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Method Article
본 프로토콜은 특발성 안면 마비의 진단 및 치료 메커니즘을 조사하기 위해 현미경을 사용하여 안면 신경 손상 쥐 모델을 확립합니다.
특발성 안면 마비는 가장 흔한 유형의 안면 신경 손상으로, 말초 안면 마비 사례의 약 70%를 차지합니다. 이 질병은 얼굴 표정의 변화로 이어질 수 있을 뿐만 아니라 환자의 심리에도 큰 영향을 미칠 수 있습니다. 심한 경우 환자의 정상적인 업무와 생활에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 안면 신경 손상 복구에 대한 연구는 중요한 임상적 의의를 가지고 있습니다. 이 질병의 메커니즘을 연구하기 위해서는 관련 동물 실험을 수행해야하며, 그 중 가장 중요한 과제는 인간 질병과 동일한 발병 기전을 가진 동물 모델을 확립하는 것입니다. petrous bone 내의 안면 신경, 특히 내이도의 원위 말단과 미로 분절의 교차점에 있는 신경 줄기의 압박은 특발성 안면 마비의 발병 기전입니다. 이 흔한 질병을 시뮬레이션하기 위해 이 연구에서는 안면 신경의 주요 두개외 분절에 대한 압박 손상 모델을 확립했습니다. 신경학적 손상은 행동적, 신경전기생리학적, 조직학적 검사를 통해 평가되었습니다. 마지막으로, 50g의 일정한 힘과 90초의 클램프 부상을 부상 매개변수로 선택하여 안정적인 특발성 안면 마비 모델을 구성했습니다.
말초 안면 마비의 일종으로, 특발성 안면 마비는 원인을 알 수 없고, 급성 발병이 발생하며, 자기 제한적인 경과를 보이는 특징이다 1,2. 특발성 안면 마비의 병인과 발병기전은 아직 불확실하다3. 현재 안면마비4에 대한 다양한 치료법이 존재하고 있으며, 치료법의 다양성은 최적의 치료법이 부족함을 반영한다. 안면 신경 손상의 메커니즘을 연구하기 위해 세포 및 분자 생물학 기술을 사용하는 것은 안면 마비에 대한 효과적인 치료 방법을 확립하기 위한 기초입니다. 따라서 적절하고 안정적인 안면 신경 손상 모델이 특히 중요합니다.
현재로서는 안면 신경 손상 모델을 수립하기 위한 표준 방법이 없습니다. 현재 제법 방법에는 바이러스 접종5, 절제6, 냉 자극7 및 압박8 방법이 있습니다. 바이러스 감염, 신경영양모세포성 혈관경련, 자가면역 염증 등은 모두 안면 신경의 국소 허혈, 변성 및 부종을 유발할 수 있는 것으로 여겨진다 9,10,11. 더욱이, 위의 모든 요인들은 좁은 뼈 안면 신경관(narrow boney facial nerve canal)에서 안면 신경의 주요 몸통의 압박을 유발할 수 있습니다12,13. 또한, 수술 과정에서 확인된 가장 흔한 말초 신경 손상은 압박과 타박상이었다14. 위의 이론과 임상 현상에 근거하여 압박 손상을 통해 안면 신경 손상 모델을 준비하는 것이 더 합리적이라고 생각합니다. 그러나 압박 부상을 구현하는 대부분의 현재 방법은 힘과 시간의 정량적 매개변수를 제공하지 않습니다. 이 연구에서는 확립된 모델의 재현성을 개선하기 위해 압박 손상의 힘과 지속 시간을 정량화했습니다.
모든 동물 실험은 상하이 자오퉁 의과대학 부속 신화병원 동물윤리위원회(XHEC-F-2023-061)의 승인 및 감독을 받았습니다. 본 연구에는 200-300g의 Sprague-Dawley 수컷 쥐가 사용되었습니다. 동물은 상업적 출처에서 얻었습니다 ( 재료 표 참조). 쥐는 무작위로 4개의 그룹(n = 10)으로 나뉘었습니다: 가짜 수술 그룹, 30대 부상 그룹, 60대 부상 그룹, 90대 부상 그룹.
1. 마취 및 동물 제제의 유도
2. 안면 신경의 두개외 몸통의 국소 압착 손상 모델 구축
알림: 사용하기 전에 모든 장비를 소독하십시오. 모든 수술은 수술실에서 이루어졌습니다.
3. 행동 테스트
참고: 쥐의 안면 신경 기능은 수술 전과 수술 후 48시간 후에 평가되었습니다(그림 1). 눈 깜빡임 반사, 손바닥 움직임, 코끝 위치의 점수는15점으로 계산되었다. 총점이 높을수록 안면 신경 손상의 정도가 더 심각합니다(표 1).
4. 신경 전기 생리학적 검출
참고: 안면 전기 촬영(ENoG)은 부상 전, 수술 직후, 수술 후 48시간 후에 수행되었습니다(그림 2, 표 2, 표 3 및 표 4).
5. 조직학적 검사
행동 테스트
수술 전 모든 실험 쥐에서 눈 깜빡임 반사, 손바닥 움직임 및 코 끝 위치의 점수는 0점이었으며, 이는 모든 쥐가 안면 신경 기능이 손상되지 않았음을 나타냅니다. 수술 48시간 후 실시한 안면 신경 기능 평가에서 각 부상 그룹에서 쥐의 개별 점수가 증가한 것으로 나타났습니다. 더욱이, 총점수는 안면 신경 손상 시간이 길어짐에 따라 점진적으?...
특발성 안면 마비 환자에서 안면 신경 손상의 복구 기전을 연구할 필요가 있다17. 안면 신경 손상 정도 모델은 다음 요구 사항을 충족해야 합니다. 첫째, 안면 신경 손상의 정도는 약물 개입 없이 완전히 자가 회복할 수 있는 Sunderland Grade 1st degree18과 같이 너무 경미해서는 안 됩니다. 둘째, 외과적 개입이 필요한 선덜랜드 5급과 ?...
저자들은 경쟁적인 이해 상충이 존재하지 않는다고 선언했습니다.
이 연구는 중국 국립자연과학재단(82203637)과 난징 의과대학 과학기술개발재단(NMUB20210220)의 프로젝트 보조금으로 지원되었습니다.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% paraformaldehyde fixing solution | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
Clean bench | Airtech | ||
Electronic balance | Shanghai Precision Instrument Factory | AS909 | |
Freezing microtome | Leica | CM1900 | |
Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Beyotime Biotechnology | C0105S | |
Ketamine | Sigma | 57074-21-2 | |
Optical photographic microscope | Olympus | IX90 | |
Pentobarbital sodium | ChemSrc | 57-33-0 | |
Quantitative peripheral nerve injury forceps | In-house | Patent number: CN20082015530.3 | |
Sprague-Dawley rats | Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd | ||
Surgical operating microscope | OPMI 1FR proergo | ZEISS |
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