Lobüller Boyunca Farelerde Pulmoner Mikrovasküler Yoğunluğun Ölçülmesi

Özet

Burada, İzolektin B_4'ün tek boyamasını kullanarak tüm farelerin akciğer dokusu için pulmoner mikrovasküler yoğunluğun tarafsız bir şekilde ölçülmesini sağlamak için basit ve ekonomik bir protokol açıklıyoruz.

Özet

Pulmoner anjiyogenezin anormal değişimi, akciğer mikrovasküler disfonksiyonu ile ilişkilidir ve vasküler duvar bütünlüğü, kan akışının düzenlenmesi ve gaz değişimi ile derinden bağlantılıdır. Fare modellerinde, akciğer lobları boyut, şekil, konum ve vaskülarizasyon açısından önemli farklılıklar gösterir, ancak mevcut yöntemler mikrovasküler yoğunluğu ölçerken bu varyasyonları dikkate almaz. Bu sınırlama, akciğer mikrovasküler disfonksiyonunun kapsamlı bir şekilde çalışılmasını ve farklı lobüller arasında mikrovasküler dolaşımın potansiyel olarak yeniden şekillenmesini engellemektedir. Protokolümüz, pulmoner mikrovasküler yoğunluk değişikliklerini ölçmek için iki kesitleme yöntemi kullanarak, farelerde hava yolu dallarının farklı loblar boyunca boyutunu, şeklini ve dağılımını kullanarak bu boşluğu ele almaktadır. Daha sonra, akciğer mikrovasküler endotel hücrelerini farklı dilimler üzerinde etiketlemek için İzolektin B₄ (IB₄) boyamayı kullanıyoruz, ardından ücretsiz olarak kullanılabilen ImageJ yazılımını kullanarak tarafsız mikrovasküler yoğunluk analizi yapıyoruz. Burada sunulan sonuçlar, genç ve yaşlı fareleri karşılaştırarak, yaşlanma ile birlikte akciğer lobülleri boyunca değişen derecelerde mikrovasküler yoğunluk değişikliklerini vurgulamaktadır. Bu protokol, pulmoner mikrovasküler yoğunluğun tarafsız bir şekilde ölçülmesi için basit ve uygun maliyetli bir yaklaşım sunarak, akciğer mikrovasküler sisteminin hem fizyolojik hem de patolojik yönleri üzerine araştırmaları kolaylaştırır.

Giriş

Endotel hücreleri (EC'ler), kan damarlarının iç astarında yer alan, tüm arteriyel ve venöz ağacı kaplayan ve kan damarlarının ve organların stabilitesinin korunmasında çok önemli bir rol oynayan özel bir hücre türüdür¹. Akciğerler yüksek derecede vaskülarize organlardır ve akciğerlerde damar duvarını oluşturmak, kan akışını düzenlemek, gaz değişimini kolaylaştırmak, inflamatuar yanıtları modüle etmek, trombosit aktivitesini kontrol etmek, vasküler büyümede rol oynayan düzenleyici maddeleri salgılamak, onarım ve pıhtılaşma dengesini korumak gibi temel fizyolojik ve patolojik roller oynarlar....

Protokol

Tüm deneyler, Sichuan Üniversitesi Hayvan Araştırma Komitesi'nin (No K2023023) etik yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi.

1. Fare akciğer lobları için parafin kesitlerinin hazırlanması

1. Fareden akciğer dokusu alın.
   1. Farklı yaş gruplarında fare akciğerlerindeki mikrovasküler yoğunluğu değerlendirmek için 6 hafta ve 16 ayda erkek C57Bl / 6 fareleri seçin.
   2. Farelerde intraperitoneal enjeksiyon yoluyla 100 mg / kg pentobarbital sodyum uygulayın. Anesteziden sonra servikal çıkık ile farelere ötenazi yapın. Göğüs boşluğunu açın ve akciğer dokusu elde edin.

Tartışmalar

Pulmoner mikrovasküler yoğunluğun incelenmesi, pulmoner fizyolojik süreçlerin anlaşılması ve ayrıca solunum yolu hastalıkları için biyobelirteç(ler)in tanımlanması için önemli etkilere sahiptir. Pulmoner dolaşım, ince bir endotel hücre tabakası ile çevrili geniş bir kılcal yüzey alanına sahiptir. Bu hücrelerin ve alveolar epitel hücrelerinin uyumlu bir şekilde yan yana gelmesi, karmaşık gaz değişimi sürecini kolaylaştırmak için özel olarak tasarlanm?.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% Paraformaldehyde	Biosharp	BL539A	Tissue Fixative
4',6-diamidino-2-phenylindole	MCE	HY-D0814	Nucleic Dyes
Alexa-647 Fluor Conjugated Isolectin B4	Thermo	I32450	Binding Microvessels
Anti-fluorescent Tablet Sealer	Abcam	AB104135	Sample Fixation
Antigen Repair Fluid	Biosharp	BL151A	Repair of Antigenic Sites
Biopsy Cassette	ActivFlo	39LC-500-1	Fixing and Positioning Tissue Samples
Bovine Serum Albumin	Sigma	B2064-50G	Sealing Solution
Cold Plate	Leica	HistoCore Arcadia H	Freezing Samples
Constant Temperature Electric Drying Oven	Taisite	101-0AB	High Temperature Repair
Disposable Microtome Blade	Leica	14035838383	Cutting Tissue Samples to Prepare Sections
Embedding Molds	Shitai	26155166627	Fixing Tissue Samples
Ethanol	Kelong	CAS 64-17-5	Tissue Dehydration Solution
Heated Paraffin Embedding Station	Leica	EG1150	Embedding Tssue Samples in Paraffin
HistoCore Water Bath	Leica	HI1220	Flatten and Fix Tissue Samples
ImageJ (Fiji)	NIH	1.54f	Quantitative Tool
Immunohistochemistry Pens	Biosharp	BC004	Water-blocking Agent
Medical Forceps	Shanghai Medical Equipment	N/A	Grasping, Manipulating, or Moving tissue samples
Microscope	Nikon	Ts2	Imaging Device
Mounting Media	Jiangyuan	Tasteless	Fixing and Preserving Tissue Sections
Paraffin Wax	SCHLEDEN	80200-0014	Fixing Tissue Structure
PBS	Beyotime	C0221A	Wash Buffer
Pentobarbital Sodium	Beijing Chemical Reagent Company	Q/H82-F158-2002	Anesthetic
Rotary Microtome	Biobase	Bk-2258	Preparing Slices
Sterile Scissors	Shanghai Medical Equipment	N/A	segmenting Tissue Samples
Surgical Scalpel	Shanghai Medical Equipment	N/A	Cutting Tissue Samples
Triton	Solarbio	T8200	Permeabilization Solution
Wash-Free Slide	PLATINUM PRO	PRO-04	Fixing Samples for Staining
Xylene	SUM	XK13-011-00031	Tissue De-waxing Solution