移植質評価のための化学バイオプシーの使用

化学バイオプシーは、迅速かつ複雑な移植片の品質評価のための臓器移植における新しい診断ソリューションです。現在、このような分析を可能にする他の低侵襲的な方法はありません。この技術の主な利点は、SPMEプローブの簡便性および低侵襲性による保存の時間をかけて移植片組織の修飾を監視する可能性である。

プローブの小径と多種多様な生体適合性コーティングにより、移植臓器の分析に適しており、腫瘍解析などの医学研究に応用できます。このテクニックを初めて試すとき、小さな間違いが結果に大きく影響する可能性があるため、特定のステップの詳細とタイミングに注意を払ってください。プロトコルはシンプルですが、視覚的なデモンストレーションの後に理解し、実行する方が簡単です。

まず、1対1のメタノールと水で構成されたプレコンディショニング混合物を準備します。各2ミリリットルガラスバイアルに溶液のピペット1ミリリットル、各バイアルに1プローブを配置します。1200 RPMで1時間、渦の攪拌機でバイアルを攪拌します。

次に、LCMSグレードの水でプローブをすすいで、標準的な外科滅菌プロトコルまたは滅菌処理部門に従って滅菌します。サンプルを抽出する準備ができたら、滅菌包装を開き、2つのプローブを1つの時点あたり10分間腎臓皮質に直接挿入し、コーティングの全長が組織マトリックスで覆われていることを確認します。各プローブのサンプリング時間を必ず追跡してください。

プローブを組織から引き出して引き込み、すぐにLCMSグレードの水でコーティングを洗い流し、残りの血液を取り除き、外科現場から洗い流してください。プローブを搬送するには、別々のバイアルに入れて閉じます。その後、バイアルをドライアイスまたは液体窒素で満たされた箱に入れます。

サンプルをマイナス80°Cで保存するか、すぐに脱着を進めます。メタボロミック分析用のアセトニトリルと水からなる脱離液と、リピドミック分析用イソプロパノールとメタノールから構成される別の脱離溶液を調製します。100マイクロリットルの溶液を加えて、2ミリリットルのバイアルに挿入し、バイアルを1200 RPMで1200 RPMで2時間攪拌して各バイアルにプローブを2時間置き、バイアルからプローブを取り出し、LCMS分析を進めます。

液体クロマトグラフィーと高分解能質量分析法を組み合わせることで、非標的性メタボロミックおよびリピドミック解析を行った。データは、結果に関する一般的な洞察を楽しませる品質を評価するために、主要なコンポーネント分析を受けました。品質管理サンプルは、分析の品質を確認するタイトなクラスターを形成しました。

研究対象グループは比較的良好な分離を示し、移植前後および臓器灌流中の代謝およびリピドミックプロファイルの違いを可視化することを可能にした。抽出された特徴の広いスペクトルは、逆相と液体クロマトグラフィーカラムの両方で分離された。実験全体を通して変化と代謝産物のレベルは、選択された代謝産物の箱ひげ図で実証された。

この手順を実行する際には、臓器の不均一性を念頭に置いてください。プローブを希望の場所に配置すると、すべての時間ポイントでサンプリング時間が同じに保たれ、サンプリング後にファイバを適切に固定します。SPMEで発見されたバイオマーカーは、MSMS、LCMSまたは他の分析機器に結合されたこの抽出方法を使用して定量化することができる。

また、試料が消費されないので、生検などのルーチン分析が行える。この方法は、サンプル前処理を必要とせずに、他の組織メタボロミクスおよびリピドミクス分析に適合させることができる。特定の代謝物の場合。

他のコーティングは、エッセイの選択性と感度を高めるために使用することができます。