A biópsia química é uma nova solução diagnóstica no transplante de órgãos para avaliação rápida e complexa da qualidade do enxerto. Atualmente, não há outros métodos invasivos baixos disponíveis que permitam tal análise. A principal vantagem dessa técnica é a possibilidade de monitorar modificações de tecidos de enxerto ao longo do tempo de preservação devido à simplicidade e baixa invasividade das sondas SPME.
O pequeno diâmetro da sonda e uma grande variedade de revestimentos biocompatíveis tornam este método adequado para análise de órgãos transplantados e aplicável em pesquisas médicas como a análise de tumores. Ao tentar esta técnica pela primeira vez preste atenção aos detalhes e ao tempo de etapas específicas, pois pequenos erros podem influenciar fortemente os resultados. O protocolo é simples, mas é mais fácil de entender e executar após demonstração visual.
Comece preparando uma mistura pré-condicionamento composta de um a um metanol e água. Pipeta um mililitro da solução em cada dois frascos de vidro mililitro e colocar uma sonda em cada frasco. Agitar os frascos em um agitador de vórtice a 1200 RPM por uma hora.
Em seguida, enxágüe as sondas com água de grau LCMS e esterilize-as de acordo com o protocolo de esterilização cirúrgica padrão ou no departamento de processamento estéril. Quando estiver pronto para extrair a amostra, abra a embalagem estéril e insira duas sondas diretamente no córtex renal por 10 minutos por ponto de tempo, certificando-se de que toda a extensão do revestimento esteja coberta pela matriz tecidual. Certifique-se de acompanhar o tempo de amostragem de cada sonda.
Retire a sonda retirando-a do tecido e enxágue imediatamente o revestimento com água de grau LCMS para remover qualquer sangue restante, certificando-se de enxaguar para longe do local cirúrgico. Para transportar as sondas, coloque-as em frascos separados e feche-os. Em seguida, coloque os frascos em uma caixa cheia de gelo seco ou nitrogênio líquido.
Armazene as amostras a 80 graus Celsius negativos ou proceda imediatamente com desordenado. Prepare uma solução de desorção composta de acetonitrila e água para análise metabolômica e outra composta de isopropanol e metanol para análise lipidômica. Adicione 100 microliters da solução para inserir nos dois frascos rotulados mililitros e coloque uma sonda em cada frasco agitar os frascos a 1200 RPM por duas horas e, em seguida, remova as sondas dos frascos e prossiga com a análise LCMS.
A cromatografia líquida aliada à espectrometria de massa de alta resolução foi utilizada para realizar análises metabolômicas e lipómicas não-diretas. Os dados foram submetidos à análise dos componentes principais para avaliar a qualidade entretendo insights gerais sobre os resultados. As amostras de controle de qualidade formaram um cluster apertado confirmando a qualidade da análise.
Os grupos estudados apresentaram separação relativamente boa, permitindo a visualização de diferenças nos perfis metabólicos e lipidómicos antes e depois do transplante, bem como durante a perfusão de órgãos. Um amplo espectro de características extraídas foi separado em colunas de fase invertida e cromatografia líquida. Alterações e níveis metabólicos ao longo do experimento foram demonstrados com parcelas de batalhões de caixa dos metabólitos selecionados.
Ao realizar este procedimento, tenha em mente a heterogeneidade dos órgãos. Coloque a sonda no local desejado mantenha o tempo de amostragem idêntico em todos os pontos de tempo e fixe a fibra corretamente após a amostragem. Os biomarcadores descobertos com SPME podem ser quantificados usando este método de extração acoplado a MSMS, LCMS ou outra instrumentação analítica.
Além disso, como nenhuma amostra é consumida, pode-se realizar análises de rotina, como biópsia. O método pode ser adaptado para outras metabolômicas teciduais e análise lipidóica sem necessidade de pré-tratamento amostral. Para metabólitos específicos.
Outros revestimentos podem ser usados para aumentar a seletividade e sensibilidade da redação.
