Monitorización de las oscilaciones circadianas con un indicador de bioluminiscencia en organoides

Nuestro ámbito de investigación actual es investigar el papel de los ritmos circadianos en la proliferación y diferenciación de las células epiteliales intestinales. Estamos tratando de determinar si el reloj circadiano regula la proliferación y diferenciación celular de las células madre intestinales. Este protocolo presenta un método de monitorización en tiempo real para estudios circadianos en organoides tridimensionales utilizando un ensayo de bioluminiscencia.

A diferencia de la realización de ensayos de bioluminiscencia en un cultivo celular bidimensional convencional, este enfoque nos permite investigar los ritmos circadianos y sus funciones en un modelo de organoide más relevante fisiológicamente. Nuestros hallazgos muestran ritmos circadianos alterados en condiciones enriquecidas con células madre, al tiempo que demuestran oscilaciones circadianas robustas en organoides intestinales humanos diferenciados, lo que sugiere una remodelación de la maquinaria del reloj circadiano de células madre a células diferenciadas. Los usos de organoides derivados de pacientes con reporteros bioluminiscentes circadianos nos ayudarán a avanzar en nuestra comprensión de los ritmos circadianos en órganos periféricos y diferentes estados de enfermedad.