Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол описывает количественный подход к измерению микробной автоагрегации с помощью визуализационной проточной цитометрии.

Аннотация

Полезные и пробиотические бактерии играют важную роль в организме своих хозяев, обеспечивая различные преимущества для здоровья, включая иммунитет к инфекционным заболеваниям. Семейство Lactobacillaceae состоит из грамположительных бактерий с подтвержденными пробиотическими свойствами. В этом исследовании виды Lactobacillaceae используются в качестве модели, чтобы продемонстрировать эффективность высокопроизводительного анализа одиночных клеток в изучении клеточной агрегации. Основное внимание уделяется анализу реакции этих полезных видов на простые углеводы из рациона.

Исследование демонстрирует, как проточная цитометрия (IFC) может преодолеть фундаментальные различия в сборке пробиотических бактерий в присутствии и отсутствии углеводов. IFC сочетает в себе мощность и скорость обычной проточной цитометрии с пространственным разрешением микроскопии, что позволяет проводить высокоскоростные сложные морфометрические измерения фенотипически определенным образом в библиотеке полезных бактериальных штаммов и условий. Этот протокол дает представление об аутоагрегации видов Lactobacillaceae и проливает свет на их реакцию на пищевые углеводы, способствуя пониманию механизмов, лежащих в основе полезных эффектов этих пробиотических бактерий.

Введение

Бактериальная аутоагрегация считается основным этапом формирования биопленки. В этом процессе (иногда также называемом аутоагглютинацией или флокуляцией) бактерии одного и того же типа образуют многоклеточные сгустки, которые в конечном итоге оседают на дне культуральных пробирок или прикрепляются к своей целевой тканиили поверхности.

Аутоагрегация является широко наблюдаемым явлением и до сих пор была продемонстрирована у грамотрицательных патогенов, таких как условно-патогенный Acinetobacter baumannii2, стоматологический патоген Aggregobacter actinomycetemcomitans

протокол

Файл .ast, с шаблоном для Lacticaseibacillus rhamnosus GG (LGG) в качестве примера, представлен в дополнительном файле кодирования 1.

1. Подготовка СМИ

  1. Приготовьте бульон Lactobacilli MRS в соответствии с инструкциями производителя (55 г в 1 л деионизированной воды) и агаровые пластины Lactobacilli MRS с 1,5% (мас./об.) агаром (см. Таблицу материалов). После стерилизации в автоклаве среда готова к использованию непосредственно или может храниться при температуре 4 °C.
  2. Приготовьте 50% (15 г в 1 л деионизированной воды) триптический соевый бульон (БТС) (см.

Результаты

Результаты показывают, что этот метод может легко измерить различия в аутоагрегации в ответ на пищевые сахара у бактерий LAB. Отделяя индивидуумов от агрегатов, метод позволяет рассчитать процент популяции агрегационных событий из всех событий в ответ на сбраживаемые или неферментируе.......

Обсуждение

Проточная цитометрия является широко используемым методом количественной оценки интенсивности флуоресценции в эукариотических клетках, но она может не обеспечить точных измерений бактериальных клеток из-за их большего размера или небольших агрегатов. Эти факторы могут существенно .......

Раскрытие информации

Никакой.

Благодарности

Эта работа была поддержана Израильским научным фондом (грант 119/16) и грантом IMoh (3-15656) для IKG. R.S. при поддержке стипендии Крейтмана.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
14 mL culture tubesFalcon352051
15 mL centrifuge tubeFalcon352096
Bacto AgarBaeton,Dickinson and Company214010
Bacto Typtic Soy BrothBaeton,Dickinson and Company211825
D-(+)-GlucoseSigmaG7021-1KG
D-(+)-Raffinose pentahydrateSigma83400-25G
Difco Lactobacilli MRS brothBaeton,Dickinson and Company288130
EASY-LOCK MICROPR. 1.5 mL (Eppendorf)FL medical23053
IDEAS SoftwareAmnis/EMD MilliporeN/A Details available at: https://www.merckmillipore.com/INTL/en/20150212_144049?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F&bd=1
ImageStream X Mark IIAmnis/EMD MilliporeN/A Details available at: https://www.merckmillipore.com/INTL/en/20150121_205948?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F
MOPS, 3-(N-morpholino)propanesulfonic acidFisher bioreagentsBP308-500
Potassium phosphate dibasicFisher Scientific, 174.18 g/molBP363-1
Potassium phosphate monobasicSigma, 136.09 g/molP0662-500G

Ссылки

  1. Trunk, T., Khalil, H. S., Leo, J. C. Bacterial autoaggregation. AIMS Microbiology. 4 (1), 140-164 (2018).
  2. Ishikawa, M., Nakatani, H., Hori, K. AtaA, a new member of the trimeric auto....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены