Questo lavoro è sostenuto da borse di ricerca dal National Institutes of Health (HL068915; HL088206) e contributi al Fondo di conduzione cardiaca presso il Children Hospital di Boston.

Parte 1: Preparare le soluzioni e il sistema isolato cuore perfuso <ol><li> La mattina del dell&#39;esperimento, 4,0 L di Krebs-Henseleit soluzione viene preparata come descritto in precedenza [5, 6]. </li><li> 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime (BDM) è sciolto in 1,0 L di Krebs-Henseleit soluzione decantata dal perfusato preparato al punto 1.1. </li><li> Altri 150 ml di Krebs-Henseleit viene rimosso dal perfusato preparato al passo 1.1 e mescolato con 5 mol / l di-8-ANEPPS (diluito da un mMol / L 10 magazzino sciolto in dimetilsolfossido (DMSO)). </li><li> Queste tre soluzioni sono trasferiti ad acqua con camicia in vetro serbatoi (Radnóti) dove sono pre-riscaldato a 41,0 ° C e ossigenata con un gorgogliatore sommerso (Radnóti) con 0,2 micron filtrata 95% O 2, 5% CO 2. Le soluzioni da 3 serbatoi magazzino vengono pompati al muro con sistema Langendorff Masterflex ™ L / S pompe peristaltiche ea basso assorbimento tubo al silicone (Cole-Parmer). </li><li> Prima del montaggio, il sistema Langendorff vetro (Radnóti) è meticolosamente lavata con E-Toxa-CLEAN reagente (Sigma-Aldrich) e risciacquata a fondo con 0,1 M / L HCl, 100% di etanolo e acqua distillata. </li><li> Il mancato ricircolo Langendorff apparato è stato costruito per fornire 70 mm Hg a pressione costante da 3 serbatoi separati ossigenati, che sono separati dal cuore con l&#39;acqua con camicia serpentine di riscaldamento e trappole bolla (Radnóti) [7]. Le 3 linee di perfusione indipendente convergono sopra il cuore a due rubinetti a 3 vie, che ci permette di controllare con precisione la consegna delle soluzioni preparate in passi 1,1-1,3. Acqua con camicia vetro è collegato in serie con tubi BPT Masterflex PharMed (Cole-Parmer) e riscaldato a 39 ° C con acqua distillata usando due circolatori E100 (Lauda). Perdita di calore attraverso il platino tubo al silicone vulcanizzato (Cole-Parmer) che collega la pressione di testa serbatoi per le bobine di riscaldamento e trappole bolla portato ad una temperatura di 37 ° C perfusato raggiungere il cuore. </li></ol> Parte 2: Raccolta del cuore di ratto e set-up perfusione Langendorff <ol><li> Per indurre profonda anestesia generale in 200-250 g ratti Lewis, 100 mg / kg di ketamina e 10 mg / kg xylazina viene iniettato nella cavità intraperitoneale. A questa miscela, si aggiungono 500 U / kg di eparina per prevenire la coagulazione del sangue e l&#39;ischemia miocardica durante la procedura di espianto. </li><li> Per un facile accesso al cuore e dei grossi vasi, la parete toracica anteriore è stato rimosso. Dopo di che, il tessuto circostante è attentamente sezionato e aperto il sacco pericardico. </li><li> A seguito di identificazione della vena cava inferiore, il vaso è legatura con 5-0 seta (Ethicon) e l&#39;intero blocco cuore-polmone è espiantati. Tessuti è immediatamente posto in ghiacciata Krebs-Henseleit soluzione contenuta in un bicchiere da 50 ml su ghiaccio. </li><li> L&#39;aorta ascendente è rapidamente individuato e sezionato dal tessuto circostante. Una di dimensioni idonee cannula (Harvard Apparatus) è inserita nell&#39;aorta, avendo cura di evitare di interrompere la perfusione obbligatorio delle arterie coronarie mediante l&#39;inserimento della cannula troppo nella radice aortica. La cannula viene fissato l&#39;aorta ascendente con 5-0 seta (Ethicon). </li><li> Il cuore di ratto è poi situato su di esso