Monitoramento de oscilações circadianas com um repórter de bioluminescência em organoides

Nosso escopo atual de pesquisa é investigar os papéis dos ritmos circadianos na proliferação e diferenciação de células epiteliais intestinais. Estamos tentando determinar se o relógio circadiano regula a proliferação celular e a diferenciação das células-tronco intestinais. Este protocolo apresenta um método de monitoramento em tempo real para estudos circadianos em organoides tridimensionais usando um ensaio de bioluminescência.

Ao contrário da realização de ensaios de bioluminescência em uma cultura de células bidimensional convencional, essa abordagem nos permite investigar os ritmos circadianos e suas funções em um modelo organoide fisiologicamente mais relevante. Nossos resultados mostram ritmos circadianos interrompidos em condições enriquecidas com células-tronco, ao mesmo tempo em que demonstram oscilações circadianas robustas em organoides intestinais humanos diferenciados, sugerindo uma remodelação da maquinaria do relógio circadiano de células-tronco para células diferenciadas. O uso de organoides derivados de pacientes com repórteres bioluminescentes circadianos nos ajudará a avançar nossa compreensão dos ritmos circadianos em órgãos periféricos e diferentes estados de doença.