La biopsie chimique est une nouvelle solution diagnostique dans la transplantation d’organe pour l’évaluation rapide et complexe de qualité de greffe. À l’heure actuelle, il n’existe pas d’autres méthodes peu invasives qui permettent une telle analyse. Le principal avantage de cette technique est la possibilité de surveiller les modifications des tissus greffés au fil du temps de conservation en raison de la simplicité et de la faible invasivité des sondes SPME.
Le petit diamètre de la sonde et une grande variété de revêtements biocompatibles rendent cette méthode appropriée pour l’analyse des organes transplantés et applicable dans la recherche médicale telle que l’analyse tumorale. Lorsque vous essayez cette technique pour la première fois prêter attention aux détails et le calendrier des étapes particulières parce que de petites erreurs peuvent fortement influencer les résultats. Le protocole est simple, mais il est plus facile à comprendre et à exécuter après la démonstration visuelle.
Commencez par préparer un mélange de condition préalable composé d’un à un méthanol et d’eau. Pipette un millilitre de la solution dans chaque flacon de verre de deux millilitres et placer une sonde dans chaque flacon. Agiter les flacons sur un agitateur vortex à 1200 RPM pendant une heure.
Rincez ensuite les sondes à l’eau de qualité LCMS et stérilisez-les selon le protocole de stérilisation chirurgicale standard ou dans le département de traitement stérile. Lorsque vous êtes prêt à extraire l’échantillon, ouvrez l’emballage stérile et insérez deux sondes directement dans le cortex rénal pendant 10 minutes par point de temps, en vous assurant que toute la longueur du revêtement est couverte par la matrice tissulaire. Assurez-vous de garder une trace de l’heure de l’échantillonnage pour chaque sonde.
Rétractez la sonde en la retirant du tissu et rincez immédiatement le revêtement avec de l’eau de qualité LCMS pour enlever le sang restant en s’assurant de rincer loin du site chirurgical. Pour transporter les sondes, placez-les dans des flacons séparés et fermez-les. Placez ensuite les flacons dans une boîte remplie de glace sèche ou d’azote liquide.
Conservez les échantillons à 80 degrés Celsius négatifs ou procédez immédiatement à la désorption. Préparer une solution de désorption composée d’acétyl et d’eau pour l’analyse métabolomique et une autre composée d’isopropanol et de méthanol pour l’analyse lipidomique. Ajouter 100 microlitres de la solution aux insertions dans les flacons étiquetés de deux millilitres et placer une sonde dans chaque flacon agiter les flacons à 1200 RPM pendant deux heures, puis retirer les sondes des flacons et procéder à l’analyse LCMS.
La chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution a été employée pour effectuer l’analyse métabolomique et lipidomique non ciblé. Les données ont fait l’objet d’une analyse des principaux éléments afin d’évaluer la qualité et d’obtenir des renseignements généraux sur les résultats. Les échantillons de contrôle de la qualité formaient un cluster serré confirmant la qualité de l’analyse.
Les groupes étudiés ont montré la séparation relativement bonne, permettant la visualisation des différences dans les profils métaboliques et lipidomiques avant et après la transplantation aussi bien que pendant la perfusion d’organe. Un large spectre de dispositifs extraits a été séparé sur la phase inversée et les colonnes liquides de chromatographie. Des modifications et des niveaux de métabolite tout au long de l’expérience ont été démontrés avec des parcelles de moustaches boîte des métabolites sélectionnés.
Lors de l’exécution de cette procédure, gardez à l’esprit l’hétérogénéité des organes. Placez la sonde à l’endroit désiré gardez le temps de l’échantillonnage identique à tous les points de temps, et fixez la fibre correctement après l’échantillonnage. Les biomarqueurs découverts avec spme peuvent être quantifiés à l’aide de cette méthode d’extraction couplée à MSMS, LCMS ou d’autres instruments analytiques.
De plus, comme aucun échantillon n’est consommé, une analyse de routine comme une biopsie peut être effectuée. La méthode peut être adaptée pour d’autres analyses métabolomiques et lipidomiques de tissu sans nécessité pour le prétraitement d’échantillon. Pour des métabolites spécifiques.
D’autres revêtements peuvent être utilisés pour augmenter la sélectivité et la sensibilité de l’essai.
