Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu protokol, idiyopatik fasiyal paralizinin tanı ve tedavi mekanizmalarını araştırmak için mikroskopi kullanarak bir fasiyal sinir yaralanması sıçan modeli oluşturmaktadır.
İdiyopatik fasiyal paralizi, periferik fasiyal felç vakalarının yaklaşık %70'ini oluşturan en sık fasiyal sinir yaralanması türüdür. Bu hastalık sadece yüz ifadesinde bir değişikliğe yol açmakla kalmaz, aynı zamanda hastaların psikolojisini de büyük ölçüde etkiler. Ağır vakalarda, hastaların normal çalışmasını ve yaşamını etkileyebilir. Bu nedenle, fasiyal sinir yaralanması onarımı ile ilgili araştırmalar önemli bir klinik öneme sahiptir. Bu hastalığın mekanizmasını incelemek için, en önemli görevin insan hastalığı ile aynı patogeneze sahip bir hayvan modeli oluşturmak olduğu ilgili hayvan deneylerini yapmak gerekir. İdiyopatik fasiyal paralizinin patogenezi idiyopatik fasiyal paralizinin patogenezinde, özellikle internal kulak yolunun distal ucu ile labirent segmentinin birleştiği yerde bulunan sinir gövdesi başta olmak üzere petröz kemik içinde sıkışması meydana gelir. Bu yaygın hastalığı simüle etmek için, bu çalışmada fasiyal sinirin ana ekstrakraniyal segmentinin bir kompresyon yaralanması modeli oluşturulmuştur. Nörolojik hasar davranışsal, nöroelektrofizyolojik ve histolojik muayene ile değerlendirildi. Son olarak, stabil bir idiyopatik fasiyal paralizi modeli oluşturmak için 50 g sabit kuvvet ve 90 s klemp yaralanması yaralanma parametreleri olarak seçildi.
Periferik fasiyal paralizinin bir türü olan idiyopatik fasiyal paralizi, etiyolojisi bilinmeyen, akut başlangıçlı ve kendi kendini sınırlayan seyirli bir karakteristiktir 1,2. İdiyopatik fasiyal paralizilerin etiyolojisi ve patogenezi hala belirsizdir3. Şu anda, yüz felci4 için çeşitli tedavi yöntemleri vardır ve tedavilerin çeşitliliği, optimal tedavi seçeneklerinin eksikliğini yansıtmaktadır. Fasiyal sinir yaralanmasının mekanizmasını incelemek için hücresel ve moleküler biyoloji tekniklerini kullanmak, fasiyal felç için etkili tedavi yöntemleri oluşturmanın temelidir. Bu nedenle, uygun ve stabil bir fasiyal sinir yaralanması modeli özellikle önemlidir.
Şu anda, bir fasiyal sinir yaralanması modeli oluşturmak için standart bir yöntem yoktur. Mevcut hazırlama yöntemleri arasında virüs aşılama5, transeksiyon6, soğuk stimülasyon7 ve kompresyon8 yöntemleri bulunmaktadır. Viral enfeksiyon, nörotrofoblastik vazospazm, otoimmün inflamasyon vb.'nin hepsinin lokal iskemi, dejenerasyon ve fasiyal sinirin ödemine neden olabileceğine inanılmaktadır 9,10,11. Ayrıca, yukarıdaki faktörlerin tümü, dar kemikli fasiyal sinir kanalında fasiyal sinirin ana gövdesinin sıkışmasına neden olabilir12,13. Ek olarak, cerrahi işlemler sırasında tespit edilen en sık periferik sinir yaralanmaları kompresyon ve kontüzyondu14. Yukarıdaki teorilere ve klinik olaylara dayanarak, kompresyon yaralanması yoluyla fasiyal sinir yaralanması modelinin hazırlanmasının daha makul olduğuna inanıyoruz. Bununla birlikte, kompresyon yaralanmalarını uygulamak için mevcut yöntemlerin çoğu, kuvvet ve zamanın nicel parametrelerini sağlamamaktadır. Bu çalışmada, kurulan modelin tekrarlanabilirliğini artırmak için kompresyon yaralanmasının kuvvetini ve süresini ölçtük.
Tüm hayvan deneyleri, Şanghay Jiaotong Üniversitesi Tıp Fakültesi'ne (XHEC-F-2023-061) Bağlı Xinhua Hastanesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı ve denetlendi. Bu çalışma için 200-300 g ağırlığında Sprague-Dawley cinsi erkek sıçanlar kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz . Sıçanlar rastgele dört gruba ayrıldı (n = 10): Sahte cerrahi grubu, 30'lu yaralanma grubu, 60'lı yaralanma grubu ve 90'lı yaralanma grubu.
1. Anestezi indüksiyonu ve hayvan hazırlığı
2. Fasiyal sinirin ekstrakraniyal gövdesinin lokal ezilme yaralanması modelinin oluşturulması
NOT: Kullanmadan önce tüm ekipmanı sterilize edin. Tüm ameliyatlar ameliyathanede yapıldı.
3. Davranış testi
NOT: Sıçanların fasiyal sinir fonksiyonu ameliyattan önce ve ameliyattan 48 saat sonra değerlendirildi (Şekil 1). Göz kırpma refleksi, avuç içi hareket ve burun ucu pozisyonu skorları15 olarak hesaplandı. Toplam skor ne kadar yüksek olursa, fasiyal sinir yaralanmasının derecesi o kadar şiddetli olur (Tablo 1).
4. Nöroelektrofizyolojik algılama
NOT: Yüz elektrografisi (ENoG) yaralanmadan önce, ameliyattan hemen sonra ve ameliyattan 48 saat sonra yapıldı (Şekil 2, Tablo 2, Tablo 3 ve Tablo 4).
5. Histolojik muayene
Davranış testi
Ameliyattan önce, tüm deney sıçanlarında göz kırpma refleksi, avuç içi hareketi ve burun ucu pozisyonu skorları 0 puan idi ve bu da tüm sıçanların sağlam fasiyal sinir fonksiyonuna sahip olduğunu gösteriyordu. Ameliyattan 48 saat sonra fasiyal sinir fonksiyonu değerlendirmesinde, her yaralanma grubundaki sıçanların bireysel skorlarının arttığı bulundu. Ayrıca fasiyal sinir yaralanma süresinin uzaması ile toplam skor kademe...
İdiyopatik fasiyal paralizili hastalarda fasiyal sinir yaralanmasının onarım mekanizmasının incelenmesi gerekmektedir17. Fasiyal sinir yaralanması modelinin derecesi aşağıdaki gereksinimleri karşılamalıdır. İlk olarak, fasiyal sinir yaralanmasının derecesi, ilaç müdahalesi olmadan tamamen kendi kendini onarabilen Sunderland Grade 1st degree18 gibi çok hafif olmamalıdır. İkincisi, Sunderland 5. derece gibi c...
Yazarlar, rekabet eden herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82203637) ve Nanjing Tıp Üniversitesi (NMUB20210220) Bilim ve Teknoloji Geliştirme Vakfı'ndan () proje hibeleri ile desteklenmiştir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% paraformaldehyde fixing solution | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
Clean bench | Airtech | ||
Electronic balance | Shanghai Precision Instrument Factory | AS909 | |
Freezing microtome | Leica | CM1900 | |
Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Beyotime Biotechnology | C0105S | |
Ketamine | Sigma | 57074-21-2 | |
Optical photographic microscope | Olympus | IX90 | |
Pentobarbital sodium | ChemSrc | 57-33-0 | |
Quantitative peripheral nerve injury forceps | In-house | Patent number: CN20082015530.3 | |
Sprague-Dawley rats | Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd | ||
Surgical operating microscope | OPMI 1FR proergo | ZEISS |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır