Il protocollo descritto riduce al minimo lo stress durante l'ablazione del gambo oculare dei granchi del fango, riducendo così l'insorgenza di mortalità dovuta all'ablazione del peduncolo oculare. L'efficienza temporale è la chiave per ridurre al minimo lo stress per gli animali. Assicurati che tutto sia pronto prima di eseguire la procedura.
Inizia lavando i granchi del fango femmina sani, attivi e prematuri con acqua di rubinetto clorata per rimuovere eventuali detriti e parassiti. Immergere i granchi nella formaldeide per 30 minuti. Garantire un'aerazione continua e delicata con pietre d'aria durante il trattamento con formaldeide.
Quindi, utilizzare acqua di mare corrente per lavare i granchi per rimuovere qualsiasi residuo di formaldeide. Per eseguire la cauterizzazione del gambo dell'occhio del granchio, iniziare riscaldando la punta di un'asta di metallo con una fiamma ossidrica fino a quando l'asta è rosso vivo. Coprire un granchio anestetizzato con un asciugamano di cotone bagnato e tenere un occhio del granchio con una pinza sterilizzata.
Premere la punta di metallo rovente sull'occhio del granchio per circa 10-15 secondi fino a quando il gambo oculare diventa di colore arancione o arancione rossastro. Disinfettare le pinze con etanolo al 70% e pulirle con carta velina sterile per garantire che non vi siano contaminazioni incrociate tra i granchi. Dopo aver eseguito l'ablazione su tutti i granchi, immergere l'asta di metallo nell'acqua del rubinetto.
Per eseguire l'ablazione chirurgica, tenere il granchio anestetizzato usando spessi guanti di cotone e coprirlo con un asciugamano di cotone bagnato. Usa una pinza sterile per tenere un occhio del granchio e taglia rapidamente il gambo oculare con le forbici chirurgiche. Dopo l'intervento chirurgico, preparare un serbatoio sopraelevato con 20 parti per mille acqua di mare filtrata con aerazione continua.
Collegare un tubo flessibile con il serbatoio per il flusso di acqua gravitazionale. Metti il granchio in un cesto e sottoponilo all'acqua di mare corrente dal serbatoio sopraelevato. Monitorare il granchio sotto l'acqua di mare che scorre fino a quando non può muoversi spontaneamente.
Metti i granchi individualmente in un altro acquario con acqua di mare per 30 minuti per ulteriori osservazioni. Seleziona casualmente le femmine appena mature che non hanno subito l'ablazione del peduncolo oculare. Dopo aver rimosso il carapace superiore e l'epatopancreas, osservare e identificare la fase di maturazione dell'ovaio di granchio.
Le fasi di maturazione ovarica possono essere identificate in base alla loro colorazione, con la fase immatura uno traslucida o bianco crema, la fase due di maturazione precoce da pallida a giallo chiaro, la fase tre pre-maturazione da giallo a arancione chiaro e la fase quattro completamente matura da arancione scuro a rossastro. Il tasso di maturazione delle gonadi era più alto nelle femmine ablate con gli occhi rispetto a quelle che non erano ablate. La più alta percentuale di ovaie al terzo stadio è stata trovata nei granchi femmina ablati negli occhi.
L'analisi unidirezionale della varianza ha mostrato differenze significative tra le fasi sperimentali di maturazione ovarica dei granchi femmina. Il gruppo di controllo aveva una maggiore prevalenza di granchi femmina immaturi rispetto ai gruppi ablati. Solo i gruppi ablati sono stati in grado di produrre granchi femmina di stadio quattro da uno stadio immaturo 30 giorni dopo il trattamento.
È importante assicurarsi che il gambo oculare della granceola del fango sia stato completamente ablato dopo la cauterizzazione o la tecnica chirurgica. L'ablazione del gambo oculare consente agli allevatori di crostacei di indurre facilmente la maturazione ovarica e la muta. Consente inoltre ai ricercatori di studiare ulteriormente il ruolo del gambo oculare nella regolazione della riproduzione del granchio del fango.
