שימוש בביופסיה כימית להערכת איכות השתל

ביופסיה כימית היא פתרון אבחון חדש בהשתלת איברים להערכת איכות השתל מהירה ומורכבת. נכון לעכשיו, אין שיטות פולשניות נמוכות אחרות הזמינות המאפשרות ניתוח כזה. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא האפשרות של ניטור שינויים ברקמת השתל לאורך זמן של שימור בשל הפשטות ואת פולשנות נמוכה של בדיקות SPME.

הקוטר הקטן של הגשוש ומגוון גדול של ציפויים תואמי ביולוגית הופכים שיטה זו כמתאימה לניתוח איברים מושתלים וישימה במחקר רפואי כגון ניתוח גידולים. כאשר מנסים טכניקה זו בפעם הראשונה לשים לב לפרטים ותזמון של צעדים מסוימים, כי טעויות קטנות עשויות להשפיע במידה רבה על התוצאות. הפרוטוקול הוא פשוט, אבל קל יותר להבין ולבצע לאחר הדגמה חזותית.

התחל על ידי הכנת תערובת תנאי מוקדם המורכב אחד אחד מתנול ומים. פיפטה מיליליטר אחד של הפתרון לתוך כל בקבוקון זכוכית שני מיליליטר ולמקום בדיקה אחת בכל בקבוקון. להתסיס את הבקבוקונים על מסית מערבולת ב 1200 סל"ד במשך שעה אחת.

לאחר מכן לשטוף את הבדיקות עם מים כיתה LCMS ולעקר אותם על פי פרוטוקול עיקור כירורגי סטנדרטי או במחלקת עיבוד סטרילי. כאשר מוכן לחלץ את המדגם, לפתוח את האריזה סטרילית ולהכניס שתי בדיקות ישירות לתוך קליפת המוח של הכליה במשך 10 דקות בכל נקודת זמן, לוודא כי כל אורך הציפוי מכוסה על ידי מטריצת הרקמה. הקפד לעקוב אחר זמן הדגימה עבור כל בדיקה.

לסגת בדיקה על ידי משיכת אותו מן הרקמה מיד לשטוף את הציפוי עם מים כיתה LCMS כדי להסיר את כל הדם שנותר לוודא לשטוף הרחק מהאתר הכירורגי. כדי להעביר את הבדיקות, למקם אותם בקבוקונים נפרדים ולסגור אותם. לאחר מכן מניחים את הבקבוקונים בקופסה מלאה בקרח יבש או חנקן נוזלי.

לאחסן את הדגימות ב 80 מעלות צלזיוס שלילי או מיד להמשיך עם desorption. הכן פתרון desorption מורכב אצטוניטריל ומים לניתוח מטבולומי ועוד מורכב isopropanol ומתנול לניתוח ליפידומי. הוסף 100 microliters של הפתרון כדי להוסיף את שני מיליליטר שכותרתו בקבוקונים ולמקם בדיקה אחת בכל בקבוקון להתסיס את הבקבוקונים ב 1200 סל"ד במשך שעתיים ולאחר מכן להסיר את הבדיקות מן הבקבוקונים ולהמשיך עם ניתוח LCMS.

כרומטוגרפיה נוזלית יחד עם ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה שימשה לביצוע ניתוח מטבולומי וליפידמי ללא מים. הנתונים היו נתונים לניתוח רכיבים עיקריים כדי להעריך איכות לבדר תובנות כלליות לגבי התוצאות. דגימות בקרת האיכות יצרו אשכול הדוק המאשר את איכות הניתוח.

הקבוצות הנחקרות הציגו הפרדה טובה יחסית, המאפשרת הדמיה של הבדלים בפרופילים מטבוליים וליפידומיים לפני ואחרי ההשתלה, כמו גם במהלך חיסון איברים. קשת רחבה של תכונות שחולצו הופרדו הן בעמודות כרומטוגרפיה הפוכות והן בעמודות כרומטוגרפיה נוזליות. שינויים ורמות מטבוליט לאורך הניסוי הוכחו עם חלקות שפם תיבת של מטבוליטים שנבחרו.

בעת ביצוע הליך זה, יש לזכור את ההטרוגניות של האיברים. מניחים את החללית במיקום הרצוי לשמור על זמן הדגימה זהה בכל נקודות הזמן, ולאבטח את הסיב כראוי לאחר הדגימה. סמנים ביולוגיים שהתגלו עם SPME ניתן לכמת באמצעות שיטת מיצוי זו יחד עם MSMS, LCMS או מכשור אנליטי אחר.

יתר על כן, מאז אין מדגם נצרך, ניתוח שגרתי כגון ביופסיה יכול להתבצע. השיטה יכולה להיות מותאמת עבור מטבולומיקת רקמות אחרות וניתוח ליפידומיה ללא צורך טיפול מקדים מדגם. עבור מטבוליטים ספציפיים.

ציפויים אחרים יכולים לשמש להגברת הבחירה והרגישות של המאמר.