Langendorff senza introdurre bolle d&#39;aria nella cannula. Retrograda perfusione vascolare coronarica è ormai consolidata con il caldo, ossigenata di Krebs-Henseleit soluzione dalla pressione a testa descritto al punto 1.6. </li><li> Tessuto extra, tra cui i polmoni, è ora rimosso e il cuore è perfuso per 20 minuti per permettere il recupero della funzione e stabilizzare il ritmo. Durante questo periodo, una sonda molto sottile di temperatura termocoppia (Cole-Parmer) è introdotto nella cavità ventricolare sinistra e suturato in posizione con 5-0 Prolene sutura (Ethicon). La sonda è collegata ad un termo-regolatore (di Digi-Sense) per garantire la temperatura del cuore è mantenuta a 37 ° C regolando le impostazioni di pompe di circolazione dell&#39;acqua. Moto da perfusato stillicidio dalla apice cardiaco è ridotto al minimo mettendo un pezzo di garza nel recipiente effluenti. </li></ol> Parte 3: il cuore di carico con colorante potenziometrica e acquisire segnali elettrografiche e ottici <ol><li> Di-8-ANEPPS (Invitrogen) viene caricato nel cuore passando alla linea di perfusione contenente il Krebs-Henseleit miscelato con il colorante fluorescente con un rubinetto. Inoltre, una cannula 18G è collocato nell&#39;atrio sinistro e / o diritto e ulteriori 50 ml di soluzione colorante sta lentamente somministrato in ognuna di queste camere perché non sono sufficientemente perfusi con colorante introdotto attraverso le arterie coronariche. </li><li> Durante la procedura di caricamento, 3 derivazioni ECG (Harvard Apparatus) sono gentilmente messo sulla superficie del cuore che non sta affrontando l&#39;ottica utilizzata per la mappatura. Elettrodo N o 1 è posizionato sulla parte posteriore apicale del ventricolo sinistro, N ° 2 sul atrio sinistro, e N <su<html> p&gt; o 3 come un elettrodo di riferimento sulla radice aortica (Figura 1). I segnali atriali e ventricolari elettrografiche sono poi amplificati, digitalizzati, e visualizzata accanto segnali ottici utilizzando il software (redshirt Imaging) (Figura 2). Un oscilloscopio (Tektronix TDS modello 1002) è utilizzato anche per visualizzare la superficie ECG s in tempo reale e per garantire la stimolazione adeguata. </li><li> ECG amplificatore (Hugo Sachs Elektronik) impostazioni: filtro passa-alto: 0,1 Hz Filtro passa basso: 150 Hz </li><li> La fotocamera CMOS (redshirt Imaging) e macroscopio stata posizionata mediante gli aggiustamenti XYZ modo che la superficie del cuore è a fuoco e centrata nella cornice di acquisizione. La fotocamera e le ottiche sono montate su un tavolo isolamento dalle vibrazioni (Minus K Technology) per ridurre al minimo le frequenze di risonanza. Allo stesso tempo, un elettrodo di stimolazione coassiale (Harvard Apparatus), controllato con un isolato, S48 elettrico-stimolazione unità (Grass), è posto sulla atrio destro e il cuore viene stimolato a 300 battiti al minuto (Figura 1). </li><li> Stimolazione elettrica (Erba) impostazioni: Vota: 5 impulsi al secondo Ritardo: 0,2 ms Durata: 2 ms Volt: 6-12 V Modalità: Ripetizione Pulse: Singolo </li><li> Per le registrazioni ottiche che mancano di artefatti da movimento di contrazione, il cuore ha bisogno di essere elettromeccanicamente disaccoppiato. Facciamo questo nuovo passaggio linee di perfusione a Krebs-Henseleit soluzione che contiene 11 mmol / L BDM. Tra acquisizioni, il cuore è perfuso con puro Krebs-Henseleit per aiutare a preservare la vitalità del preparato. </li><li> I parametri di registrazione sono impostati utilizzando il software (Imaging redshirt) con le impostazioni di acquisizione seguenti: Configurazione: 2.000 Hz; 128x128 gamma di pixel Intervallo di telaio: 0,5 ms Fotocamera Guadagno Amplificatore: 5x On-Chip Guadagno: 8x-12Me-bene Shutter: 500 ms di ritardo Numero di fotogrammi: 4000 Durata: 2000 ms </li><li> Tutte le luci della stanza e le attrezzature sono disattivati ​​o schermati per eliminare rumori di fondo durante la registrazione. La luce a LED illumina il cuore solo durante la registrazione ottica per ridurre fotometabolismo e tossicità colorante. L&#39;otturatore sorgente luminosa è controllata con un impulso di 5 V fornita attraverso il pannello di controllo per mezzo di un D-to-A bordo del computer (Imaging redshirt). </li></ol> Parte 4: Analisi delle informazioni di acquisizione utilizzando Imaging Software redshirt <ol><li> A seguito dell&#39;acquisizione, i dati vengono elaborati utilizzando diverse impostazioni del filtro. Noi di solito utilizzare le impostazioni predefinite, tranne quando si regola la Banda Stop / filtro passa, che è impostato con il confine a sinistra al 44,0 e il bordo destro a 98,0. In seguito le informazioni registrate vengono elaborate e un film è generato (Imaging redshirt). </li><li> I dati di uno di acquisizione corrisponde alla attivazione elettriche locali a 16.384 siti sulla superficie del cuore per un periodo di 2 secondi. Il software permette a questi segnali locali per essere direttamente confrontati tra loro e con le registrazioni atriali e ventricolari elettrografiche. I dati vengono quindi visualizzati con la mappatura locali attivazione elettrica per colorare e rendere queste informazioni come un&#39;animazione che mostra l&#39;attivazione spazio-temporale elettrico sulla superficie cardiaca. Per creare un&#39;animazione tale, si usa il software: <ul><li> temporalmente e / o spazialmente filtrare i dati </li><li> selezionare un orario di inizio e di fine per l&#39;animazione </li><li> segnali ottici mappa di colori in base a riposo l&#39;intensità luminosa di ogni pixel </li><li> sovrapporre i dati di colore risultante con una foto del cuore </li><li> generare l&#39;animazione </li></ul></li></ol> Parte 5: risultati Rappresentante Se la preparazione cuore perfuso era immobile durante la registrazione, i segnali ottici mostrano un picco distinto per ogni pixel coinvolti in un cambiamento della intensità di emissione di di-8-ANEPPS. I film corrispondente (figure 3 e 4) dimostrare un fronte d&#39;onda di eccitazione di propagazione attraverso la superficie epicardica del cuore così come le registrazioni acquisite simultaneamente elettrografiche (Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure3.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Una fotografia di un Langendorff-perfuso preparazione cuore raffiguranti le posizioni degli elettrodi sulla stimolazione atrio destro e il derivazioni come descritto al punto 3.2. <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure4thumb.jpg" alt="Figura 2" border="0" /> Figura 2. Rappresentante segnali ottici e registrazioni elettrografiche da un cuore perfuso di ratto Lewis. Un pannello mostra un&#39;immagine della superficie epicardico utilizzato per l&#39;imaging ottico. La posizione dei pixel selezionati per dimostrare i cambiamenti nella emissione di fluorescenza nel tempo, nel Pannello di B sono indicati da frecce colorate. Segnali elettrografici sono mostrati in Pannello di C con la linea rossa che indica l&#39;attivazione atriale e la linea di luce blu che corrisponde al segnale ventricolare. Per favoreve.com/files/ftp_upload/1138/Figure4.jpg &quot;&gt; clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

<ol>
	<li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+heart.">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).</li><li>Hucker, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Images+in+cardiovascular+medicine.+Optical+mapping+of+the+human+atrioventricular+junction.">Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction.</a> Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).</li><li>Entcheva, E., Bien, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macroscopic+optical+mapping+of+excitation+in+cardiac+cell+networks+with+ultra-high+spatiotemporal+resolution.">Macroscopic optical mapping of excitation in cardiac cell networks with ultra-high spatiotemporal resolution.</a> Prog Biophys Mol Biol. 92 (2), 232-257 (2006).</li><li>Entcheva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+electrical+activity+in+cardiac+cells+using+an+all-solid-state+system.">Fluorescence imaging of electrical activity in cardiac cells using an all-solid-state system.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51 (2), 333-341 (2004).</li><li>Stamm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endotoxin-induced+alterations+in+myocardial+calcium+handling:+obligatory+role+of+cardiac+TNF-alpha.">Rapid endotoxin-induced alterations in myocardial calcium handling: obligatory role of cardiac TNF-alpha.</a> Anesthesiology. 95 (6), 1396-1405 (2001).</li><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+conduction+through+engineered+tissue.">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).</li><li>Skrzypiec-Spring, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts.">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).</li></ol>

Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso in bambini Hospital di Boston.

L&#39;asportazione del cuore di ratti anestetizzati deve essere eseguita rapidamente per evitare di ischemia miocardica. Se la perfusione ischemia coronarica o insufficiente si verifica, il cuore probabilmente sviluppare aritmie e può diventare infartuata. Inoltre, questi cuori si dimostrano insufficienti emissione di fluorescenza per le registrazioni informative e le analisi successive. Prima di caricare il colorante, le cellule del miocardio devono essere adeguatamente perfusi con soluzione Krebs-Henseleit di stabili...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CardioCMOS-SM128f</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CardioPlex Software</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LUXEON LED Light Source 460-490 nm </td>
<td>Equipment</td>
<td>Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA</td>
<td>LXHL-PB02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Amplifier Type 689 Hugo Sachs Elektronik</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>730149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dichroic Mirror 505 nm</td>
<td>Equipment</td>
<td>Semrock, Rochester, NY 14624 USA</td>
<td>FF505-SDi01-25x36</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Emission Filter 605 nm Long Pass</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>THT Sideways</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA</td>
<td>25 BM-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Ball Joint Holder</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0177</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small Stimulation Electrode Set</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0160</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BM-6 Benchtop Vibration Isolation Platform</td>
<td>Equipment</td>
<td>Technology Inc., Inglewood, CA 90301</td>
<td>25 BM-6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monopolar ECG Electrode</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump SCI 400</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>401U/D1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump MasterFlex Easy Load II</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>Model 77201-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing Marprene #14</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>902.0016.016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MasterFlex Tubing</td>
<td>Equipment</td>
<td>PharMed, Westlake, OH 44145 USA</td>
<td>06485-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S48 Square Pulse Stimulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model S48</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SIU5 RF TRANSFORMER ISOLATION UNIT</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model SIU5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.25 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA </td>
<td>120142-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml Heating Coil</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>158822</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Compliance Bubble Trap</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>130149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luer Disconnect Cannula</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>72-1444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-Way stopcock, FLL to MLT, No Port Covers</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 72-2630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermocouple Thermometer</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>WU-91100-40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Fine IT-Series Flexible Microprobe </td>
<td>Equipment</td>
<td>PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA</td>
<td>IT-24P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oscilloscope Tektronix TDS 1002</td>
<td>Equipment</td>
<td>Tektronix Inc., Beaverton, OR 97005 USA</td>
<td>TDS 1002B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione monoxime </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketamine HCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hospira Inc., Lake Forest, IL 60045 USA</td>
<td>RL-0065</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xylazine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Lloyd Inc., Iowa 51601 USA</td>
<td>LB15705A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E-TOXA-CLEAN&reg;</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA </td>
<td>E9029</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Di-8-ANEPPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen, Carlsbad, CA 92008 USA</td>
<td>D-3167</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

optical mapping of langendorff-perfused rat hearts

Mappatura ottica della superficie cardiaca con coloranti fluorescenti voltaggio-sensibile è diventato un importante strumento per indagare l&#39;eccitazione elettrica in modelli sperimentali che vanno in scala da colture di cellule di interi organi<sup&gt; [1, 2]</sup&gt;. Utilizzando state-of-the-art sistemi di imaging ottico, generazione e propagazione dei potenziali d&#39;azione durante il normale ritmo cardiaco o per tutto l&#39;inizio e la manutenzione di aritmie possono essere visualizzati quasi istantaneamente<sup&gt; [1]</sup&gt;. L&#39;ultima disponibile in commercio di sistemi in grado di fornire informazioni spazio-temporali a risoluzioni estremamente elevate e si basano su custom-built attrezzature inizialmente sviluppato per superare gli ostacoli imposti dalla elettrofisiologici metodi più convenzionali<sup&gt; [1]</sup&gt;. I progressi in alta risoluzione e ad alta velocità Complementary Metal-Oxide-Semiconductor (CMOS), macchine fotografiche e intensamente brillante, diodi emettitori di luce (LED), così come tensione-sensibili coloranti, ottica, ed i filtri hanno cominciato a fare l&#39;aquisizione del segnale elettrico pratiche per i biologi cellulari cardiovascolari che sono più abituati a lavorare con microscopi. Anche se l&#39;ultima generazione di telecamere CMOS in grado di acquisire 10.000 frame al secondo su di un array 16.384 pixel, a seconda del tipo di preparazione del campione, ormai consolidata tecnologie di acquisizione di fluorescenza come array fotodiodo, sistemi di scansione laser, e raffreddato charged-coupled device (CCD telecamere) hanno ancora alcuni distinti vantaggi rispetto alla gamma dinamica e rapporto segnale-rumore e efficienza quantica<sup&gt; [1, 3]</sup&gt;. Nel presente studio, i cuori di ratto Lewis sono stati perfusi<em&gt; Ex vivo</em&gt; Con un perfusato cristalloidi (Krebs-Henseleit soluzione) a 37 ° C in un apparecchio Langendorff modificato. Dopo un periodo di stabilizzazione di 20 minuti, i cuori erano intermittente perfusi con 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime per eliminare le contrazioni associate movimento durante l&#39;acquisizione dell&#39;immagine. Per la mappatura ottica, abbiamo caricato i cuori con la risposta rapida sonda potenziometrica di-8-ANEPPS<sup&gt; [4]</sup&gt; (5 mmol / L) e brevemente illuminato la preparazione con 475 ± 15 nm luce di eccitazione. Durante un tipico 2 secondo periodo di illuminazione,&gt; 605 nm luce emessa dalla preparazione cardiaco è stato ripreso con una telecamera ad alta velocità CMOS collegata ad un macroscopio orizzontale. Per questa dimostrazione, i cuori sono stati ritmo di 300 battiti al minuto con un elettrodo coassiale collegato ad un&#39;unità isolata stimolazione elettrica. Registrazioni simultanee bipolare elettrografiche sono stati acquisiti e analizzati insieme con i segnali di tensione utilizzando un software facilmente reperibili. In questo modo, i potenziali d&#39;azione sulla superficie del Langendorff-cuori di ratto perfusi possono essere visualizzati e registrati con segnali elettrografiche.

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Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

Questo articolo descrive una tecnica ad alta risoluzione temporale e spaziale a otticamente movimento immagine del potenziale d&#39;azione sulla superficie del Langendorff-cuore perfuso di ratto utilizzando un colorante potenziometrica (di-8-ANEPPS).

Mappatura ottica di Langendorff-perfusi Hearts Rat

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

optical-mapping-of-langendorff-perfused-rat-hearts

Research

JoVE Journal

Biology

20.6K Views.  Children's Hospital Boston and Harvard Medical School. Questo articolo descrive una tecnica ad alta risoluzione temporale e spaziale a otticamente movimento immagine del potenziale d'azione sulla superficie del Langendorff-cuore perfuso di ratto utilizzando un colorante potenziometrica (di-8-ANEPPS).