Клеточный скрининг лекарственных препаратов на наличие ингибиторов аутофагии, связанной с 4B цистеин-пептидазой

Основная цель исследований в моей лаборатории состоит в том, чтобы понять регуляцию аутофагии и, в частности, цистеинового протея ATG4 и использовать эти знания для разработки низкомолекулярных ингибиторов, которые нацелены на этот путь, в частности, при таких заболеваниях, как рак поджелудочной железы. Мы используем высокопроизводительные технологии скрининга для определения мишеней для лекарств, а также кандидатов в лекарственные препараты, и мы фокусируемся на семействе цистеиновых протеаз ATG4, потому что считаем, что это очень хорошая лекарственная мишень для различных форм рака. Мы уже давно изучаем представителей семейства ATG4.

Мы сделали важные открытия в области дисфункции этого семейства белков и клеток. Мы также идентифицировали новые посттрансляционные механизмы регуляции членов семейства ATG4 и в настоящее время разрабатываем низкомолекулярные ингибиторы, а также активаторы семейств ATG4 для таких заболеваний, как рак и нейродегенерация. Существует не так много тестов для мониторинга активности протеазы ATG4 в клетках.

Таким образом, мы были одними из первых, кто разработал анализ на основе люциферазы для мониторинга этой активности. И наш анализ довольно необычен, потому что он использует секретируемые, скажем так, клетки, поэтому нам не нужно лицензировать клетки, и мы можем легко адаптировать этот протокол к высокопроизводительным методам скрининга и автоматизации лаборатории. Мы уже довольно давно сосредоточились на протеазе белка ATG4 B.

Мы сгенерировали нокаутные клеточные линии членов семейства ATG4. Мы идентифицировали новые механизмы посттрансляционной регуляции ATG4, и, в конечном счете, мы также идентифицировали несколько новых низкомолекулярных соединений, которые могут ингибировать и даже активировать протеазу ATG4 B. В будущем мы хотели бы продолжить работу над членами семейства ATG4.

Мы думаем, что это довольно многое, что в настоящее время неизвестно и еще предстоит раскрыть. Например, то, как эти белки регулируют аутофагию в нейронах, в настоящее время совершенно не изучено. Мы также хотели бы сосредоточить нашу работу на валидации этих низкомолекулярных соединений, которые мы идентифицировали, и, возможно, использовать активаторы при нейродегенеративных заболеваниях.