Yazar Dr. Jin PGS sentezi, biyoreaktör kurulum Dr anlayışlı tartışma için Dr. Peter Crapo Gao teşekkürler. Muhammed Ezzelarab ve babun karotis arterler explanting Wu Wei. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01 HL089658) bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Boru İskele malzeme üretim <ol><li> Iskele için bir kalıp olarak, cam tüp (Küçük Parçalar, Miramar, FL uzunluğu = 70 mm, dış çapı = 9.0 mm, duvar kalınlığı = 1.0 mm) hazırlayın </li><li> HA 100 mg 10 ml deiyonize su içine eriterek 1,0 wt / vol% hyaluronik asit (HA) (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) hazırlayın. Çözelti içinde hiç hava kabarcığı kalmamasına kadar bir gecede rotator kullanarak karıştırın. </li><li> % 1,0 HA çözeltisi cam boru üst içine dökün. Kalıp iç duvar boyunca yavaş yavaş akmasına izin verin. Çözüm rotator kullanarak kalıp alt ulaştığında tüp ters çevirin ve kalıp iç duvarına çözüm eşit kaplıdır kadar bu adımı tekrarlayın. </li><li> Kaplama tamamlandıktan sonra, 24 saat tüm cam borulama kuru vakum fırını 37 ° C </li><li> Grind ve elek tuz partikülleri (boyutu = 25-32 mikron) porogens olarak kullanılır. </li><li> (% 1.0 HA çözüm içinde ile kaplı) bir cam boru, mandrel (PTFE tüp paslanmaz çelik ile kaplı), ısı shrinkable (HS) kol ve PTFE halkası olarak daha önce 8 açıklanan birleştirin. </li><li> Cam kalıp, silikon kauçuk huni ile bir spatula ile istenilen büyüklükte tuz parçacıkları ekleyin. Tuz partikülleri bile dağılımını sağlamak için kalıp hafifçe dokunun. Yan spatula kullanarak kalıp üst kısmında aşırı tuz partikülleri kazıyın. </li><li> Melezleşme inkübatör tuz dolu kalıp aktarmadan önce 30 dakika çevirin. Melezleşme inkübatör kapatın ve tuz füzyon için melezleşme inkübatör içine tuz dolu kalıp koyun. </li><li> Melezleşme inkübatör kalıpları çıkarın ve 37 elektrikli fırın içine kuru ° C 24 saat </li><li> Tuz dolu kalıpları, vakum fırın çıkartın ve oda sıcaklığında soğumasını bekleyin. Paslanmaz çelik mandrel PTFE halka tutarak aşağı doğru iterek çıkarın. Mandrel kalıp çok sıkı ise, onu dışarı çekmek için iğne pense kullanın. PTFE halka kalıp alttan çıkarın. </li><li> 120 ° C &#39;de 5 dakika süreyle HS kol küçültmek için kalıpları fırına koyun. HS kol daralmış olup olmadığını kontrol edin. HS kol tuz dolu kalıplar çıkartın ve oda sıcaklığında soğumasını bekleyin. Desikatöre kalıpları kullanılır kadar tutun. </li><li> 20 wt / vol% çözüm oluşturmak için 15 ml tetrahidrofuran (THF) (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) içine PGS 3 g eriterek PGS çözüm hazırlayın. </li><li> Hume kaputu spoid kullanarak bırakarak tuz dolu kalıp lümen PGS çözüm ekleyin. 45 ° cam kalıp Yalın ve yavaş yavaş kalıp dönen iç lümenine PGS damla. PGS çözüm kalıp duvar boyunca aşağı doğru akar olmadığını kontrol edin. Kuru yerinde görülürse, daha fazla çözüm ekleyin. </li><li> PGS çözüm ekledikten sonra, THF buharlaşan için en az 30 dakika Hume kaput kalıplara yerleştirin. </li><li> MTorr 100 ve 150 ° C kür PGS için, önceden belirlenmiş kuruma süresi boyunca vakum fırın (örneğin 24 / 36 / 48 saat) kalıplar koyun. </li><li> Kür sonra, kalıplar çıkarın ve oda sıcaklığında soğuması için koyun. Her kalıp dikey pozisyonda yavaş deiyonize suya batırın. Hızlı suyun içine hava kabarcıkları iskele gözyaşı neden olabilir, çünkü onları dalış yapmayın. </li><li> Su banyosu dikkatle kalıpları transferi ve HA kolayca çözmek için silikon tüp kullanarak 1 saat süreyle bir açıyla yerleştirin. HA kalıp çözülmüş olup olmadığını kontrol edin. HA kalıp bırakılırsa, yavaş yavaş spatula ile kalıp çıkarmak için iskele bir ucunu itin. Iskelenin diğer ucunda bu adımı tekrarlayın ve su banyosu içinde yavaş yavaş, ileri geri kalıp sallayın. Iskele kalıp içinde hareket olup olmadığını kontrol edin. </li><li> Karıştırıcı ile dikkatli bir şekilde başka bir su banyosu iskele aktarın. Iskele çatlak olabilir sıkıca iskele, almayın. Tuz partikülleri çözerek yemeğe karışmasına su ile en az 3 gün boyunca su banyosu iskele yerleştirin. </li><li> Tuz partikülleri liç sonra deiyonize su ile doldurulmuş 15 ml santrifüj tüpüne her iskele transferi ve dondurmak için 1 saat süreyle kuru buz kutusuna koyun. Santrifüj tüplerine lyophilizer (tüp kabinler açılmalıdır) içine koyun ve 2 gün boyunca onları lyophilize. </li><li> Desikatöre kadar önce bütün iskeleleri koyun. </li></ol> 2. Hücre Yayımlama İskele hazırlanması <ol><li> Desikatöre iskeleleri dışarı atın ve uzunluğu 25-30mm olarak bunları kesmek. </li><li> Iki silikon kauçuk tıpa (çapı = 20 mm, duvar kalınlığı = 6,35 mm, orta delik çapı = 3 mm) hazırlayın ve iki PTFE borulama (dış çapı = 3,97 mm, iç çapı bağlamak = 2.38 mm, duvar kalınlığı = 0,79 mm, uzunluğu = her stoper, orta deliklerden 60 mm ve 40 mm). </li><li> HS halka uzunluğu 1.5 mm olarak kesin ve bir ucunu iskele üstüne koymak. Mümkün olduğunca küçük bir örtüşen kısmı olarak iskele bir ucunu bir PTFE tüp (silikon lastik tıpa bağlı) itin. </li><li> 120 ° C &#39;de 10 dakika süreyle HS halka küçültmek için iskele ve PTFE tüp fırına koyun. HS halka küçüldüğünü ve iskeleleri PTFE tüp sıkıca bağlı olmadığını kontrol edin. </li><li> Iskele ve PTFE tüp dışarı atın ve oda sıcaklığında soğuması için koyun. Iskele-PTFE boru montaj polikarbonat tüp (dış çapı = 15.5 mm, iç çapı = 9 mm, uzunluğu = 50 mm) biyoreaktör odası olarak içine koyun. </li><li> Adımları 2.3) ve 2.4) olarak iskele PTFE boru başka bir ucunu. </li><li> Kendi iç yüzeylerinde polikarbonat tüp her iki ucuna takmak için iki silikon kauçuk tıpa ayarlayın. (Genişlik = 20 mm, uzunluk = 70 mm, kalınlığı = 6,35 mm alt ve üst) iki adet alüminyum alaşımlı plakalar hem de dış yüzeylerinde silikon kauçuk tıpa takın. Plaka yan deliğe iki dişli çubuklar koyun ve plaka üzerinde parmak somun vida sıkma plakaları polikarbonat tüp (İskele içinde bulunan) düzeltmek. </li><li> Seedable her iskele uzunluğu (iki HS halkaları arasında bir uzunluk) ölçün ve hücre tohumlama için her iskele iç yüzey alanı (π x iç çap x seedable uzunluğu) hesaplamak. </li><li> Wrap bir biyoreaktör odasına alüminyum folyo ile birim ve 120 ° C&#39;de 30 dakika otoklav ile sterilize edin. Biyoreaktör her bir parçası (orta rezervuar, pompa boru, gaz değiştiriciler, manifoldlar ve iğne vana) 120 ° C&#39;de 30 dakika otoklavlanarak sterilize ve hücre kültürü kaputu içinde bir araya. </li><li> Ön tedavi ve iskeleler bir perfüzyonları serisi (70, 50, ve% 25 etanol, 1 saat boyunca tuzlu su (PBS fosfat tamponlu ile yıkayın; kullanarak 24 saat Mediatech, Herndon, VA) 2 saat ve SMC kültür ortamı 1.0 ml / dak akım devresi peristaltik bir pompa. </li></ol> 3. Hücre Yayımlama ve Kültür <ol><li> Juvenil erkek Habeş maymunları (Papio Anubis) karotid arterlerin primer arteriyel düz kas hücreleri (SMC&#39;lere) izole etmek ve Pasajlanması ve daha önce 9 açıklandığı gibi ekim öncesi iki boyutlu (2D) kültüründe onları karakterize. </li><li> Expand MCDB 131 orta (Mediatech, Herndon, VA) kullanarak% 10 fetal sığır serumu (Lonza, Walkersville, MD),% 1 L-glutamin (Mediatech), 50 mg / ml askorbik asit (Fisher Scientific, Fair Lawn, SMC&#39;lere NJ) ve antibiyotik (10.000 IU / ml penisilin, 10.000 mg / ml streptomisin ve 25 mg / ml amfoterisin B; Mediatech) antimikotik çözüm. </li><li> Biyoreaktör akım devresi her biyoreaktör odasına çıkarın. 5 ml şırınga ile süspansiyon (giriş) abluminal ve luminal (çıkış) akışlarını keserek sonra iskele lümen içine enjekte edilerek, 2x10 6 hücre / cm 2 yoğunluğu ile iskele Tohum SMC&#39;lere (geçit 4-6) . </li><li> 37 ° C&#39;de tüm biyoreaktör odaları melezleşme inkübatör içine koyun ve hücrelerin düzgün iskele yaymak için izin 4 saat için 2 rpm onları döndürmek. </li><li> Biyoreaktör odaları Kaputun biyoreaktör devre akışı melezleşme inkübatör iliştirmeniz onları çıkarın. Tüm biyoreaktör sistemi hücre kültürü kuvöz içine aktarın. </li><li> Kıkırdak peristaltik pompa, pompa hortumu (iç çapı = 1.6 mm) bağlayın ve rezervuar taze kültür orta yük. 1.0 ml / dk, sadece luminal akışını takip 15 dakika boyunca duvar perfüzyon (abluminal için luminal) başlayın. </li><li> 1 - 14.2 ml / dk (15.3 dynes / cm 2) ve 21. günde 120 mmHg ve 20 mmHg günü: 1.0 ml / dk (1.1 dynes / cm 2 luminal kayma gerilmesi) yavaş yavaş akış hızı ve basınç artırın. Günde 4 pompa boru (iç çapı = 3.2 mm) ve orta haftada bir değiştirin. </li></ol> 4. Doku Hasat ve Analizi için Numune Hazırlama <ol><li> 21-günlük kültür sonra, orta rezervuar pompa ve kelepçe borulama (giriş ve çıkış) dur. Kaput içine peristaltik pompa ve transfer biyoreaktör sistemi kıkırdak pompası hortumu çıkarın. </li><li> Kelepçe her biyoreaktör odasının giriş ve çıkış borulama ve akışı döngü ayırmak. Giriş boru açın ve çıkış boru polikarbonat tüp içinde kültür ortamı toplamak için bir Petri yemek hazırlamak. Yavaş yavaş çıkış boru açın ve odanın orta çıkarmak. </li><li> Odasından abluminal iğne ve luminal silikon tüp ayırın ve parmak vidalar serbest alüminyum plakalar ayırmak. Polikarbonat tüp çıkarın ve PTFE tüp inşa doku bir ucunu ayırın. </li><li> 10 ml PBS ile dolu bir petri yemek hazırlayın ve PTFE tüp yapı diğer ucunu ayırın. PBS içine inşa etmek ve üç defa çalkalayın koyun. </li><li> 5 mm uzunluk olarak bir tıraş bıçağı ile inşa kesin. Biyokimyasal tayini için -80 ° C derin dondurucuda dondurun veya 5 ml taze orta Doku-Tek optimum kesim sıcaklık bileşik (Sakura Finetek A.Ş., Torrance, CA içine mekanik test veya ek bileşeni dondurma dolu 15 ml santrifüj tüpüne transfer histoloji / immunoflu) içinorescence boyama. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar: Tübüler PGS iskeleler, tuz füzyon yöntemi (Şekil 1A) tarafından biyolojik olarak parçalanabilen elastomer kullanılarak imal edildi. Her biyoreaktör odası, luminal ve abluminal akışları ile iskeleler ve bir ana akım döngü (Şekil 1B) ayrı bir birim olarak ayrılmış olabilir. Biyoreaktör sistemi kontrol ve izleme akışının yanı sıra basıncı (Şekil 1C ve D) bir anda kültür dört iskeleler için tasarlanmıştır. Şekil biyoreaktör kültürü şematik gösterildi. 2. SMC&#39;lere tohumlama sonra, her biyoreaktör odasında 37 ° döndürülebilir ° C hücreleri iskele lümen eşit dağıtmak için 4 saat. Ve sonra, pulsatil akış debisi giderek artmaktadır (Şekil 2A) ve basınç (Şekil 2B) ile 14 gün kadar iskeleleri uygulandı. 14 gün sonra, kültür sonuna kadar (21 gün) akış ve basınç sabit tutulur. PGS iskele yüzey morfolojisi taramalı elektron mikroskobu (SEM) tarafından incelenmiştir. Taramalı elektron mikrograflar iskele tutarlı duvar (539 ± 18 mikron) kalınlıkları olduğunu gösterdi (Şekil 3A) ve rastgele luminal yüzeyi (Şekil 3B) makro ve mikro gözenekler dağıtıldı. Microcomputed tomografi (mikro-CT) ve görüntüleme analizi iskele morfometrik parametreleri ölçüldü. Ortalama gözenek boyutu 23.3 ± 3.9 mikron ve gözenek birleştiricisi 99.4 ± 0.62%, tüm gözenekler tamamen iskele birbirine bağlı olduğu anlamına gelir. Etanol deplasman tarafından ölçülen Gözeneklilik% 75.6 ± 2.7. PGS inşa hücresel morfoloji, SEM tarafından muayene edilmiştir (Şekil 4) . Çok katmanlı SMC&#39;lere luminal yüzeyi tamamen kaplanmış ve akış yönüne dik odaklı. Bu sonuçlar, pulsatil akış biyoreaktör mekanik havalandırma iskele SMC yönünü destekler göstermektedir. Ekstrasellüler matriks (ECM) ve elastik liflerin varlığı, H &amp; E boyama ve elastin otofloresans (Şekil 5) ile incelendi. H &amp; E boyama hücreleri ve ECM proteinleri tamamen inşa PGS lümen kaplı olduğunu göstermiştir. Elastin otofloresans yapı luminal yüzeyi dairesel organize elastik liflerin de gösterdi. PGS yapıları ECM proteinleri Üretim biyokimyasal analizlerle ölçüldü. Çözünmez elastin ve kollajen içeriği, 20.2 ± 9.1 mg / mg doku ve 6.3 ± 1.9 mcg / mg doku, sırasıyla idi. <img src="/files/ftp_upload/2691/2691fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1 İskele imalat ve biyoreaktör sistemi. (A) tübüler iskele imalat şematik. (B) Biyoreaktör odasına. Iskeleler, PTFE tüp polikarbonat tüp yerleştirilir ve silikon kauçuk tıpa ve alüminyum alaşımlı plakalar tarafından tespit edildi. Luminal (silikon tüp) ve abluminal (iğne) akımları: Her odasına iki akış yolları vardır. (C) Biyoreaktör sistemi kuvöz içine yerleştirilir. Orta rezervuar, peristaltik pompa modülü, gaz değiştirici, basınç dönüştürücüler, iki manifoldu (üst ve alt), ve iğne valf içerir. (D) Biyoreaktör sistemi inkübatör dışına yerleştirilmiş. Basınç sensörü, akış kontrol ünitesi, veri toplama sistemi ve bilgisayar içerir. <img src="/files/ftp_upload/2691/2691fig2.jpg" alt="Şekil 2"/> Şekil 2 biyoreaktör kültürü şematik. (A) Kültür protokolü. (B) her zaman noktası (Gün 1, 4, 7, ve 14) basınç profilleri Uygulamalı. <img src="/files/ftp_upload/2691/2691fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3 PGS iskele yüzey morfolojisi. (A) Kesit. (B) Lümen. <img src="/files/ftp_upload/2691/2691fig4.jpg" alt="Şekil 4"/> Şekil 4 PGS hücresel morfoloji inşa. (A) Lümen. (B) 45 ° kesme kesiti. Iki figür oklar akış yönünü temsil eder. <img src="/files/ftp_upload/2691/2691fig5.jpg" alt="Şekil 5"/> Şekil 5 Histoloji ve elastin otofloresans PGS inşa. (A) H &amp; E boyama. (B) Sorumlu elastin otofloresans. L: lümen. Büyütme: 40X. Ölçek çubuğu: 50 mm.

<ol>
	<li>The American Heart Association Statistics Committee Stroke Statistics Subcommittee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Heart+Association:+Heart+disease+and+stroke+statistics-2009+update.">American Heart Association: Heart disease and stroke statistics-2009 update.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li><li>Isenberg, B. C., Williams, C., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-diameter+artificial+arteries+engineered+in+vitro.">Small-diameter artificial arteries engineered in vitro.</a> Circ Res. 98, 25-35 (2006).</li><li>Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ideal+small+arterial+substitute:+a+search+for+the+Holy+Grail.">The ideal small arterial substitute: a search for the Holy Grail.</a> FASEB J. 12, 43-45 (1998).</li><li>Wang, X., Lin, P., Yao, Q., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+small-diameter+vascular+grafts.">Development of small-diameter vascular grafts.</a> World J Surg. 31, 682-689 (2007).</li><li>L'Heureux, N., Paquet, S., Labbe, R., Germain, L., Auger, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+completely+biological+tissue-engineered+human+blood+vessel.">A completely biological tissue-engineered human blood vessel.</a> FASEB J. 12, 47-56 (1998).</li><li>Niklason, L. E., Gao, J., Abbott, W. M., Hirschi, K. K., Houser, S., Marini, R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+arteries+grown+in+vitro.">Functional arteries grown in vitro.</a> Science. 284, 489-493 (1999).</li><li>Wang, Y., Ameer, G. A., Sheppard, B. J., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tough+biodegradable+elastomer.">A tough biodegradable elastomer.</a> Nat Biotechnol. 20, 602-606 (2002).</li><li>Crapo, P. M., Gao, J., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seamless+tubular+poly(glycerol+sebacate)+scaffolds:+high-yield+fabrication+and+potential+applications.">Seamless tubular poly(glycerol sebacate) scaffolds: high-yield fabrication and potential applications.</a> J Biomed Mater Res A. 86, 354-363 (2008).</li><li>Gao, J., Ensley, A. E., Nerem, R. M., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(glycerol+sebacate)+supports+the+proliferation+and+phenotypic+protein+expression+of+primary+baboon+vascular+cells.">Poly(glycerol sebacate) supports the proliferation and phenotypic protein expression of primary baboon vascular cells.</a> J Biomed Mater Res A. 83, 1070-1075 (2007).</li><li>Murphy, W. L., Dennis, R. G., Kileny, J. L., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salt+fusion:+an+approach+to+improve+pore+interconnectivity+within+tissue+engineering+scaffolds.">Salt fusion: an approach to improve pore interconnectivity within tissue engineering scaffolds.</a> Tissue Eng. 8, 43-52 (2002).</li><li>Gao, J., Crapo, P. M., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macroporous+elastomeric+scaffolds+with+extensive+micropores+for+soft+tissue+engineering.">Macroporous elastomeric scaffolds with extensive micropores for soft tissue engineering.</a> Tissue Eng. 12, 917-925 (2006).</li><li>Wilson, E., Mai, Q., Sudhir, K., Weiss, R. H., Ives, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+induces+growth+of+vascular+smooth+muscle+cells+via+autocrine+action+of+PDGF.">Mechanical strain induces growth of vascular smooth muscle cells via autocrine action of PDGF.</a> J Cell Biol. 123, 741-747 (1993).</li><li>Leung, D. Y., Glagov, S., Mathews, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+stretching+stimulates+synthesis+of+matrix+components+by+arterial+smooth+muscle+cells+in+vitro.">Cyclic stretching stimulates synthesis of matrix components by arterial smooth muscle cells in vitro.</a> Science. 191, 475-477 (1976).</li><li>Kim, B. S., Nikolovski, J., Bonadio, J., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+mechanical+strain+regulates+the+development+of+engineered+smooth+muscle+tissue.">Cyclic mechanical strain regulates the development of engineered smooth muscle tissue.</a> Nat Biotechnol. 17, 979-983 (1999).</li><li>Yang, J., Motlagh, D., Webb, A. R., Ameer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+biphasic+elastomeric+scaffold+for+small-diameter+blood+vessel+tissue+engineering.">Novel biphasic elastomeric scaffold for small-diameter blood vessel tissue engineering.</a> Tissue Eng. 11, 1876-1886 (2005).</li><li>Stankus, J. J., Soletti, L., Fujimoto, K., Hong, Y., Vorp, D. A., Wagner, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+cell+microintegrated+blood+vessel+constructs+through+electrohydrodynamic+atomization.">Fabrication of cell microintegrated blood vessel constructs through electrohydrodynamic atomization.</a> Biomaterials. 28, 2738-2746 (2007).</li><li>Nieponice, A., Soletti, L., Guan, J., Deasy, B. M., Huard, J., Wagner, W. R., Vorp, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+tissue-engineered+vascular+graft+combining+a+biodegradable+scaffold,+muscle-derived+stem+cells+and+a+rotational+vacuum+seeding+technique.">Development of a tissue-engineered vascular graft combining a biodegradable scaffold, muscle-derived stem cells and a rotational vacuum seeding technique.</a> Biomaterials. 29, 825-833 (2008).</li></ol>

Burada tanımlanan biyolojik olarak parçalanabilen elastomer kullanarak üretim tekniği, çeşitli özelliklere sahiptir. (1) bir kalıp ayırıcı olarak kullanılan hyaluronik asit (HA). HA suda çözünür olduğundan, iskele kolaylıkla suya iliklerine sonra cam kalıp serbest bırakıldı. Bu raporda, 1,0 wt / vol% HA çözüm çözüm konsantrasyonu düşük (&lt;0,5% ağırlık / hacim) viskoz değildir ve biz cam boru üstüne dökme işlemi sırasında aşağı çok hızlı akar çünkü kullandı. Çözüm, alt boru aşağı uçtu ve bu adımı tekrarlayan kat HA çözüm için eşit, cam tüp devrildiğinde. Bu HA kaplama, son iskeleleri serbest bırakılması için bizim imalat prosedürü kritik bir. (2) ısı shrinkable (HS) kol cam tüp tuzları elde etmek için kullanılır. Tuzları yoğun cam tüp ve HS kol iç duvar arasındaki boşluk dolu olduğundan, HS, kol, boru alt mandrel ve PTFE halka çıkardıktan sonra tuzları korudu. Biz HS kol kalıp 120 ° C &#39;de 5 dakika süreyle bir fırına koyarak kolayca kaldırmak ve daha sonra tübüler tuz şablonları olsun. (3) tuz füzyon yöntemi kullanılır. Çok iyi tuz füzyon yöntemi füzyon zaman 10 değişik gözenek birleştiricisi ve mekanik özelliklerini geliştirmek olduğu bilinmektedir. PGS kullanılan mikro gözenekler büyük olasılıkla gliserol buharı tarafından oluşturulan, biz daha önce 11 açıklandığı gibi kür PGS sırasında oluşan iken Ayrıca, makro gözenekler, liç işlemi sırasında tuz parçacıklar tarafından üretildi. Böylece, bu yöntem, değişen durum kür PGS tuz partikülleri yanı sıra, farklı makro ve mikro yapıları ile gözenekli tübüler iskeleleri imal etmek için bir potansiyele sahiptir. Biyoreaktör mekanik klima pulsatil akım perfüzyon (maksimum akım ortalama = 14 ml / dak, maksimum kayma gerilmesi = 15.3 dyn / cm 2, frekans = 0,5 - 1,7 Hz) ve fizyolojik yol açan PGS iskele ile ilgili basınç SMC büyüme ve oryantasyon (Şekil 4). Bu sonuçlar, önceki çalışmalarda, bu frekans o döngüsel streç raporlama ve kayma gerilmesi SMC proliferasyonunu 12, ve ECM protein üretimini 13,14 artırır ile tutarlıdır. PGS SMC büyüme ve yönlendirmeye ek olarak, özellikle dairesel biyoreaktör, 3 hafta kültürü içinde elastik liflerin (Şekil 5) düzenlenen, ECM protein üretimini desteklenen inşa . Elastik liflerin bu yapıları ise küçük çaplı arter yapı olarak bir elastomerik iskele kullanan bazı çalışmalar, mekanik dayanım ve ana arterlerde 15 ve bükme balon 16,17 uyumlu iskeleleri kullanarak hızlı SMC entegrasyon ile karşılaştırılabilir patlama basıncı göstermiştir. Bizim sonuçlarımız biyoreaktör o döngüsel radyal distansiyon PGS iskele, muhtemelen elastin sentezi ve organizasyon katkıda SMC&#39;lere daha etkin bir şekilde geliştirilmiş mekanik sinyal iletimi öneririz. Vasküler SMC&#39;lere, bizim yaklaşımımız, sükunet endotel ECM proteinleri üretilen ve klinik başarılı küçük çaplı arter yapıları geliştirmek için gerekli olan mekanik gücünü artırmak sadece hücreleri olduğundan. Endotel hücreleri, kültür koşulları ve mekanik havalandırma 9 altında bir konfluent tek tabaka ve desteklenen fenotip protein ekspresyonu üretilen SMC&#39;lere ile birlikte kültürlü bildirdin . Bu nedenle, bizim yaklaşımımız dayalı ko-kültür deney koşullarının değiştirilmesi çıkan yapıları fonksiyonlarını geliştirmek ve nonthrombogenic, sağlam oluşturmak için bir sonraki adım olacaktır, burada açıklanan ve uyumlu arter ana arterlere benzer bir yapı.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Hyaluronik asit sodyum tuzu </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H7630 </td></tr><tr><td> Tetrahidrofuran </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 401757 </td></tr><tr><td> MCDB 131 </td><td> Mediatech </td><td> 15-100-CV </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> Lonza </td><td> BW14-502F </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-CV </td></tr><tr><td> Askorbik asit </td><td> Fisher Scientific </td><td> A62-500 </td></tr><tr><td> Antibiyotik antimikotik çözüm </td><td> Mediatech </td><td> 30-004-CI </td></tr><tr><td> Fosfat Tamponlu Salin (PBS) </td><td> Mediatech </td><td> 21-031-CV </td></tr><tr><td> Doku-Tek optimum kesim sıcaklık bileşik, 4583 </td><td> Sakura Finetek </td><td> 25608-930 </td></tr></tbody></table>

elastomeric pgs scaffolds in arterial tissue engineering

Kardiyovasküler hastalıklar ABD&#39;de ölüm önde gelen nedenidir ve özellikle koroner arter hastalığı yaşlanan bir nüfus ve artan obezite 1 artar. Şu anda, otolog gemileri, allogreftler ve yaygın 2 arter yerine kullanılan olarak bilinen sentetik greft ile bypass cerrahisi. Ancak, bu greftler arterlerin iç çapı 6 mm daha düşük kullanılabilirlik, trombotik komplikasyonlar, uygunluk uyumsuzluğu, ve geç intimal hiperplazi 3,4 nedeniyle az sınırlı uygulamalar var. Bu sınırlamaları aşmak için, doku mühendisliği nonthrombogenic, sağlam ve uyumlu küçük çaplı arter yapıları geliştirmek için umut verici bir alternatif olarak başarıyla uygulanmaktadır. Birkaç önceki çalışmalarda, üç tabakalı yapı, mükemmel mekanik özellikleri ve ana arterleri 5,6 ile karşılaştırılabilir patlama basıncı ile küçük çaplı arter yapıları geliştirmiştir . Yüksek çekme dayanımı ve sert bir malzeme veya hücre sac iskele kolajen üretimini artırarak patlama basıncı, bu yapıları hala önemli bir sorundur implantasyon sonrası greft yetmezliğine neden düşük elastin üretimini ve uyum vardı. Bu konular göz önüne alındığında, mekanik havalandırma ile birlikte bir elastometrik biyomateryal esnekliğini sağlamak ve ekstraselüler matriks üretimini artırmak ve hücresel yönlendirme desteği damar hücreleri, mekanik sinyalleri yapmak daha verimli olacağı hipotezi. Bu raporun amacı, gözenekli borulu iskeleler bir imalat tekniği ve onları arteriyel doku mühendisliği uygulamak için dinamik bir mekanik havalandırma tanıtmak. Biz tuz füzyon yöntemi gözenekli tübüler iskeleleri imalatı, poli (gliserol sebacate) (PGS) 7 biyolojik olarak parçalanabilen bir elastomer kullanılır. Yetişkin birincil babun düz kas hücreleri (SMC&#39;lere), iskeleler, 3 hafta için tasarlanmış pulsatil akış biyoreaktör kültüre lümen numaralı seribaşı. PGS iskeleleri tutarlı kalınlık ve rastgele dağıtılan makro ve mikro gözenekleri. Pulsatil akış biyoreaktör Mekanik Klima SMC yönelim ve iskeleler gelişmiş ECM üretim desteklenir. Bu sonuçlar, elastomerik iskeleleri ve biyoreaktör kültürü mekanik havalandırma arter doku mühendisliği için umut verici bir yöntem olabileceğini düşündürmektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Elastomeric PGS Scaffolds in Arterial Tissue Engineering at JoVE.com

Elastomeric PGS Scaffolds in Arterial Tissue Engineering

Pulsatil akış biyoreaktör kültürü damar düz kas hücreleri ile Elastomerik PGS iskeleler, görece kısa bir kültür dönemde, yerli ECM üretim ile gelecek vaat eden küçük çaplı arter yapıları neden olabilir.

Elastomerik PGS Arter Doku Mühendisliği Yapı iskeleleri

Cardiovascular disease is one of the leading cause of mortality in the US and especially, coronary artery disease increases with an aging population and ...

elastomeric-pgs-scaffolds-in-arterial-tissue-engineering

Research

JoVE Journal

Bioengineering

15.4K Görüntüleme.  University of Pittsburgh. Pulsatil akış biyoreaktör kültürü damar düz kas hücreleri ile Elastomerik PGS iskeleler, görece kısa bir kültür dönemde, yerli ECM üretim ile gelecek vaat eden küçük çaplı arter yapıları neden olabilir.