Kimyasal biyopsi, organ naklinde hızlı ve karmaşık greft kalite değerlendirmesi için yeni bir tanısal çözümdür. Şu anda, bu tür bir analiz sağlayan başka düşük invaziv yöntemler mevcut değildir. Bu tekniğin en büyük avantajı, SPME problarının basitliği ve düşük invazivliği nedeniyle greft doku modifikasyonlarının koruma süresi içinde izlenme olasılığıdır.
Probun küçük çapı ve çok çeşitli biyouyumlu kaplamalar bu yöntemi nakledilen organların analizi için uygun hale getirir ve tümör analizi gibi tıbbi araştırmalarda uygulanabilir hale getirir. Küçük hatalar sonuçları büyük ölçüde etkileyebilir, çünkü ilk kez bu tekniği çalışırken ayrıntıları ve belirli adımların zamanlaması dikkat edin. Protokol basittir, ancak görsel gösteriden sonra anlamak ve gerçekleştirmek daha kolaydır.
Bire bir metanol ve su oluşan bir önkoşullama karışımı hazırlayarak başlayın. Pipet her iki mililitre cam şişe içine çözelti bir mililitre ve her şişe bir prob yerleştirin. 1200 RPM'de bir girdap ajitatöründeki şişeleri bir saat boyunca çalkala.
Daha sonra probları LCMS sınıfı su ile durulayın ve standart cerrahi sterilizasyon protokolüne veya steril işleme bölümüne göre sterilize edin. Numuneyi almaya hazır olduğunuzda, steril ambalajı açın ve iki prob'u doğrudan böbrek korteksine 10 dakika boyunca takın, kaplamanın tüm uzunluğunun doku matrisi tarafından karşılandıklarından emin olun. Her sonda için örnekleme süresini takip etmeyi unutmayın.
Sondayı dokudan çekerek geri çekin ve kalan kanı çıkarmak için kaplamayı hemen LCMS sınıfı suyla durulayın ve cerrahi bölgeden durulayın. Sondaları taşımak için, ayrı şişelere yerleştirin ve kapatın. Sonra kuru buz veya sıvı nitrojen dolu bir kutu içinde şişeleri yerleştirin.
Numuneleri negatif 80 santigrat derecede saklayın veya hemen desorpsiyona devam edin. Metabolomik analiz için asetonitrril ve sudan oluşan bir desorpsiyon çözeltisi ve lipidomik analiz için isopropanol ve metanolden oluşan bir desorpsiyon çözeltisi hazırlayın. İki mililitre etiketli şişelere çözelti eklemek için çözeltinin 100 mikrolitresini ekleyin ve her şişeye bir prob yerleştirin 1200 RPM'de şişeleri iki saat boyunca çalkalayın ve probları şişelerden çıkarın ve LCMS analizine devam edin.
Hedeflenmemiş metabolomik ve lipidomik analizler için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi ile birleşen sıvı kromatografi kullanıldı. Veriler, kaliteyi değerlendirmek için sonuçlarla ilgili genel öngörüleri değerlendirmek için temel bileşen analizine tabi tutulmuştu. Kalite kontrol örnekleri analizkalitesini doğrulayan sıkı bir küme oluşturdu.
İncelenen gruplar, transplantasyon öncesi ve sonrası ve organ perfüzyonu sırasında metabolik ve lipidomik profilfarklılıklarının görüntülenmesi için nispeten iyi bir ayrım sergilediler. Hem ters faz hem de sıvı kromatografi sütunlarında geniş bir özlenmiş özellik spektrumu ayrılmıştır. Deney boyunca değişiklikler ve metabolit düzeyleri seçilen metabolitlerin kutu bıyık çizimleriyle gösterilmiştir.
Bu işlemi gerçekleştirirken, organların heterojenliğini aklınızda bulundurun. Prob'u istenilen konuma yerleştirin örnekleme süresini her zaman aynı tutun ve örneklemeden sonra fiberi düzgün bir şekilde sabitleyin. SPME ile keşfedilen biyobelirteçler, MSMS, LCMS veya diğer analitik enstrümantasyonla birleşen bu ekstraksiyon yöntemi kullanılarak ölçülebilir.
Ayrıca numune tüketilmediğinden biyopsi gibi rutin analizler de yapılabilmektedir. Bu yöntem, numune ön tedavisi için gerek kalmadan diğer doku metabolomikleri ve lipidomik analizleri için uyarlanabilir. Belirli metabolitler için.
Diğer kaplamalar kompozisyon seçicilik ve duyarlılığı artırmak için kullanılabilir.
