Und Beiträge an die Reizleitung Fund an der Kinderklinik Boston; Diese Arbeit wird durch Forschungsmittel von den National Institutes of Health (HL088206 HL068915) unterstützt.

Teil 1: Bereiten Sie Lösungen und der isoliert perfundierten Herzen System <ol><li> Am Morgen des Experiments beträgt 4,0 L von Krebs-Henseleit-Lösung hergestellt wie zuvor beschrieben [5, 6] beschrieben. </li><li> 11 mmol / L 2,3-Butandion Monoxim (BDM) ist in 1,0 L von Krebs-Henseleit-Lösung aus dem Perfusat in Schritt 1.1 hergestellten dekantiert aufgelöst. </li><li> Eine zusätzliche 150 ml Krebs-Henseleit ist aus dem Perfusat in Schritt 1.1 hergestellten entfernt und mit 5 mol / l di-8-ANEPPS (verdünnt aus einer 10 mmol / L Lager in Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst). </li><li> 5% CO 2-Gas; Diese 3 Lösungen sind auf Wasser-ummantelten Glas Reservoire (Radnoti), wo sie sind auf 41,0 ° C vorgewärmt und mit Sauerstoff mit einem getauchten Bubbler (Radnoti) mit 0,2 um-gefiltert 95% O 2 übertragen. Lösungen aus den 3 stock Stauseen an der Wand montiert Langendorff-System mit Masterflex ™ L / S Schlauchpumpen und Low-Absorption Silikonschlauch (Cole-Parmer) gepumpt. </li><li> Vor der Montage ist die Langendorff System Glaswaren (Radnoti) sorgfältig mit E-TOXA-CLEAN-Reagenz (Sigma-Aldrich) gewaschen und gründlich mit 0,1 M / L HCl, 100% Ethanol und destilliertem Wasser gespült. </li><li> Die Nicht-Rückführung Langendorff-Apparatur wurde konstruiert, um 70 mm Hg bei konstantem Druck von 3 separate Sauerstoff Stauseen, die aus dem Herzen mit Wassermantel Heizschlangen und Blasenfallen getrennt zu liefern (Radnoti) [7]. Die 3 unabhängigen Perfusion Linien oberhalb des Herzens in zwei 3-Wege-Hähne konvergieren, so dass wir genau kontrollieren Lieferung der Lösungen in Schritten von 1,1 bis 1,3 zubereitet. Wasser-ummantelte Glas wird in Reihe mit Masterflex PharMed BPT-Schläuche (Cole-Parmer) angeschlossen und erwärmt auf 39 ° C mit destilliertem Wasser mit zwei E100-Umwälzpumpen (Lauda). Der Wärmeverlust durch die platin-veredelten Silikonschlauch (Cole-Parmer), dass der Druck-Kopf-Reservoirs verbindet sich mit dem Heizschlangen und Blasenfallen resultierte in einer 37 ° C Perfusat bis ins Herz reichen. </li></ol> Teil 2: Harvest der Ratte Herz und Set-up Langendorff Perfusion <ol><li> Um tiefe allgemeine Betäubung in 200-250 g Lewis Ratten zu induzieren, ist 100 mg / kg Ketamin und 10 mg / kg Xylazin in die Bauchhöhle injiziert. Zu dieser Mischung, fügen wir 500 U / kg Heparin auf die Blutgerinnung und Myokardischämie während der Explantation Verfahren zu verhindern. </li><li> Für einen einfachen Zugriff auf das Herz und die großen Gefäße, ist die vordere Brustwand entfernt. Danach wird das umliegende Gewebe sorgfältig seziert und die pericardial Sack öffnete. </li><li> Nach der Identifizierung der unteren Hohlvene, ist dieses Schiff mit 5-0 Seide (Ethicon) und das gesamte Herz-Lungen-Block ist explantierten ligiert. Das Gewebe wird sofort in eiskaltem Krebs-Henseleit-Lösung in einem 50 mL Becherglas auf Eis enthielt. </li><li> Die aufsteigende Aorta ist schnell identifiziert und seziert aus dem umgebenden Gewebe. Eine ausreichend große Kanüle (Harvard Apparatus) ist in die Aorta eingeführt, wobei darauf zu achten unterbrechen obligatorischen Perfusion der Koronararterien durch Einsetzen der Kanüle zu weit in die Aortenwurzel. Die Kanüle ist an der aufsteigenden Aorta mit 5-0 Seide (Ethicon) gesichert. </li><li> Die Ratte Herz wird dann auf der Langendorff-Apparatur, ohne dabei Luftblasen in die Kanüle gelegt. Retrograde koronaren vaskulären Perfusion ist nun mit dem warmen, sauerstoffreichen Krebs-Henseleit-Lösung aus der Druck-Kopf in Schritt 1.6 beschrieben aufgebaut. </li><li> Extra-Gewebe, einschließlich der Lunge, ist nun entfernt und das Herz für 20 Minuten perfundiert, um Wiederherstellung der Funktion zu ermöglichen und stabilisieren den Rhythmus. Während dieser Zeit ist eine sehr dünne Thermoelement Temperaturfühler (Cole-Parmer) in die linke Herzkammer Kavität eingebracht und vernäht mit 5-0 Prolene Naht (Ethicon). Die Sonde ist mit einer thermo-Regler (Digi-Sense) angeschlossen, um die Temperatur des Herzens zu gewährleisten ist bei 37 ° C durch eine Anpassung der Einstellungen des Wassers Kreislauf pumpen. Motion von Perfusat tropft von der Herzspitze ist, indem ein Stück Gaze in das Abwasser Behälter minimiert. </li></ol> Teil 3: Load Herz mit potentiometrischer Farbstoff und erwerben elektrografischen und optische Signale <ol><li> Di-8-ANEPPS (Invitrogen) ist in das Herz durch die Umstellung auf die Perfusion Zeile mit dem Krebs-Henseleit gemischt mit dem Fluoreszenzfarbstoff mit einem Hahn geladen. Darüber hinaus ist eine 18G Kanüle in der linken und / oder rechten Vorhof und zusätzlich 50 ml Farbstofflösung gelegt wird langsam in jeder dieser Kammern verabreicht, weil sie nicht ausreichend mit Farbstoff durch die Koronararterien eingeführt perfundiert. </li><li> Während des Ladevorgangs werden 3 EKG-Ableitungen (Harvard Apparatus) sanft auf der Oberfläche des Herzens, die nicht in die Richtung der Optik für die Projektion verwendet gelegt. Electrode N o 1 ist auf der hinteren apikalen Teil des linken Ventrikels, N o 2 auf dem linken Vorhof und N positioniert <su<html> p&gt; o 3 als Referenz-Elektrode auf der Aortenwurzel (Abbildung 1). Die atriale und ventrikuläre elektrografischen Signale werden anschließend verstärkt, digitalisiert und angezeigt neben optischen Signalen mit Hilfe der Software (Redshirt Imaging) (Abbildung 2). Ein Oszilloskop (Tektronix TDS Modell 1002) wird auch verwendet, um die Oberflächen-EKG s in Echtzeit zu visualisieren und zu angemessenen Tempo zu gewährleisten. </li><li> EKG-Verstärker (Hugo Sachs Elektronik) Einstellungen: High Pass Filter: 0,1 Hz Low Pass Filter: 150 Hz </li><li> Die CMOS-Kamera (Redshirt Imaging) und Makroskop positioniert ist mit der XYZ Anpassungen, so dass die Oberfläche des Herzens im Fokus ist und zentriert in der Akquisition Rahmen. Die Kamera und Optik sind auf einer Schwingungsisolierung Tabelle (Minus K Technology), um Resonanzfrequenzen zu minimieren montiert. Zur gleichen Zeit, einen koaxialen Stimulationselektrode (Harvard Apparatus) mit einem isolierten, S48 Elektro-Stimulation Einheit (Grass) kontrolliert wird, ist auf dem rechten Vorhof platziert und das Herz ist Tempo bei 300 Schlägen pro Minute (Abbildung 1). </li><li> Elektrische Stimulation (Grass) Einstellungen: Rate: 5 Impulse pro Sekunde Delay: 0,2 ms Dauer: 2 ms Volt: 6-12 V Modus: Wiederholen Pulse: Single </li><li> Für optische Aufnahmen, die Bewegungsartefakte Mangel von Kontraktion, muss das Herz elektromechanisch abgekoppelt werden. Wir tun dies, indem wieder Einschalten Perfusion Zeilen Krebs-Henseleit-Lösung, die 11 mmol / L BDM enthält. Zwischen Akquisitionen, ist das Herz mit unverfälschten Krebs-Henseleit perfundierten zur Erhaltung Lebensfähigkeit der Zubereitung. </li><li> Die Aufnahme-Parameter werden mit Hilfe der Software (Redshirt Imaging) mit folgenden Einstellungen Akquisition: Konfiguration: 2.000 Hz; 128x128 Pixel-Array Frame Interval: 0,5 ms Kamera Amplifier Gain: 5x On-Chip Gain: 8x-12Me-well Shutter: 500 ms Verzögerung Anzahl der Frames: 4000 Dauer: 2000 ms </li><li> Alle Zimmer und Ausstattung Lichter ausgeschaltet oder abgeschirmt, um Hintergrundgeräusche während der Aufnahme zu vermeiden. Die LED-Beleuchtung des Herzens nur bei der optischen Aufnahme auf Foto-Bleich-und Farbstoff Toxizität zu verringern. Die Lichtquelle Verschluss ist mit einem 5-V-Impuls über das Control Panel durch ein D-to-A Board in den Rechner (Redshirt Imaging) geliefert gesteuert. </li></ol> Teil 4: Analysieren Akquisition Informationen über Redshirt Imaging Software <ol><li> Nach dem Erwerb werden die Daten verarbeitet mit verschiedenen Filter-Einstellungen. Wir verwenden in der Regel die Standardeinstellungen außer bei der Einstellung der Band Stop / Pass-Filter, der mit der linken Grenze bei 44,0 und den rechten Rand auf 98,0 eingestellt ist. Danach werden die aufgenommenen Informationen verarbeitet und ein Film erzeugt wird (Redshirt Imaging). </li><li> Daten aus einer Akquisition entspricht der lokalen elektrischen Aktivierung bei 16.384 Seiten im Herzen Oberfläche über einen Zeitraum von 2 Sekunden. Die Software ermöglicht es, diese lokalen Signale direkt miteinander und mit der atrialen und ventrikulären elektrografischen Aufnahmen verglichen werden. Die Daten werden dann visualisiert Mapping lokalen elektrischen Aktivierung, um Farbe und Darstellung dieser Informationen als Animation zeigt die raumzeitliche elektrischen Aktivierung der kardialen Oberfläche. Zum Erstellen einer solchen Animation, verwenden wir die Software an: <ul><li> zeitlich und / oder räumlich die Daten filtern </li><li> wählen Sie eine Start-und Endzeit für die Animation </li><li> Karte optische Signale in Farbe auf ruhenden Lichtintensität der einzelnen Pixel auf </li><li> Overlay die resultierende Farbe von Daten mit einem Bild des Herzens </li><li> erzeugen die Animation </li></ul></li></ol> Teil 5: Repräsentative Ergebnisse Wenn der perfundierten Herzen Vorbereitung war unbeweglich während der Aufnahme, zeigen die optischen Signale eine gesonderte Spitze für jedes Pixel in einer Veränderung der Emissionsintensität von di-8-ANEPPS beteiligt. Die entsprechenden Filme (Abbildungen 3 und 4) zeigen eine Anregung Wellenfront ausbreitet über die epikardialen Oberfläche des Herzens sowie die gleichzeitig erworbene elektrografischen Aufnahmen (Abbildung 2). <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure3.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Ein Foto von einer Langendorff-perfundierten Herzen Vorbereitung der Darstellung der Positionen der Stimulationselektrode auf den rechten Vorhof und die EKG-Ableitungen, wie in Schritt 3.2 beschrieben. <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure4thumb.jpg" alt="Abbildung 2" border="0" /> Abbildung 2. Representative optische Signale und elektrografischen Aufnahmen von einer perfundierten Lewis Ratte Herzen. Panel A zeigt ein Bild der epikardialen Oberfläche für die optische Bildgebung verwendet. Die Position der Pixel ausgewählt, um die Veränderungen in der Fluoreszenz-Emission im Laufe der Zeit in Panel B zeigen, sind durch farbige Pfeile angedeutet. Elektrographische Signale werden in Panel C mit der roten Linie, die atriale Aktivierung und die hellblaue Linie entspricht der ventrikulären Signal angezeigt. Bitteve.com/files/ftp_upload/1138/Figure4.jpg &quot;&gt; Klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild zu sehen.

<ol>
	<li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+heart.">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).</li><li>Hucker, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Images+in+cardiovascular+medicine.+Optical+mapping+of+the+human+atrioventricular+junction.">Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction.</a> Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).</li><li>Entcheva, E., Bien, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macroscopic+optical+mapping+of+excitation+in+cardiac+cell+networks+with+ultra-high+spatiotemporal+resolution.">Macroscopic optical mapping of excitation in cardiac cell networks with ultra-high spatiotemporal resolution.</a> Prog Biophys Mol Biol. 92 (2), 232-257 (2006).</li><li>Entcheva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+electrical+activity+in+cardiac+cells+using+an+all-solid-state+system.">Fluorescence imaging of electrical activity in cardiac cells using an all-solid-state system.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51 (2), 333-341 (2004).</li><li>Stamm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endotoxin-induced+alterations+in+myocardial+calcium+handling:+obligatory+role+of+cardiac+TNF-alpha.">Rapid endotoxin-induced alterations in myocardial calcium handling: obligatory role of cardiac TNF-alpha.</a> Anesthesiology. 95 (6), 1396-1405 (2001).</li><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+conduction+through+engineered+tissue.">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).</li><li>Skrzypiec-Spring, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts.">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).</li></ol>

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her durch die Institutional Animal Care und Verwenden Ausschusses im Kinderkrankenhaus Boston gesetzt durchgeführt.

Die Entfernung des Herzens von narkotisierten Ratten müssen schnell durchgeführt werden, um Myokardischämie zu vermeiden. Wenn Ischämie oder unzureichender Koronarperfusion auftritt, wird das Herz wahrscheinlich entwickeln Arrhythmien und kann sich Infarkt. Darüber hinaus wird diese Herzen zeigen unzureichende Fluoreszenzemission für informative Aufnahmen und anschließende Analysen. Vor dem Einlegen der Farbstoff, müssen Herzmuskelzellen in angemessener Weise mit Krebs-Henseleit-Lösung perfundiert werden zur Sc...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CardioCMOS-SM128f</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CardioPlex Software</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LUXEON LED Light Source 460-490 nm </td>
<td>Equipment</td>
<td>Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA</td>
<td>LXHL-PB02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Amplifier Type 689 Hugo Sachs Elektronik</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>730149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dichroic Mirror 505 nm</td>
<td>Equipment</td>
<td>Semrock, Rochester, NY 14624 USA</td>
<td>FF505-SDi01-25x36</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Emission Filter 605 nm Long Pass</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>THT Sideways</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA</td>
<td>25 BM-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Ball Joint Holder</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0177</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small Stimulation Electrode Set</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0160</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BM-6 Benchtop Vibration Isolation Platform</td>
<td>Equipment</td>
<td>Technology Inc., Inglewood, CA 90301</td>
<td>25 BM-6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monopolar ECG Electrode</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump SCI 400</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>401U/D1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump MasterFlex Easy Load II</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>Model 77201-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing Marprene #14</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>902.0016.016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MasterFlex Tubing</td>
<td>Equipment</td>
<td>PharMed, Westlake, OH 44145 USA</td>
<td>06485-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S48 Square Pulse Stimulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model S48</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SIU5 RF TRANSFORMER ISOLATION UNIT</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model SIU5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.25 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA </td>
<td>120142-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml Heating Coil</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>158822</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Compliance Bubble Trap</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>130149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luer Disconnect Cannula</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>72-1444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-Way stopcock, FLL to MLT, No Port Covers</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 72-2630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermocouple Thermometer</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>WU-91100-40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Fine IT-Series Flexible Microprobe </td>
<td>Equipment</td>
<td>PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA</td>
<td>IT-24P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oscilloscope Tektronix TDS 1002</td>
<td>Equipment</td>
<td>Tektronix Inc., Beaverton, OR 97005 USA</td>
<td>TDS 1002B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione monoxime </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketamine HCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hospira Inc., Lake Forest, IL 60045 USA</td>
<td>RL-0065</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xylazine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Lloyd Inc., Iowa 51601 USA</td>
<td>LB15705A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E-TOXA-CLEAN&reg;</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA </td>
<td>E9029</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Di-8-ANEPPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen, Carlsbad, CA 92008 USA</td>
<td>D-3167</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

optical mapping of langendorff-perfused rat hearts

Optische Abbildung der Herz-Oberfläche mit Spannungs-Fluoreszenzfarbstoffe ist zu einem wichtigen Werkzeug, um elektrische Erregung in experimentellen Modellen zu untersuchen, die Reichweite in der Skala von Zellkulturen ganzen Organe<sup&gt; [1, 2]</sup&gt;. Mit State-of-the-art optische bildgebende Systeme, Entstehung und Ausbreitung der Aktionspotentiale während des normalen Herzrhythmus oder über Einleitung und Aufrechterhaltung von Herzrhythmusstörungen können visualisiert werden fast augenblicklich<sup&gt; [1]</sup&gt;. Die neuesten im Handel erhältlichen Systeme können Informationen auf außerordentlich hohe räumlich-zeitliche Auflösungen bieten und waren auf custom-built Geräte zunächst entwickelt wurde, um die Hindernisse um mehr konventionellen elektrophysiologischen Methoden verhängt überwinden<sup&gt; [1]</sup&gt;. Fortschritte in hoher Auflösung und High-Speed-komplementäre Metall-Oxid-Halbleiter (CMOS)-Kameras und intensiv helle, Licht emittierende Dioden (LEDs) sowie spannungsabhängigen Farbstoffen, Optik und Filter haben damit begonnen, elektrisches Signal Akquisition machen praktisch für Herz-Kreislauf-Zell-Biologen, die mehr daran gewöhnt, die Arbeit mit Mikroskopen sind. Obwohl die neueste Generation von CMOS-Kameras 10.000 Frames pro Sekunde auf einem 16.384 Pixel-Array, abhängig von der Art der Probenvorbereitung erwerben können, seit langem etablierten Fluoreszenz Erwerb Technologien wie Fotodioden-Arrays, Laser-Scanning-Systeme und gekühlten Charged-Coupled Device (CCD Kameras) noch einige deutliche Vorteile in Bezug auf Dynamik, Signal-Rausch-Verhältnis und Quanteneffizienz<sup&gt; [1, 3]</sup&gt;. In der vorliegenden Studie wurden Lewis Rattenherzen perfundierten<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mit einer kristalloiden Perfusat (Krebs-Henseleit-Lösung) bei 37 ° C auf einer modifizierten Langendorff-Apparatur. Nach einer 20 minütigen Stabilisierungsphase wurden die Herzen zeitweise mit 11 mmol / L 2,3-Butandion Monoxim perfundierten zur Kontraktion-assoziierte Bewegung während der Bildaufnahme zu beseitigen. Für die optische Abbildung, luden wir Herzen mit dem schnell ansprechenden potentiometrische Sonde di-8-ANEPPS<sup&gt; [4]</sup&gt; (5 mmol / L) und kurz beleuchtet die Vorbereitung mit 475 ± 15 nm Anregungslicht. Während eines typischen 2 Sekunden Dauer der Beleuchtung, war&gt; 605 nm Licht von der kardialen Vorbereitung emittiert mit einem High-Speed ​​CMOS-Kamera angeschlossen, um eine horizontale Makroskop abgebildet. Für diese Demonstration wurden Herzen schritt bei 300 Schlägen pro Minute mit einem koaxialen Elektrode verbunden, um eine isolierte elektrische Stimulation Einheit. Gleichzeitige bipolaren elektrografischen Aufnahmen wurden erworben und zusammen mit der Spannungssignale mit leicht verfügbaren Software analysiert. Auf diese Weise können Aktionspotentiale auf der Oberfläche von Langendorff-perfundierten Rattenherzen werden visualisiert und registriert mit elektrografischen Signale.

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Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

Dieser Artikel beschreibt ein hoher zeitlicher und räumlicher Auflösung Technik optisch Bild Aktionspotential Bewegung auf der Oberfläche von Langendorff-perfundierten Rattenherzen mit einem potentiometrischen Farbstoff (di-8-ANEPPS).

Optische Abbildung von Langendorff-perfundierten Rattenherzen

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

optical-mapping-of-langendorff-perfused-rat-hearts

Research

JoVE Journal

Biology

20.6K Aufrufe.  Children's Hospital Boston and Harvard Medical School. Dieser Artikel beschreibt ein hoher zeitlicher und räumlicher Auflösung Technik optisch Bild Aktionspotential Bewegung auf der Oberfläche von Langendorff-perfundierten Rattenherzen mit einem potentiometrischen Farbstoff (di-8-ANEPPS).