Мониторинг циркадных колебаний с помощью биолюминесцентного репортера в органоидах

В настоящее время наша сфера исследований заключается в изучении роли циркадных ритмов в пролиферации и дифференцировке эпителиальных клеток кишечника. Мы пытаемся определить, регулируют ли циркадные часы пролиферацию и дифференцировку клеток из кишечных стволовых клеток. Этот протокол представляет собой метод мониторинга циркадных исследований трехмерных органоидов в режиме реального времени с использованием биолюминесцентного анализа.

В отличие от проведения биолюминесцентных анализов в обычной двумерной клеточной культуре, этот подход позволяет нам исследовать циркадные ритмы и их функции в более физиологически релевантной органоидной модели. Наши результаты показывают нарушение циркадных ритмов в условиях, обогащенных стволовыми клетками, в то же время демонстрируя устойчивые циркадные колебания в дифференцированных кишечных органоидах человека, что предполагает ремоделирование механизма циркадных часов от стволовых клеток к дифференцированным клеткам. Использование полученных от пациента органоидов с циркадными биолюминесцентными репортерами поможет нам улучшить наше понимание циркадных ритмов в периферических органах и различных болезненных состояниях.