Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В настоящем протоколе описана практическая стратегия для ускорения этапа верификации координат стереотаксической инъекции перед проведением отслеживания вируса с использованием красителей и замороженных срезов.

Аннотация

Стереотаксическая инъекция в определенную область мозга представляет собой фундаментальный экспериментальный метод в фундаментальной нейробиологии. Исследователи обычно основывают свой выбор параметров стереотаксической инъекции на атласах мозга мышей или опубликованных материалах, в которых использовались различные популяции/возрасты мышей и различное стереотаксическое оборудование, что требует дальнейшей проверки параметров стереотаксических координат. Эффективность визуализации кальция, хемогенетических и оптогенетических манипуляций зависит от точной экспрессии репортерных генов в исследуемой области, что часто требует нескольких недель усилий. Таким образом, это трудоемкая задача, если заранее не проверены координаты целевой области мозга. Используя соответствующий краситель вместо вируса и реализуя криосекцию, исследователи могут наблюдать за местом инъекции сразу после введения красителя. Это способствует своевременной корректировке параметров координат в тех случаях, когда существуют расхождения между фактическим местом введения и теоретическим положением. Такие корректировки значительно повышают точность экспрессии вируса в целевой области в последующих экспериментах.

Введение

Почти все современные инструменты нейромодуляции, включая запись кальция in vivo, оптогенетические и хемогенетические инструменты, требуют использования стереотаксических координат для нацеливания на область мозга, представляющую интерес 1,2,3, что составляет основу нейронных манипуляций. Стереотаксические координаты областей мозга мыши определяются по отношению к брегме и лямбде, костным ориентирам на черепе, образуя так называемую стереотаксическую систему координат, производную от черепа. Либо брегма, либо лямбда могут служить нулевой точкой трехмерных координат. ....

протокол

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами Animal Research Reporting In Vivo Experiments (ARRIVE) и Руководством Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных. Настоящее исследование было одобрено Комитетом по уходу за животными и их использованию больницы Жэньцзи Медицинской школы Шанхайского университета Цзяотун. Для настоящего исследования были использованы восьминедельные самцы мышей C57BL/6J. Животные были коммерчески получены (см. Таблицу материалов) и содержались в стандартных клетках (22 °C ± 2 °C, 12 ч/12 ч светлый/темный цикл, пища и вода ad libitum).

Результаты

В этом исследовании было успешно идентифицировано место инъекции в течение 30 мин с использованием продемонстрированного метода. Первоначально раствор для загрузки образцов SDS-PAGE, содержащий бромфенольный синий, вводили в LDTgV мышам C57/BL. На рисунке 1А показано схематичес.......

Обсуждение

В этой статье описана стабильная стратегия более быстрой и простой проверки точности стереотаксических инъекций в мозг до отслеживания вируса, но незаменимый аспект экспрессии репортерных генов в области мозга имеет решающее значение для маркировки областей мозга.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Благодарности

Национальный фонд естественных наук Китая (грант No 82101249 XY Sun), Фонд постдокторских исследований Китая (грант No 2022M722125 XY Sun). Шанхайская парусная программа (грант No 21YF1425100 для С. Х. Чена). Специальный проект по клиническим исследованиям Шанхайской муниципальной комиссии по здравоохранению (грант No 202340088 компании J Zhou). Национальный фонд естественных наук Китая (грант No 82101262 Х Чжану, грант No 82101287 С. Чэню).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1.0 µL, Neuros Syringe, Model 7001 KH, 32 G, Point Style 3Hamilton65458-01
200 μL pipette tipsbiosharpBS-200-T
20 mL syringeKindly group
3%H2O2 solutionLircon Company
6-well plateShengyou Biotech20006
AnerdianLikang High-tech31001002
Anti roll plateLeica14047742497
BD insulin syringeBecton,Dickinson and Company328421
Bend toothed dissecting forcepsJinzhongJD1050
Cellsens dimension softwareOlympus
Cotton swabFisher Scientific23-400-122
Dapi-Fluoromount-GSouthernbiotech0100-20
DrillLongxiang
Fine brushesHWAHONG
Fine scissorsJinzhongy00030
Fluorescent microscopyOlympusBX63
freezing microtomeLeicaCM1950
Hemostatic forceps straight with toothJinzhongJ31010
Infusion needle 0.7 mmKindly group
Lidocaine hydrochloride injectionHarvest Pharmaceutical Company71230803
Magnifying glassM&G Chenguang Stationery
Male C57/BL miceThe Shanghai Institute of Planned Parenthood Research–BK Laboratory
Mice coronal brain slice moldRWD Life Science68713
Microcentrifuge tubebiosharpBS-02-P
Microtome bladesLeica819
Ophthalmic ointmentCisen Pharmaceutical CompanyG23HDM9M4S5
paraformaldehydeBiosharpBL539A
Peristaltic pumpsHarvard Apparatus70-4507
Phosphate buffered salineServicebioG4202
Piette 2-200 μLthermofisher4642080
SDS-PAGE sample loading containing bromophenol blueBeyotimeP0015A
Shaving bladesBFYING91560618
SlidesCitotest Scientific188105
Stereotaxic apparatusRWD Life Science68807
Straight toothed dissecting forcepsJinzhongJD1060
Syringe HolderRWD Life Science68206
Tissue scissorsJinzhongJ21040
Tissue-Tek O.C.T compoundSakura4583
TribromoethanolAibei BiotechnologyM2910

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

209

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены