이식 품질 평가를 위해 화학 생검 사용

화학 생검은 빠르고 복잡한 이식 품질 평가를 위한 장기 이식에 있는 새로운 진단 해결책입니다. 현재 이러한 분석을 가능하게 하는 다른 낮은 침습적 방법은 없습니다. 이 기술의 주요 장점은 SPME 프로브의 단순성과 낮은 침습성으로 인해 보존 시간이 지남에 따라 접목 조직 수정을 모니터링 할 수있는 가능성입니다.

프로브의 작은 직경과 생체 적합성 코팅의 큰 다양성은 이식 된 장기의 분석에 적합하고 종양 분석과 같은 의학 연구에 적용 할 수 있습니다. 이 기술을 처음 시도할 때는 작은 실수가 결과에 큰 영향을 미칠 수 있기 때문에 특정 단계의 세부 사항 및 타이밍에 주의를 기울입니다. 프로토콜은 간단하지만 시각적 데모 후 이해하고 수행하는 것이 더 쉽습니다.

먼저 1대 1메탄ol과 물로 구성된 사전 조절 혼합물을 준비한다. 파이펫 1 밀리리터의 용액은 각 2밀리리터 유리 바이알에 넣고 각 바이알에 하나의 프로브를 배치합니다. 1시간 동안 1200 RPM에서 소용돌이 교반기에서 바이알을 교양합니다.

그런 다음 LCMS 급수로 프로브를 헹구고 표준 수술 살균 프로토콜 또는 멸균 처리 부서에 따라 프로브를 살균하십시오. 시료를 추출할 준비가 되면 멸균 포장을 열고 2개의 프로브를 신장 피질에 직접 삽입하여 시간당 10분 동안 코팅의 전체 길이가 조직 매트릭스에 의해 덮여 있는지 확인합니다. 각 프로브의 샘플링 시간을 추적해야 합니다.

조직에서 프로브를 철회하고 즉시 LCMS 등급의 물로 코팅을 헹구어 수술 부위에서 헹구는 나머지 혈액을 제거합니다. 프로브를 운반하려면 별도의 바이알에 배치하여 닫습니다. 그런 다음 바이알을 드라이 아이스 또는 액체 질소로 채워진 상자에 놓습니다.

샘플을 음의 섭씨 80도에 저장하거나 즉시 탈착을 진행합니다. 메타볼로믹 분석을 위해 아세토닐과 물로 구성된 탈착액을 준비하고, 리피도믹 분석을 위해 이소프로판올과 메탄올로 구성된 또 다른 용액을 준비한다. 100마이크로리터를 추가하여 두 밀리리터표시 바이알에 삽입하고 각 바이알에 1개의 프로브를 1200 RPM에서 2시간 동안 교반한 다음 바이알에서 프로브를 제거하고 LCMS 분석을 진행합니다.

고해상도 질량 분석과 결합된 액체 크로마토그래피는 표적화된 메타볼로믹 및 리피도믹 분석을 수행하는 데 사용되었습니다. 데이터는 결과에 관한 일반적인 통찰력을 즐겁게 하는 품질을 평가하기 위해 주 성분 분석을 실시하였다. 품질 관리 샘플은 분석의 품질을 확인하는 단단한 클러스터를 형성했습니다.

연구된 단은 상대적으로 좋은 분리를 전시했습니다, 이식 전후뿐만 아니라 기관 관류 도중 신진 대사와 지방피도믹 단면도에 있는 다름의 시각화를 허용했습니다. 추출된 피처의 넓은 스펙트럼은 반전된 위상 및 액체 크로마토그래피 컬럼 모두에서 분리되었다. 실험 전반에 걸친 변경 및 대사산물 수준은 선택된 대사산물의 상자 수염 플롯으로 입증되었다.

이 절차를 수행 할 때, 장기 이질성을 명심하십시오. 프로브를 원하는 위치에 배치하여 샘플링 시간을 항상 동일하게 유지하고 샘플링 후 섬유를 올바르게 고정합니다. SPME로 발견된 바이오마커는 MSMS, LCMS 또는 기타 분석 계측과 결합된 이 추출 방법을 사용하여 정량화될 수 있다.

더욱이, 아무 견본도 소모되지 않습니다, 생검과 같은 일상적인 분석은 수행될 수 있습니다. 이 방법은 샘플 전처리를 위한 필요 없이 그밖 조직 metabolomics 및 lipidomics 분석을 위해 적응될 수 있습니다. 특정 대사 산물의 경우.

다른 코팅은 에세이의 선택성과 감도를 높이기 위해 사용될 수 있습니다.