Для начала покройте мембрану собранной реконфигурируемой платформы клеточной культуры пятью микрограммами на квадратный сантиметр фибронектина в течение одного часа при комнатной температуре, чтобы улучшить прикрепление клеток. Затем с помощью пипетки p200 отсасывайте раствор для покрытия. Поместите трафарет с рисунком в ячейку основного модуля.
Добавьте ячеистую среду в лунку и нижний канал устройства. Засейте эндотелиальные клетки пупочной вены человека в лунку. Поместите прибор в чашку Петри.
Добавьте в чашку Петри коническую крышку пробирки объемом 15 миллилитров, содержащую деионизированную воду, чтобы поддерживать локальную влажность. Перенесите установку чашки Петри в инкубатор. Чтобы культивировать клетки под потоком, приступайте к перенастройке платформы из открытого луночного режима в микрофлюидный режим.
Для этого резервуары и пробирки заполняют средой для выращивания эндотелиальных клеток. Поместите нижний корпус на предметный столик. Вставьте модуль сердечника с открытой лункой в нижний корпус, затем снимите трафарет, аспирируйте ячеистую среду из лунки модуля и поместите модуль потока в лунку.
Затем поместите верхний корпус, чтобы герметизировать модуль потока в колодце основного модуля. Подсоедините впускной и выпускной дозирующие наконечники к портам модуля потока. Запустите перистальтический насос, чтобы ввести поток жидкости в систему.
Остановите насос, когда будет достигнуто желаемое время для обнажения чистого потока. Снимите впускной и выпускной дозирующие наконечники, затем снимите верхний корпус. Аккуратно извлеките модуль потока из колодца с помощью пинцета.
Наконец, добавьте 100 микролитров клеточной среды в лунку перед проведением желаемого анализа. Клетки, культивируемые под потоком, выравнивались по направлению потока, в то время как клетки, культивируемые без потока, оставались случайно ориентированными. Воздействие на клетки чистого стресса привело к повышению регуляции круппель-подобного фактора 2 и эндотелиальной синтазы оксида азота, которые играют важнейшую роль в здоровых кровеносных сосудах.
