Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
В настоящем протоколе создана модель крысы с повреждением лицевого нерва с использованием микроскопии для исследования диагностических и терапевтических механизмов идиопатического паралича лицевого нерва.
Идиопатический паралич лицевого нерва является наиболее распространенным типом повреждения лицевого нерва, на долю которого приходится примерно 70% случаев периферического паралича лицевого нерва. Это заболевание может не только привести к изменению выражения лица, но и сильно повлиять на психологию пациентов. В тяжелых случаях это может повлиять на нормальную работу и жизнь пациентов. Таким образом, исследования по восстановлению повреждений лицевого нерва имеют важное клиническое значение. Для того чтобы изучить механизм возникновения этого заболевания, необходимо провести соответствующие эксперименты на животных, среди которых важнейшей задачей является установление животной модели с таким же патогенезом, как у человека. Сдавливание лицевого нерва в каменистой кости, особенно нервного ствола на стыке дистального конца внутреннего слухового прохода и лабиринтного сегмента, является патогенезом идиопатического паралича лицевого нерва. Для того, чтобы смоделировать это распространенное заболевание, в данном исследовании была создана модель компрессионной травмы основного экстракраниального сегмента лицевого нерва. Неврологические повреждения оценивали с помощью поведенческого, нейроэлектрофизиологического и гистологического исследования. Наконец, постоянная сила 50 g и травма зажимом 90 с были выбраны в качестве параметров травмы для построения стабильной модели идиопатического паралича лицевого нерва.
Идиопатический паралич лицевого нерва характерен как разновидность периферического паралича лицевого нерва неясной этиологии, острого начала и самоограничивающегося течения 1,2. Этиология и патогенез идиопатического паралича лицевого нерва до сих пор неясны3. В настоящее время существуют различные методы лечения паралича лицевого нерва4, и разнообразие методов лечения отражает отсутствие оптимальных вариантов лечения. Использование методов клеточной и молекулярной биологии для изучения механизма повреждения лицевого нерва является основой для создания эффективных методов лечения паралича лицевого нерва. Поэтому особенно важна подходящая и стабильная модель повреждения лицевого нерва.
В настоящее время не существует стандартного метода для создания модели повреждения лицевого нерва. В настоящее время к методам подготовки относятся инокуляция вируса5, транссекция6, холодная стимуляция7 и компрессия8. Считается, что вирусная инфекция, нейротрофобластический вазоспазм, аутоиммунное воспаление и т.д. могут вызывать местную ишемию, дегенерацию и отек лицевого нерва 9,10,11. Более того, все вышеперечисленные факторы могут вызвать сдавливание основного ствола лицевого нерва в узком костном канале лицевого нерва12,13. Кроме того, наиболее распространенными повреждениями периферических нервов, выявленными во время хирургических процедур, были компрессия и контузия14. Основываясь на вышеизложенных теориях и клинических явлениях, мы считаем, что подготовка модели повреждения лицевого нерва через компрессионную травму является более целесообразной. Однако большинство современных методов реализации компрессионных травм не дают количественных параметров силы и времени. В этом исследовании мы количественно оценили силу и продолжительность компрессионной травмы для улучшения воспроизводимости созданной модели.
Все эксперименты на животных были одобрены и контролировались Комитетом по этике животных больницы Синьхуа при Медицинской школе Шанхайского университета Цзяотун (XHEC-F-2023-061). Для настоящего исследования использовались самцы крыс Sprague-Dawley, 200-300 г. Животные были получены из коммерческого источника (см. Таблицу материалов). Крысы были случайным образом разделены на четыре группы (n = 10): группа фиктивной хирургии, группа 30-й травмы, группа 60-й травмы и группа 90-й травмы.
1. Индукция анестезии и подготовка животных
2. Создание модели локальной травмы раздавливания экстракраниального ствола лицевого нерва
ПРИМЕЧАНИЕ: Стерилизуйте все оборудование перед использованием. Все операции проводились в операционной.
3. Поведенческое тестирование
Примечание: Функция лицевого нерва крыс оценивалась до операции и через 48 ч после операции (Рисунок 1). Баллы по рефлексу моргания, пальп-движению и положению кончика носа были рассчитаны15. Чем выше общий балл, тем тяжелее степень повреждения лицевого нерва (табл. 1).
4. Нейроэлектрофизиологическое обнаружение
ПРИМЕЧАНИЕ: Лицевая электрография (ЭНог) проводилась до травмы, сразу после операции и через 48 ч после операции (Рисунок 2, Таблица 2, Таблица 3 и Таблица 4).
5. Гистологическое исследование
Поведенческое тестирование
До операции показатели мигательного рефлекса, пальп-движений и положения кончика носа составляли 0 баллов у всех экспериментальных крыс, что указывает на то, что у всех крыс функция лицевого нерва не повреждена. При оценке функци...
Необходимо изучить механизм восстановления повреждения лицевого нерва у пациентов с идиопатическим параличом лицевого нерва17. Степень повреждения модели лицевого нерва должна соответствовать следующим требованиям. Во-первых, степень повреждения лице...
Авторы заявили, что конкурирующих конфликтов интересов не существует.
Эта работа была поддержана проектными грантами от Национального фонда естественных наук Китая (82203637) и Фонда развития науки и технологий Нанкинского медицинского университета (NMUB20210220).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% paraformaldehyde fixing solution | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
Clean bench | Airtech | ||
Electronic balance | Shanghai Precision Instrument Factory | AS909 | |
Freezing microtome | Leica | CM1900 | |
Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Beyotime Biotechnology | C0105S | |
Ketamine | Sigma | 57074-21-2 | |
Optical photographic microscope | Olympus | IX90 | |
Pentobarbital sodium | ChemSrc | 57-33-0 | |
Quantitative peripheral nerve injury forceps | In-house | Patent number: CN20082015530.3 | |
Sprague-Dawley rats | Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd | ||
Surgical operating microscope | OPMI 1FR proergo | ZEISS |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены