Chemische Biopsie ist eine neue diagnostische Lösung in der Organtransplantation für eine schnelle und komplexe Transplantatqualitätsbewertung. Derzeit gibt es keine anderen niedriginvasiven Methoden, die eine solche Analyse ermöglichen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Möglichkeit, Transplantatgewebemodifikationen im Laufe der Konservierung aufgrund der Einfachheit und geringen Invasivität von SPME-Sonden zu überwachen.
Der geringe Durchmesser der Sonde und eine große Vielfalt an biokompatiblen Beschichtungen machen diese Methode für die Analyse transplantierter Organe geeignet und in der medizinischen Forschung wie der Tumoranalyse anwendbar. Achten Sie beim ersten Versuch dieser Technik auf Details und Timing bestimmter Schritte, da kleine Fehler die Ergebnisse stark beeinflussen können. Das Protokoll ist einfach, aber es ist einfacher zu verstehen und nach der visuellen Demonstration durchzuführen.
Beginnen Sie mit der Zubereitung einer Vorkonditionierungsmischung, die aus einem zu eins Methanol und Wasser besteht. Einen Milliliter der Lösung in jede zwei Milliliter Glasdurchstechflasche geben und eine Sonde in jede Durchstechflasche legen. Agitieren Sie die Durchstechflaschen auf einem Wirbelrührer bei 1200 RPM für eine Stunde.
Spülen Sie dann die Sonden mit LCMS-Wasser und sterilisieren Sie sie gemäß dem Standard-Operationssterilisationsprotokoll oder in der sterilen Verarbeitungsabteilung. Wenn Sie bereit sind, die Probe zu extrahieren, öffnen Sie die sterile Verpackung und legen Sie zwei Sonden für 10 Minuten pro Zeitpunkt direkt in den Nierenkortex ein, um sicherzustellen, dass die gesamte Länge der Beschichtung von der Gewebematrix abgedeckt wird. Achten Sie darauf, die Zeit der Probenahme für jede Sonde zu verfolgen.
Ziehen Sie die Sonde zurück, indem Sie sie aus dem Gewebe herausziehen, und spülen Sie die Beschichtung sofort mit Wasser nach LCMS-Qualität ab, um das verbleibende Blut zu entfernen, um sicherzustellen, dass es von der chirurgischen Stelle wegspült. Um die Sonden zu transportieren, legen Sie sie in separate Durchstechflaschen und schließen Sie sie. Dann legen Sie die Fläschchen in eine Box mit Trockeneis oder flüssigem Stickstoff gefüllt.
Bewahren Sie die Proben bei minus 80 Grad Celsius auf oder gehen Sie sofort mit desorption fort. Bereiten Sie eine Desorptionslösung aus Acetonitril und Wasser für die metatolomische Analyse und eine weitere aus Isopropanol und Methanol für die lipidomische Analyse. Fügen Sie 100 Mikroliter der Lösung zu Deninlagen in die zwei Milliliter beschrifteten Durchstechflaschen hinzu und legen Sie eine Sonde in jede Durchstechflasche, die die Durchstechflaschen zwei Stunden lang bei 1200 RPM rührt, entfernen Sie dann die Sonden von den Durchsonsen und führen Sie die LCMS-Analyse durch.
Die Flüssigchromatographie in Verbindung mit einer hochauflösenden Massenspektrometrie wurde zur Durchführung einer ungezielten metatobiomischen und lipidomischen Analyse eingesetzt. Die Daten wurden einer Hauptkomponentenanalyse unterzogen, um die Qualität zu bewerten, die allgemeine Erkenntnisse über die Ergebnisse bietet. Die Qualitätskontrollproben bildeten einen engen Cluster, der die Qualität der Analyse bestätigte.
Die untersuchten Gruppen zeigten eine relativ gute Trennung, die eine Visualisierung von Unterschieden in metabolischen und lipidomischen Profilen vor und nach der Transplantation sowie während der Organperfusion ermöglichte. Ein breites Spektrum extrahierter Merkmale wurde sowohl auf umgekehrten Phasen- als auch auf Flüssigkeitschromatographiesäulen getrennt. Veränderungen und Metabolitenwerte während des gesamten Experiments wurden mit Box-Whisker-Plots der ausgewählten Metaboliten demonstriert.
Berücksichtigen Sie bei der Durchführung dieses Verfahrens die Heterogenität der Organe. Platzieren Sie die Sonde an der gewünschten Stelle, halten Sie die Zeit der Probenahme zu allen Zeitpunkten identisch, und sichern Sie die Faser nach der Probenahme ordnungsgemäß. Die mit SPME entdeckten Biomarker können mit dieser Extraktionsmethode, die an MSMS, LCMS oder andere analytische Instrumente gekoppelt ist, quantifiziert werden.
Da keine Probe konsumiert wird, kann außerdem eine Routineanalyse wie Biopsie durchgeführt werden. Die Methode kann für andere Gewebemetabolomik und Lipidomik-Analyse ohne Notwendigkeit für die Probenvorbehandlung angepasst werden. Für spezifische Metaboliten.
Andere Beschichtungen können verwendet werden, um die Selektivität und Empfindlichkeit des Aufsatzes zu erhöhen.
