Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этой статье мы опишем метод избирательного изменения экспрессии генов в сосудистом сплетении, избегая при этом какого-либо воздействия на другие области мозга.

Аннотация

Сосудистое сплетение (ЧП) служит важнейшими воротами для инфильтрации иммунных клеток в центральную нервную систему (ЦНС) как при физиологических, так и при патологических состояниях. Недавние исследования показали, что регуляция активности ChP может обеспечить защиту от заболеваний ЦНС. Тем не менее, изучение биологической функции ChP, не затрагивая другие области мозга, является сложной задачей из-за его тонкой структуры. В этом исследовании представлен новый метод нокдауна генов в тканях ChP с использованием аденоассоциированных вирусов (AAV) или белка рекомбиназы фермента циклизации (Cre), состоящего из последовательности TAT (CRE-TAT). Результаты показывают, что после введения AAV или CRE-TAT в боковой желудочек флуоресценция концентрировалась исключительно в ChP. Используя этот подход, исследование успешно сбило рецептор аденозинаА2А (A2AR) в ChP с помощью РНК-интерференции (РНК-интерференции) или Cre/локуса систем X-overP1 (Cre/LoxP) и показало, что этот нокдаун может облегчить патологию экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ). Этот метод может иметь важное значение для будущих исследований роли ChP в заболеваниях ЦНС.

Введение

Часто считалось, что сосудистое сплетение помогает поддерживать функциональный гомеостаз мозга за счет секреции спинномозговой жидкости (ликвора) и нейротрофического фактора головного мозга (BDNF)1,2. Растущее количество исследований за последние три десятилетия показало, что ChP представляет собой особый путь инфильтрации иммунных клеток в центральную нервную систему (ЦНС).

Плотные соединения (ТЖ) ChP, состоящие из монослойного эпителия ChP, поддерживают иммунологический гомеостаз, предотвращая проникновение макромолекул и иммунных клеток в мозг3. Однако при....

протокол

Все процедуры с животными, описанные в этом исследовании, были проведены в соответствии с рекомендациями, изложенными в Руководстве NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобренными Комитетом по уходу и использованию животных в Медицинском университете Вэньчжоу.

1. Животные

  1. Приобретите самцов мышей C57BL/6 в возрасте 8-12 недель и весом 20-22 г.
  2. Получена трансгенная линия мышей Rosa-LSL (Lox-StoP-Lox)-tdTomato (Ai9) и самцы мышей A2AR flox/flox .
  3. Случайным образом распределите мышей по двум группам и поместите их в клетки, максимум пять мышей в клетку, в соо....

Результаты

ChP-специфичный нокдаун A2AR путем ICV-инъекции AAV2/5-shRNA или CRE-TAT
РольА2АР в ЧП как мощного регулятора нейронной информации в патогенезе ЭАЭ остается неясной. Подавление экспрессии ChP-специфичного A 2A R может пролить свет на регуляторные эффекты A2AR на центральную им.......

Обсуждение

В исследовании были представлены два различных подхода к направленному нокдауну генов ChP. Первый подход включал в себя ICV-инъекцию CRE-TAT, содержащей Cre-рекомбиназу, мышам линии A2AR flox/flox . Второй подход заключался в введении ICV AAV2/5, несущей шРНКA2AR. Используяэти две ст?.......

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов или другой информации, которую они могли бы декларировать.

Благодарности

Мы выражаем признательность за поддержку этой работы Национальному фонду естественных наук Китая (грант No 31800903, присужден В. Чжэну) и Вэньчжоускому научно-техническому проекту (No Y2020426, присужден Ю. Ю. Вэну).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
A2ARflox/flox miceState Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry and Visual Science, Wenzhou Medical University
AAV2/5-A2AR-ShRNA virusShanghai Heyuan Biotechnology Co. LTDpt-4828
antifade mounting mediumBeyotime Biotechnology0100-01
borosilicate glass capillaryBeijing Meiyaxian Technology Co. LtdB100-50-10
brain stereotaxic apparatusRWD, Shenzhen69100
C57BL/6 miceBeijing Vital Charles River Laboratory Animal Technology Company
CRE-TAT recombinaseMilliporeSCR508
DAPIAbsinB25A031
frozen slicing machineLeicaCM1950
H37RaBecton Dickinson and company231141
Hamilton syringeHamilton, AmericanP/N: 86259
Incomplete Freunds adjuvantSigmaF5506
Laser confocal microscopeZeissLSM900
MOG35-55Suzhou Qiangyao Biotechnology Co., LTD4010006243
OCT glueEpredia6502p
paraformaldehydeChengdu Kelong Chemical Reagent Company30525-89-4
pentobarbital sodiumBoyun BiotechPC13003
Pipette gunEppendorfN45014F
PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis KitTakara 6110A
Real- Time PCR SystemBioRadCFX96
Rosa-LSL (Lox-StoP-Lox)-tdTomato miceJackson Laboratory
sucroseSangon BiotechA502792-0500
super high speed homogenizerIKA3737025
TrizolInvitrogen15596026
xylene solutionChengdu Kelong Chemical Reagent Company1330-20-7

Ссылки

  1. Damkier, H. H., Brown, P. D., Praetorius, J. Cerebrospinal fluid secretion by the choroid plexus. Physiological Reviews. 93 (4), 1847-1892 (2013).
  2. Lun, M. P., Monuki, E. S., Lehtinen, M. K. Development and functions of the cho....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

ChPCRE TATA2ACre X overP1EAE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены