Химическая биопсия является новым диагностическим решением в области трансплантации органов для быстрой и сложной оценки качества трансплантата. В настоящее время нет других низкоинвазивных методов, позволяющих проводить такой анализ. Основным преимуществом этой техники является возможность мониторинга модификаций трансплантационых тканей с течением времени сохранения из-за простоты и низкой инвазивности зондов SPME.
Небольшой диаметр зонда и большое разнообразие биосовместимых покрытий делают этот метод пригодным для анализа пересаженных органов и применимым в медицинских исследованиях, таких как анализ опухоли. При попытке этого метода впервые обратите внимание на детали и сроки конкретных шагов, потому что небольшие ошибки могут сильно повлиять на результаты. Протокол прост, но его легче понять и выполнить после визуальной демонстрации.
Начните с подготовки предварительной смеси, состоящей из одного к одному метанола и воды. Pipette один миллилитр раствора в каждые два миллилитров стекла флакон и место один зонд в каждом флаконе. Агитировать флаконы на вихревом агитаторе при 1200 об/мин в течение одного часа.
Затем промойте зонды водой класса LCMS и стерилизовать их в соответствии со стандартным протоколом хирургической стерилизации или в стерильном отделе обработки. Когда вы будете готовы извлечь образец, откройте стерильную упаковку и вставьте два зонда непосредственно в кору почек в течение 10 минут за точку времени, убедившись, что вся длина покрытия покрыта матрицей тканей. Убедитесь в том, чтобы отслеживать время отбора проб для каждого зонда.
Втягивайте зонд, вытаскивая его из ткани и немедленно промойте покрытие водой класса LCMS, чтобы удалить оставшуюся кровь, убедившись, что промыть от хирургического сайта. Для транспортировки зондов поместите их в отдельные флаконы и закройте их. Затем поместите флаконы в коробку, наполненную сухим льдом или жидким азотом.
Храните образцы при отрицательном 80 градусов по Цельсию или сразу же приступить к desorption. Подготовка desorption раствор состоит из ацетонитрила и воды для метаболомического анализа, а другой состоит из изопропанола и метанола для липидомного анализа. Добавьте 100 микролитров раствора для вставок в двух миллилитр с маркировкой флаконов и поместите один зонд в каждый флакон, агитирует флаконы при 1200 об/мин в течение двух часов, затем удалите зонды из флаконов и приступайте к анализу LCMS.
Для проведения нецелевидного метаболомического и липидомического анализа использовалась жидкая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения. Эти данные были подвергнуты основному анализу компонентов для оценки качества, с тем чтобы получить общее представление о результатах. Образцы контроля качества сформировали плотный кластер, подтверждающий качество анализа.
Изучаемые группы продемонстрировали относительно хорошее разделение, что позволило визуализировать различия в метаболических и липидомных профилях до и после трансплантации, а также во время перфузии органов. Широкий спектр извлеченных объектов был разделен как на обратной фазе, так и на жидких хроматографических столбцах. Изменения и уровни метаболита на протяжении всего эксперимента были продемонстрированы с помощью коробочные усы участков выбранных метаболитов.
При выполнении этой процедуры имейте в виду неоднородность органов. Поместите зонд в нужном месте держать время выборки идентичны во все моменты времени, и обеспечить волокна должным образом после отбора проб. Биомаркеры, обнаруженные с помощью SPME, можно количественно оценить с помощью этого метода извлечения в сочетании с МСМС, LCMS или другими аналитическими приборами.
Кроме того, поскольку образец не потребляется, рутинный анализ, такой как биопсия может быть выполнена. Метод может быть адаптирован для других тканей метаболомики и липидомики анализа без необходимости для предварительной обработки образца. Для конкретных метаболитов.
Другие покрытия могут быть использованы для повышения избирательности и чувствительности эссе.
