Standardisering av en ny halvautomatisk programvare for måling av nøyrittutvekst

Effektive live-imaging-teknikker er avgjørende for å vurdere nevronal morfologi for å måle nevrittutvekst i sanntid. Riktig måling av nevrittutvekst har vært en langvarig utfordring gjennom årene innen nevrovitenskapelig forskningsfelt. Denne parameteren fungerer som en hjørnestein i en rekke in vitro eksperimentelle oppsett, alt fra dissosierte kulturer og organotypiske kulturer til cellelinjer. Ved å kvantifisere nevrittlengden er det mulig å avgjøre om en spesifikk behandling fungerte eller om aksonal regenerering er forbedret i forskjellige eksperimentelle grupper. I denne studien er målet å demonstrere robustheten og nøyaktigheten til Incucyte Neurotrack nevrittutvekstanalyseprogramvare. Denne halvautomatiske programvaren er tilgjengelig i et time-lapse-mikroskopisystem som gir flere fordeler i forhold til ofte brukte metoder i kvantifiseringen av nevrittlengden i fasekontrastbilder. Algoritmen maskerer og kvantifiserer flere parametere i hvert bilde og returnerer nevronale celleberegninger, inkludert nevrittlengde, grenpunkter, celle-kroppsklynger og celle-kroppsklyngeområder. For det første validerte vi robustheten og nøyaktigheten til programvaren ved å korrelere verdiene med verdiene til den manuelle NeuronJ, en Fiji-plugin. For det andre brukte vi algoritmen som er i stand til å fungere både på fasekontrastbilder så vel som på immuncytokjemibilder. Ved å bruke spesifikke nevronale markører validerte vi gjennomførbarheten av den fluorescensbaserte nevrittutvekstanalysen på sensoriske nevroner in vitro-kulturer . I tillegg kan denne programvaren måle nevrittlengde på tvers av ulike såforhold, alt fra individuelle celler til komplekse nevronale nett. Avslutningsvis gir programvaren en innovativ og tidseffektiv plattform for nevrittutvekstanalyser, og baner vei for raskere og mer pålitelige kvantifiseringer.