5), 915-924 (2008).
  22. Dieci, C., et al. Differences in cumulus cell gene expression indicate the benefit of a pre-maturation step to improve in-vitro bovine embryo production. Molecular Human Reproduction. 22 (12), 882-897 (2016).
  23. Soares, A. C. S., et al. Steroid hormones interact with natriuretic peptide C to delay nuclear maturation, to maintain oocyte-cumulus communication and to improve the quality of in vitro-produced embryos in cattle. Reproduction, Fertililty and Development. 29 (11), 2217-2224 (2017).
  24. Soares, A. C. S., et al. Characterization and control of oocyte large-scale chromatin configuration in different cattle breeds. Theriogenology. 141, 146-152 (2020).
  25. Franciosi, F., et al. Natriuretic peptide precursor C delays meiotic resumption and sustains gap junction-mediated communication in bovine cumulus-enclosed oocytes. Biology of Reproduction. 91 (3), 61 (2014).
  26. Luciano, A. M., et al. Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization. Molecular Reproduction and Development. 54 (1), 86-91 (1999).
  27. Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P. Effects of oocyte quality on development and transcriptional activity in early bovine embryos. Animal Reproduction Science. 71 (3-4), 143-155 (2002).
  28. Dieci, C., et al. The effect of cilostamide on gap junction communication dynamics, chromatin remodeling, and competence acquisition in pig oocytes following parthenogenetic activation and nuclear transfer. Biology of Reproduction. 89 (3), 68 (2013).
  29. Shu, Y. M., et al. Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes. Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).
  30. Lodde, V., et al. Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes. Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).
  31. Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. A. Gonadotrophin and steroid concentrations in bovine follicular fluid and their relationship to follicle size. Journal of Reproduction and Fertility. 65 (2), 467-473 (1982).
  32. Kruip, T. A., Dieleman, S. J. Steroid hormone concentrations in the fluid of bovine follicles relative to size, quality and stage of the oestrus cycle. Theriogenology. 24 (4), 395-408 (1985).
  33. Sakaguchi, K., et al. Relationships between the antral follicle count, steroidogenesis, and secretion of follicle-stimulating hormone and anti-Mullerian hormone during follicular growth in cattle. Reproductive Biology and Endocrinology. 17 (1), 88 (2019).
  34. Makita, M., Miyano, T. Androgens promote the acquisition of maturation competence in bovine oocytes. Journal of Reproduction and Development. 61 (3), 211-217 (2015).
  35. Walters, K. A., Allan, C. M., Handelsman, D. J. Androgen actions and the ovary. Biology of Reproduction. 78 (3), 380-389 (2008).
  36. Luciano, A. M., Pappalardo, A., Ray, C., Peluso, J. J. Epidermal growth factor inhibits large granulosa cell apoptosis by stimulating progesterone synthesis and regulating the distribution of intracellular free calcium. Biology of Reproduction. 51 (4), 646-654 (1994).
  37. Gordon, I. . Laboratory Production of Cattle Embryos, 2nd edn. , (2003).
  38. Telfer, E. E., McLaughlin, M., Ding, C., Thong, K. J. A two-step serum-free culture system supports development of human oocytes from primordial follicles in the presence of activin. Human Reproduction. 23 (5), 1151-1158 (2008).
  39. McLaughlin, M., Albertini, D. F., Wallace, W. H. B., Anderson, R. A., Telfer, E. E. Metaphase II oocytes from human unilaminar follicles grown in a multi-step culture system. Molecular Human Reproduction. 24 (3), 135-142 (2018).
  40. Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity. Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

161in vitro IVP

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены