JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokolde, aynı fare embriyosundan fetal beyin dokusunun yanı sıra yüksek kaliteli, hemolize edilmemiş serumun aynı anda toplanması için bir yöntem tarif ediyoruz. Bu tekniği, maternal diyet maruziyetinin Nf1 (Nörofibromatozis Tip 1) için heterozigot farelerde makro besin profillerini ve fetal nörogelişimi nasıl etkilediğini sorgulamak için kullandık.

Özet

Anne diyetinin neden olduğu obezitenin yavrularda nörogelişimi değiştirdiği ve bunun da bilişsel kapasitenin azalmasına, hiperaktiviteye ve sosyal davranışta bozulmalara yol açabileceği gösterilmiştir. Klinik olarak heterojen genetik bozukluk Nörofibromatozis Tip 1 (NF1) olan hastalar benzer eksikliklerle ortaya çıkabilir, ancak şu anda maternal diyet gibi çevresel faktörlerin bu fenotiplerin gelişimini etkileyip etkilemediği ve eğer öyleyse, böyle bir etkinin ortaya çıkacağı mekanizma. Maternal obezojenik diyet maruziyetinin NF1'deki nörogelişimle ilgili sistemik faktörleri nasıl etkilediğinin değerlendirilmesini sağlamak için, yüksek yağlı, yüksek sükroz diyetine karşı kontrol diyeti ile beslenen murin barajlarının fetal yavrularından hemolize edilmemiş serum ve tam veya bölgesel olarak mikro diseke beyinleri aynı anda toplamak için bir yöntem geliştirdik. Beyinler, sonraki RNA veya protein izolasyonu için kullanılmak üzere kriyoseksiyon veya flaş dondurma için işlendi; Toplanan dokunun kalitesi immün boyama ile doğrulandı. Serumun kalitesi, makro besin profilleri analiz edilerek doğrulandı. Bu tekniği kullanarak, maternal obesojenik diyetin WT ve Nf1-heterozigot yavrular arasında fetal serum kolesterolünü benzer şekilde artırdığını belirledik.

Giriş

Nörofibromatozis Tip 1 (NF1), RAS / MAPK (RAt Sarkom virüsü / Mitojenle aktive Edilen Protein Kinaz) sinyal yolunun aktivasyonu ile sonuçlanan germ hattı genetik mutasyonları ile karakterize bir grup bozukluk olan bir RASopati olarak kabul edilir. NF1 RASopatisi olan hastalar, merkezi (optik yolgliomu 1,2, yüksek dereceli glioma 3,4) ve periferik (pleksiform nörofibrom 5,6, malign periferik sinir kılıfı tümörü 7,8) sinir sisteminin hem iyi huylu hem de kötü huylu tümörlerinin yanı sıra kemik displazileri9 ve cilt pigment anormallikleri10 dahil olmak üzere birçok farklı belirti geliştirme riski altındadır (aksiller çiller, café-au-lait makülleri). Bu bozukluğun biliş ve nörogelişim üzerindeki etkisi, NF1 hastalarının öğrenme eksikliği, hiperaktivite ve otizm spektrum bozukluğu insidansında artış göstermesiyle giderek daha fazla tanınmaktadır 11,12,13. Bununla birlikte, 13,14,15,16,17 hastaları arasında bu fenotiplerin gelişiminde önemli bir heterojenlik vardır ve bazı hastaların neden önemli bilişsel bozukluklar gösterirken diğerlerinin etkilenmediği açık değildir. Maternal diyete bağlı obezitenin genel popülasyonda öğrenme ve davranışı benzer şekilde etkilediği gösterilmiştir 18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28, NF1'deki farklı maternal diyet maruziyetlerinin bu klinik heterojenliğin bir kaynağı olabileceğini düşündürmektedir. Özellikle, obez annelerin çocukları hiperaktivite geliştirme riski 18,19,20,23,25,26, otizm 19,24,27, yürütücü işlev eksiklikleri21,23 ve daha düşük tam ölçekli IQ puanlarına sahiptir 22,28. Bununla birlikte, NF1'li hastalar, obezite ve diyabet insidansının azalması da dahil olmak üzere genel popülasyona kıyasla metabolik fenotipleri değiştirmiştir 29,30,31 ve bu da diyet uyaranlarına benzer şekilde yanıt verip vermeyeceklerini belirsiz hale getirmektedir.

Bu soruları ele almak için, Nf1 ile fetal yavrularda makro besin profilinde obezojenik diyetin neden olduğu değişikliklerin nörogelişimsel değişikliklere katkıda bulunup bulunmadığını belirlemek istedik. Daha önce fetal beyinden nörogelişimsel uygulamalara uygun yüksek kaliteli tam ve bölgesel olarak mikro diseke doku topladık32. Bununla birlikte, küçük vücut boyutu ve düşük kan hacmi nedeniyle fetal kan alımı zordur33. Dekapitasyondan sonra yerçekimi destekli drenaj yoluyla kan toplanması, numunelerimizde düşük toplama hacimlerine ve önemli hemolize yol açtı, bu da aşağı akış uygulama yorumlamasını etkileyebilir. Daha önce bildirildiği gibi fetal kalp veya torasik damarlardan aspirasyon yoluyla toplama33 teknik olarak zordu ve ayrıca sık hemoliz ile sonuçlanıyordu. Bu nedenle, önemli kesme gerilimi olmadan daha yüksek hacimli toplamaya izin vermek için özel kılcal tüpler kullanan fetal serum toplama yöntemi geliştirdik.

Burada, uteroda kontrol diyetine karşı yüksek yağlı, yüksek şekerli bir diyete maruz kalan Nf1-heterozigot yavrulardan embriyonik beyinleri ve fetal serumu aynı anda toplamak için bu yöntemi sunuyoruz (Şekil 1 ve Ek Tablo S1). Beyinler, immünofloresan ile daha sonraki analizler için kriyo-gömülü veya bölgesel olarak mikro disseke edildi ve moleküler biyoloji uygulamalarında daha sonra kullanılmak üzere flaş donduruldu. Makro besin profili oluşturma gibi aşağı akış uygulamaları için uygun yüksek kaliteli serum elde edildi. Bu yöntemi kullanarak, maternal yüksek yağlı, yüksek sükroz diyet maruziyetinin hem WT hem de Nf1-heterozigot yavrularda serum kolesterol seviyelerinin yükselmesine yol açtığını belirledik.

Protokol

Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri NIH yönergelerini takip etti ve St. Louis'deki Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı. Hayvanlar standart 12 saat ışıkla barındırıldı: karanlık bisiklet ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim.

1. Anne diyeti

  1. Dişi fareleri 4 haftalıkken kontrol yemeğine (CD) veya obezojenik diyete (Ob) yerleştirin.
  2. 8-12 haftalıkken, doğru toplama yaşını belirlemek için sabahın erken saatlerinde barajın mukus tıkacını izleyerek zamanlanmış çiftleşmeyi ayarlayın. Diyete bağlı obeziteyi doğrulamak için, çiftleşme sırasında dişileri tartın.
    NOT: Obezojenik diyetle beslenen dişilerin muadillerine kıyasla fazla kilolu olmalarını sağlamak için ilk çiftleşme kurulumu için 8-12 haftalık bir aralık kullanıldı, bu her zaman 8 haftalıkken ortaya çıkmadı. Fişin günü embriyonik gün 1 (E1) olarak kabul edilir ve bu çalışmada kullanılan tüm hayvanlar E19'da toplanmıştır. Geç fetal zaman noktası, obezojenik diyete maruz kalan hayvanlarda daha önce bu zamanda gözlenen nörogelişimsel değişiklikler nedeniyle seçildi (veriler gösterilmemiştir).

2. Barajdan fetüsün çıkarılması

  1. İlk olarak, barajın ciddi göründüğünden emin olun (karın şekli ve dolgunluğu, karın palpasyonu veya fetal hareket). Şüpheniz varsa, kilo alımını ölçmek için dişiyi tekrar tartın.
    NOT: Geç dönem hamile fareler en az 3-4 g kilo alımı göstermelidir. İstenilen zaman diliminde gebe kalma olasılığını artırmak için, bir erkeğin kafesinden kirli (idrar ve feromon içeren) talaş, kızgınlığı indüklemek için çiftleşmeden 3 gün önce her gün dişinin kafesine eklenebilir34.
  2. Barajı 3 mL izofluran içeren bir kağıt havluyla bir odaya yerleştirerek ötenazi yapın, baraj ile anestezik ile ıslatılmış kağıt havlu arasında doğrudan temastan kaçınmaya dikkat edin. Hayvan sakinleştirildikten sonra, bir kağıt havlu üzerine koyun, kuyruğundan tutun, boynuna diseksiyon makası yerleştirin ve ardından servikal çıkık yapmak için makası başa doğru yukarı doğru zorlayın. Alternatif olarak, izofluran sedasyonundan sonra dekapitasyon yapın.
    NOT: Bu adımda, aşağıda tarif edilene benzer bir metodoloji kullanılarak, ancak daha büyük kılcal tüplerle barajdan serum toplanabilir. Bu isteniyorsa rahim ağzı çıkığı yerine dekapitasyon yapılmalıdır. Ötanaziden hemen önce izofluran uygulamasıyla ilgilenilen fenotipin değişmemesini sağlamak için özen gösterilmelidir.
  3. Barajın ventral tarafı yukarı bakacak şekilde 100 mm'lik bir tabağa yerleştirin. Karın bölgesini kaplayan cildi sıkıştırın ve diseksiyon makası ile orta hat kesisi yapın. Embriyoları içeren uterusu ortaya çıkarmak için cilt flepleri oluşturmak için orta hat insizyonuna dik ek kesiler yapın.
  4. Uterusu karın boşluğundan dışarı çekin. Makas kullanarak uterusu barajdan ayırın. Embriyoları içeren sağlam embriyonik kesesi ("bir ipteki inciler") soğuk steril 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içeren bir kaba yerleştirin. Fetüs tabağını buzun üzerine yerleştirin.
    NOT: Her çöp tipik olarak hem beyin hem de serum için hasat edilecek 6-10 yavru içerdiğinden, doku bozulmasını önlemek için fetüsler buz üzerinde tutulur. Yavruları buzun üzerine yerleştirmek ayrıca yavruların yeterli ötenazisini sağlar, çünkü tek başına anne ötenazisi her zaman yeterli olmayabilir. Sadece serum toplanması isteniyorsa oda sıcaklığında toplama tercih edilebilir.

3. Fetal serum toplanması

  1. # 5 forseps ile dikkatlice diseksiyon yaparak fetüsü embriyonik keseden çıkarın. Embriyoyu taze soğuk steril 1x PBS ile kavisli forseps kullanarak bir tabağa aktarın.
  2. Numuneden kalan amniyotik sıvıyı ve PBS'yi çıkarmak için hayvanı bir kağıt havlu üzerinde nazikçe kurulayın.
  3. Hayvanı karnından tutun. Ventral boynunda bir kesi yaparak hayvanın mikro makasla kısmen kafasını kesin. Kan damarlarının kesildiğinden emin olun, ancak başı tutan deri hala yapışıktır.
    NOT: Kanın vücuttan ve kafadan aynı anda alınabilmesi için kafa takılı kalmalıdır.
  4. Kesi aşağı bakacak şekilde vücudu 45°'lik bir açıyla tutun. 50 μL'lik miniveti (kılcal boru), kanın bir damlacık oluşturduğu barajın kesi bölgesine paralel tutun. 50 μL'lik kılcal borunun dikkatlice kanla dolmasına izin verin.
    NOT: Kılcal boru x2 veya 100 μL kılcal tüp, ~75 μL'ye kadar kan toplamak için kullanılabilir.
  5. Daha fazla doku toplanması için başlığı soğuk, steril 1x PBS içeren 60 mm'lik yeni bir kaba yerleştirin (bölüm 4).
  6. Kan kılcal borunun içine girdikten sonra, pistonu hızlı bir şekilde 1,5 mL'lik bir tüpe bastırın. Kanın tüpün dibinde olduğundan emin olmak için tüpü hafifçe vurun veya hızlıca döndürün.
  7. Çöpün geri kalanı için tekrarlayın.
    NOT: Yavruları buz üzerinde tutmak ve aralarında hızlı hareket etmek, toplama hacmini sınırlayacak ölüm sonrası pıhtılaşma riskini azaltmak için çok önemlidir.
  8. Kanı oda sıcaklığında 30 dakika pıhtılaştırın.
  9. Kan örneklerini 4 °C, 16.000 × g'da 20 dakika santrifüjleyin.
  10. Serumu 200 μL'lik bir pipet ile 500 μL'lik taze tüplere, tüpün altındaki kan hücresi peletini bozmadan aktarın.
    NOT: Serum saman renginde olmalı ve kırmızı kalıntı içermemelidir. Her fetüs 15-30 μL serum vermelidir.
  11. Toplanan serumu -80 °C'de saklayın.

4. Fetal beyin toplanması

  1. Diseksiyon mikroskobundan bakarak, kavisli forseps kullanarak burnu tutun ve kafatası kapağındaki cildi dikkatlice soymak için #5 forseps kullanın ve tutma kolaylığı için burnuna bağlı tutun. Açı #5 kafatasına göre 45 ° 'ye kadar forseps, gelişmekte olan kafatası olan şeffaf zarı dikkatlice delin, forsepsleri kafatasına paralel olarak kaydırın, kafatası kapağının altına yerleştirin ve ardından bir tarafa sıkıştırın ve soyun. Bir taraf çıkarıldıktan sonra, kalan tarafı #5 forseps ile kavrayın ve diğer tarafa soyun.
  2. Bir mikro kaşık kullanarak beyni nazikçe kafatasından çıkarın ve beyni soğuk 1x PBS içeren 60 mm'lik taze bir tabağa aktarın.
    NOT: Bu noktada, tüm beyinler immün boyama için sabitlenebilir ve gömülebilir. Daha önce yayınlanmış metodolojiyebakınız 32.
  3. Diğer moleküler uygulamalar için dokunun dondurulması gerekiyorsa, ilgilenilen alanı alt diseksiyon yapın. Lateral, üçüncü ve dördüncü ventriküllerin etrafındaki periventriküler dokunun izolasyonu aşağıda açıklanmıştır.
    1. Kavisli forsepsleri kullanarak, beyni baskın olmayan el ile arka beyin ve ön beynin birleştiği yerde tutun. Baskın el ile neşteri bıçak beynin yüzeyine paralel olacak şekilde tutun. Orta kortikal bölgeye sıkıca bastırın (Şekil 1).
    2. Hala arka beyni tutarak, ön beyinden ayırmak için arka beynin önünde ikinci bir kesi yapın (Şekil 1). En ön bölümde, lateral ventriküller olan yatay düzlem içinde yer alan iki küçük yarım daire biçimli boşluk arayın. Beyni yerinde tutmak için her ventrikülün ortasına yerleştirilmiş kavisli forsepsleri kullanın, # 5 forseps kullanarak astarı dikkatlice inceleyin ve taze temiz 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne çıkarın.
    3. Orta bölümde, üçüncü ventrikül olan ventral yüzeyde küçük bir doğrusal boşluk arayın. # 5 forseps kullanarak, ventriküler yüzeyin her iki tarafındaki astarı dikkatlice sıkıştırın, ardından taze temiz 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne çıkarın.
    4. En arka bölümde, dördüncü ventrikül olan arka beynin merkezinde küçük bir doğrusal boşluk arayın. # 5 forseps kullanarak her iki taraftaki astarı inceleyin, ardından taze temiz 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne çıkarın.
      NOT: Arka beynin dilimlenmesi temiz bir kesim değilse, dördüncü ventrikül dokusu gizlenebilir ve/veya tahrip olabilir.
    5. Adım 4.3.2-4.3.4 için, doku mikrosantrifüj tüplerine yerleştirildikten hemen sonra, tüpleri hızlı bir şekilde sıvı nitrojen içeren kriyo güvenli bir kaba yerleştirin.
      NOT: Tüpler, kalan numuneler diseke edilene kadar sıvı nitrojen içinde tutulabilir. DİKKAT: Sıvı nitrojen şiddetli donmalara neden olabilir. Ellerinizi doğrudan sıvı nitrojene batırmayın ve sıçramalarını önleyin.
    6. Donmuş tüp(ler)i kuru buz üzerine yerleştirin ve donmuş dokuyu kullanana kadar -80 °C'lik bir dondurucuya aktarın.

Sonuçlar

Bu teknikle elde edilen beyin dokusunun kalitesini göstermek için, daha önce bildirilen bir teknik32'ye göre GFAP için immün boyalı Nestin-CFPnuc farelerinden35 alınan örnek fetal beyinleri gösteriyoruz. Nestin+ hücreleri, yüzeyden uzanan GFAP+ filamentleri ile lateral ventrikülü kaplarken görülür (Şekil 2A). WT veya Nf1-heterozigot suşlarda Ob'ye maruz kalan fa...

Tartışmalar

Farelerden kan almak için geleneksel yöntemler arasında retrobulbar, kuyruk damarı, safen damarı, yüz damarı ve juguler ven kanamasıbulunur 40,41,42. Ne yazık ki, bu yöntemler hayvanın büyüklüğü ve küçük, hassas damar sistemi nedeniyle embriyonik kan toplama için ideal değildir. Dekapitasyondan sonra yerçekimi destekli drenaj yoluyla kan toplanması, numunelerimizde hem dü...

Açıklamalar

Yazarların herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

N Brossier, Nörofibromatozis Terapötik Hızlandırma Programı (NTAP, Hibe # 210112) tarafından finanse edilen Nörofibromatozis Klinik ve Translasyonel Araştırmalarında Francis S. Collins Scholars Programı tarafından desteklenmektedir. Bu yayın, kısmen Johns Hopkins Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki NTAP'tan sağlanan fonlarla desteklenmiştir. İçeriği yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Johns Hopkins Üniversitesi Tıp Fakültesi'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir. St. Louis Çocuk Hastanesi (FDN-2022-1082'den NMB'ye) ve St. Louis Diyabet Araştırma Merkezi'ndeki Washington Üniversitesi (NIH P30 DK020579) tarafından ek destek. Mikroskopi, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi, Washington Üniversitesi Çocuk Keşif Enstitüsü ve St. Louis Çocuk Hastanesi (CDI-CORE-2015-505 ve CDI-CORE-2019-813) ve Barnes-Yahudi Hastanesi Vakfı (3770 ve 4642) tarafından desteklenen Washington Üniversitesi Hücresel Görüntüleme Merkezi (WUCCI) kullanılarak gerçekleştirildi. Nestin-CFPnuc35 fareleri Grigori Enikolopov (Rönesans Tıp Okulu, Stony Brook Üniversitesi, NY) tarafından cömertçe sağlandı ve R681X veya C383X germ hattı mutasyonu 32,38,39 için heterozigot Nf1 fareleri David Gutmann (Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi, St. Louis, MO) tarafından cömertçe sağlandı. Şekil 1, BioRender.com ile oluşturulmuştur.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
#5/45 ForcepsDumont 11251-35tip shape: angled 45°
4200 TapestationAgilentG2991BAVerify RNA integrity and quality, measurement of RIN values
Benchtop Liquid Nitrogen ContainerThermo Fisher2122Or other cryo-safe container
Control ChowPicoLab5053Research diets D12328 (low-fat, low-sugar) may also be used.
Curved ForcepsCole ParmerUX-10818-25Tip shape: curved 90°
Dissecting blade handleCole-Parmer Essentials10822-20SS Siegel-Type, #10 to #15 blades
EMS SuperCut Dissection ScissorsElectron microscope sciences72996-015½" (139.7 mm), Straight
GFAP AntibodyAbcamab7260Dilute 1:350. Block with 10% serum containing 0.3 M Glycine.
Glassvan Carbon Steel Surgical Blades, Size 11MYCO medical2001T-11#11 blades allow straight, flat cut
Micro lab spoonAz ScilabA2Z-VL001stainless steel, autoclavable
Micro scissorsRubis78180-1C3model 1C300
Minivette POCT neutralSarstedt17.2111.050nominal volume: 50 µL, without preparation
NanoropThermo Fisher13-400-519Measure RNA concentration, 260/280 ratios
Obesogenic dietResearchdiets.comD12331High-fat, high-sucrose
Total Cholesterol ReagentThermo FisherTR13421Colorimetric detection
β-actin antibodyCell Signaling8457Dilute 1:1,000.

Referanslar

  1. Listernick, R., Darling, C., Greenwald, M., Strauss, L., Charrow, J. Optic pathway tumors in children: the effect of neurofibromatosis type 1 on clinical manifestations and natural history. J Pediatr. 127 (5), 718-722 (1995).
  2. Fisher, M. J., et al. Integrated molecular and clinical analysis of low-grade gliomas in children with neurofibromatosis type 1 (NF1). Acta Neuropathol. 141 (4), 605-617 (2021).
  3. Cimino, P. J., et al. Expanded analysis of high-grade astrocytoma with piloid features identifies an epigenetically and clinically distinct subtype associated with neurofibromatosis type 1. Acta Neuropathol. 145 (1), 71-82 (2023).
  4. Lucas, C. -. H. G., et al. Multiplatform molecular analyses refine classification of gliomas arising in patients with neurofibromatosis type 1. Acta Neuropathol. 144 (4), 747-765 (2022).
  5. Fisher, M. J., et al. Management of neurofibromatosis type 1-associated plexiform neurofibromas. Neuro-Oncol. 24 (11), 1827-1844 (2022).
  6. Packer, R. J., et al. Plexiform neurofibromas in NF1. Neurology. 58 (10), 1461-1470 (2002).
  7. Evans, D. G. R., et al. Malignant peripheral nerve sheath tumours in neurofibromatosis 1. J Med Genet. 39 (5), 311 (2002).
  8. Prudner, B. C., Ball, T., Rathore, R., Hirbe, A. C. Diagnosis and management of malignant peripheral nerve sheath tumors: Current practice and future perspectives. Neurooncol Adv. 2, i40-i49 (2020).
  9. Ma, Y., et al. A molecular basis for neurofibroma-associated skeletal manifestations in NF1. Genet Med. 22 (11), 1786-1793 (2020).
  10. Ozarslan, B., Russo, T., Argenziano, G., Santoro, C., Piccolo, V. Cutaneous findings in neurofibromatosis Type 1. Cancers. 13 (3), 463 (2021).
  11. Hyman, S. L., Shores, A., North, K. N. The nature and frequency of cognitive deficits in children with neurofibromatosis type 1. Neurology. 65 (7), 1037-1044 (2005).
  12. Morris, S. M., et al. Disease burden and symptom structure of autism in neurofibromatosis type 1: a study of the International NF1-ASD Consortium Team (INFACT). JAMA Psychiatry. 73 (12), 1276-1284 (2016).
  13. Geoffray, M. -. M., et al. Predictors of cognitive, behavioural and academic difficulties in NF1. J Psychiatr Res. 140, 545-550 (2021).
  14. Monroe, C. L., Dahiya, S., Gutmann, D. H. Dissecting clinical heterogeneity in neurofibromatosis type 1. Ann Rev Pathol. 12 (1), 53-74 (2017).
  15. Kehrer-Sawatzki, H., Mautner, V. -. F., Cooper, D. N. Emerging genotype-phenotype relationships in patients with large NF1 deletions. Hum Genet. 136 (4), 349-376 (2017).
  16. Hou, Y., et al. Predictors of cognitive development in children with neurofibromatosis type 1 and plexiform neurofibromas. Dev Med Child Neurol. 62 (8), 977-984 (2020).
  17. Biotteau, M., et al. Sporadic and familial variants in NF1: an explanation of the wide variability in neurocognitive phenotype. Front Neurol. 11, 368 (2020).
  18. Rodriguez, A., et al. Maternal adiposity prior to pregnancy is associated with ADHD symptoms in offspring: evidence from three prospective pregnancy cohorts. Int J Obes (Lond). 32 (3), 550-557 (2008).
  19. Andersen, C. H., Thomsen, P. H., Nohr, E. A., Lemcke, S. Maternal body mass index before pregnancy as a risk factor for ADHD and autism in children). Eur Child Adolesc Psychiatry. 27 (2), 139-148 (2018).
  20. Pugh, S. J., et al. Gestational weight gain, prepregnancy body mass index and offspring attention-deficit hyperactivity disorder symptoms and behaviour at age 10. Bjog. 123 (13), 2094-2103 (2016).
  21. Mina, T. H., et al. Prenatal exposure to maternal very severe obesity is associated with impaired neurodevelopment and executive functioning in children. Pediatr Res. 82 (1), 47-54 (2017).
  22. Oken, E., et al. Analysis of maternal prenatal weight and offspring cognition and behavior: Results from the Promotion of Breastfeeding Intervention Trial (PROBIT) Cohort. JAMA Netw Open. 4 (8), e2121429-e2121429 (2021).
  23. Buss, C., et al. Impaired executive function mediates the association between maternal pre-pregnancy body mass index and child ADHD symptoms. PLOS ONE. 7 (6), e37758 (2012).
  24. Li, Y. -. M., et al. Association between maternal obesity and autism spectrum disorder in offspring: a meta-analysis. J Autism Dev Disord. 46 (1), 95-102 (2016).
  25. Dow, C., Galera, C., Charles, M. -. A., Heude, B. Maternal pre-pregnancy BMI and offspring hyperactivity-inattention trajectories from 3 to 8 years in the EDEN birth cohort study. Eur Child Adolesc Psychiatry. 32 (10), 2057-2065 (2023).
  26. Fast, K., et al. Prevalence of attention-deficit/hyperactivity disorder and autism in 12-year-old children: A population-based cohort. Devl Med Child Neurol. 66 (4), 493-500 (2023).
  27. Carter, S. A., et al. Maternal obesity and diabetes during pregnancy and early autism screening score at well-child visits in standard clinical practice. Autism. 28 (4), 975-984 (2023).
  28. West, Z., et al. Relationships between maternal body mass index and child cognitive outcomes at 3 years of age are buffered by specific early environments in a prospective Canadian birth cohort. J Dev Orig Health Dis. 14 (1), 42-52 (2023).
  29. Gutmann, D. H., et al. Neurofibromatosis type 1. Nat Rev Dis Primers. 3, 17004 (2017).
  30. Martins, A. S., et al. Lower fasting blood glucose in neurofibromatosis type 1. Endocr Connect. 5 (1), 28-33 (2016).
  31. Martins, A. S., et al. Increased insulin sensitivity in individuals with neurofibromatosis type 1. Arch Endocrinol Metab. 62 (1), 41-46 (2018).
  32. Brossier, N. M., Thondapu, S., Cobb, O. M., Dahiya, S., Gutmann, D. H. Temporal, spatial, and genetic constraints contribute to the patterning and penetrance of murine Neurofibromatosis-1 optic glioma. Neuro Oncol. 23 (4), 625-637 (2020).
  33. de Lurdes Pinto, M., et al. Technical Report: Mouse fetal blood collection taking the best out of the old needle-syringe method. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 35 (1), 5 (2008).
  34. Musillo, C., et al. Bdnf-Nrf-2 crosstalk and emotional behavior are disrupted in a sex-dependent fashion in adolescent mice exposed to maternal stress or maternal obesity. Transl Psychiatry. 13 (1), 399 (2023).
  35. Encinas, J. M., Vaahtokari, A., Enikolopov, G. Fluoxetine targets early progenitor cells in the adult brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (21), 8233-8238 (2006).
  36. Anastasaki, C., et al. Human induced pluripotent stem cell engineering establishes a humanized mouse platform for pediatric low-grade glioma modeling. Acta Neuropathol Commun. 10 (1), 120 (2022).
  37. Cai, H. -. J., Xie, C. -. L., Chen, Q., Chen, X. -. Y., Chen, Y. -. H. The relationship between hepatic low-density lipoprotein receptor activity and serum cholesterol level in the human fetus. Hepatology. 13 (5), 852-857 (1991).
  38. Toonen, J. A., et al. NF1 germline mutation differentially dictates optic glioma formation and growth in neurofibromatosis-1. Hum Mol Genet. 25 (9), 1703-1713 (2016).
  39. Guo, X., Pan, Y., Gutmann, D. H. Genetic and genomic alterations differentially dictate low-grade glioma growth through cancer stem cell-specific chemokine recruitment of T cells and microglia. Neuro Oncol. 21 (10), 1250-1262 (2019).
  40. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
  41. Meyer, N., et al. Impact of three commonly used blood sampling techniques on the welfare of laboratory mice: Taking the animal's perspective. PLOS ONE. 15 (9), e0238895 (2020).
  42. Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
  43. Jung, J., Garnett, E., Rector, K., Jariwala, P., Devaraj, S. Effect of collection tube type on glucose stability in whole blood. Ann Clin Lab Sci. 50 (4), 557-559 (2020).
  44. Bonetti, G., et al. Which sample tube should be used for routine glucose determination. Prim Care Diabetes. 10 (3), 227-232 (2016).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Anahtar Kelimeler Maternal DiyetN rogeli imN rofibromatozis Tip 1Fetal BeyinFetal SerumY ksek Ya l Y ksek S kroz DiyetiDoku Toplamamm n BoyamaMakro Besin Profili

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır