Описанный протокол минимизирует стресс во время абляции глазных стекол грязевых крабов, тем самым снижая смертность из-за абляции глазных стекол. Экономия времени является ключом к минимизации стресса для животных. Перед выполнением процедуры убедитесь, что все подготовлено.
Начните с мытья здоровых, активных и преждевременных самок грязевых крабов хлорированной водопроводной водой, чтобы удалить мусор и паразитов. Замочите крабов в формальдегиде на 30 минут. Обеспечьте непрерывную и щадящую аэрацию воздушными камнями во время обработки формальдегидом.
Затем используйте проточную морскую воду, чтобы промыть крабов, чтобы удалить остатки формальдегида. Чтобы выполнить прижигание крабового глазного стебля, начните с нагревания кончика металлического стержня паяльной лампой до тех пор, пока стержень не станет ярко-красным. Накройте обезболивающего краба влажным хлопчатобумажным полотенцем и зажмите один глазок краба стерилизованными щипцами.
Прижмите раскаленный металлический наконечник к глазу краба примерно на 10-15 секунд, пока стебель не приобретет оранжевый или красновато-оранжевый цвет. Продезинфицируйте щипцы 70% этанолом и очистите их стерильной папиросной бумагой, чтобы избежать перекрестного загрязнения между крабами. После проведения абляции на всех крабах опустите металлический стержень в водопроводную воду.
Для проведения хирургической абляции держите обезболивающего краба в плотных хлопчатобумажных перчатках и накройте его влажным хлопчатобумажным полотенцем. Используйте стерильные щипцы, чтобы удерживать один глаз краба, и быстро разрежьте глазной стебель хирургическими ножницами. После операции подготовьте верхний резервуар с фильтрованной морской водой на 20 частей на тысячу с непрерывной аэрацией.
Соедините гибкую трубу с баком для гравитационного потока воды. Поместите краба в корзину и подвергните его проточной морской воде из верхнего резервуара. Следите за крабом под проточной морской водой, пока он не сможет двигаться самопроизвольно.
Поместите крабов по отдельности в другой аквариум с морской водой на 30 минут для дальнейшего наблюдения. Случайным образом отбирают только что половозрелых самок, которые не подвергались абляции глазного стебля. После удаления верхнего панциря и гепатопанкреаса понаблюдайте и определите стадию созревания яичника краба.
Стадии созревания яичников могут быть идентифицированы на основе их окраски: первая стадия незрелости - полупрозрачная или кремово-белая, вторая стадия раннего созревания - от бледно-желтого до светло-желтого цвета, третья стадия созревания - от желтого до светло-оранжевого, а четвертая стадия полного созревания - от темно-оранжевого до красноватого цвета. Скорость созревания гонад была выше у самок с удаленным глазным стеблем по сравнению с теми, которые не были удалены. Самый высокий процент яичников третьей стадии был обнаружен у самок крабов с удаленным глазным стеблем.
Односторонний дисперсионный анализ показал значительные различия между стадиями созревания яичников экспериментальных самок крабов. Контрольная группа имела более высокую распространенность неполовозрелых самок крабов по сравнению с группами, подвергшимися абляции. Только группы, подвергшиеся абляции, смогли произвести самок крабов четвертой стадии из незрелой стадии через 30 дней после обработки.
Важно убедиться, что глазной стебель грязевого краба был полностью удален после прижигания или хирургического вмешательства. Абляция глазного стебля позволяет фермерам, выращивающим ракообразных, легко вызывать созревание яичников и линьку. Это также позволяет исследователям глубже исследовать роль глазного стебля в регулировании размножения грязевых крабов.
