1. Endoparasite 시험 (표 1) 1. 음부 테이프 테스트 (또한 섹션 5를 참조하십시오, 이들은 보통 동시에 수행됩니다) <ol><li> 디스펜서에서 맑은 길이 아니 프로스트, 셀로판 테이프를 제거합니다. 테이프의 중간 (약 5cm)을 만지하지 않고 한쪽으로 충분히 처리할 수 있어야합니다. 그것은 깨끗한 작업 표면의 가장자리에 부착하고 필요에 따라 사용하여 한 번에 여러 개의 길이를 분배하는 것이 더 쉽습 수 있습니다. </li><li> 꼬리하여 잡고 케이지 뚜껑에 미치는 케이지 장소에서 마우스를 들어 봐요. 층류 흐름 캐비닛이나 동물의 건강 상태가 그것을 요​​구하는 경우 biosafety 캐비닛에서이 작업을 수행합니다. </li><li> 케이지에서 뒷다리 리프팅, 꼬리로 마우스를 구속. 엄지와 집게손가락 사이에 테이프의 끝 부분을 파악 후 음부 지역 여러 번 포함 단단히 마우스의 회음부에 테이프의 가운데를 적용합니다. 머리를 성공적으로 고려하는 분석을위한 테이프에 자기편으로 볼 수 있습니다. </li><li> 새장에 마우스를 다시 넣으십시오. </li><li> 표시 깨끗한 유리 슬라이드에 미네랄 오일 한 방울을 플레이스, 미네랄 오일의 다른 드롭 다음, 슬라이드에 테이프를 적용해야합니다. 유리 커버 전표로 커버. </li><li> 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. 다른 기생충 알이 발견 가끔 있지만 음부 테이프 시험은, Syphacia의 계란을 검출에 가장 적합합니다. </li></ol> 2. 방패 선법 <ol><li> 부양 솔루션 평면 바닥 유리병 (예 : Ovatector 같은 알약의 약병이나 배설물 부양 장치), 페트리 접시, 커버 슬립, 현미경 슬라이드 및 작은 주걱 / 감동 빨대를 조립. 같은 Fecasol 같은 부양 솔루션, 1.20-1.30의 비중이 있어야하고 다양한 나트륨 소금, 설탕, 황산 아연, 또는 상업적으로 구입에서 만들 수 있습니다. (표 2) </li><li> 부양 챔버에 2-5 배설물은 새장에서 알약이나 동물 (S)에서 신선한를 수집합니다. 배설물은 0.9 %의 식염수 500 μl로 대변을 moistening 매우 건조 중 연령이나 대변을 생산 수종에 의한 경우에는 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 녹아 대소변의 오버플로에서 작업 표면을 보호하기 위해 배양 접시에있는 병을를 놓습니다. 부양 매체와 매시의 작은 볼륨을 추가하고 철저 저어. 자료 없음 대형 조각 남아해서는 안됩니다. 유리병의 가장자리 위에 초승달 모양의 형태까지 부양 미디어를 추가로 진행합니다. </li><li> 초승달 모양에 커버 슬립을 놓고 15 분 동안 상온에서 알을 품다. 기생충 알 및 일부 protozoan의 oocysts은 정상에 오르는 및 커버 슬립을 준수합니다. </li><li> 부화 후, 리프트와 커버 슬립을 반전. 유리 현미경 슬라이드에 커버 슬립을 놓습니다. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li><li> 낮은 기술하고 쉬운가 일반적으로 수행하지만,이 기술은 마우스 또는 쥐 권장하지 않습니다. 원칙적으로, 그것은 대소변의 큰 볼륨을 생산 동물에 대한 더 적합합니다. </li></ol> 3. 방패 농도 및 원심 분리 <ol><li> 부양 솔루션, 원심 분리기 튜브, 커버 슬립, 현미경 슬라이드 및 작은 주걱 / 교반 막대기 및 관 뚜껑을 조립. 부양 솔루션은 1.18-1.30의 비중이 있어야하고 다양한 나트륨 소금, 설탕, 황산 아연, 또는 상업적으로 구입에서 만들 수 있습니다. (표 2) </li><li> 컬렉션 튜브에 20-10 배설물은 새장에서 알약이나 동물 (S)에서 신선한를 수집합니다. 배설물은 식염 0.9 % 500 μl 또는 부양 솔루션의 대소변을 moistening 매우 건조 중 연령이나 대변을 생산 수종에 의한 경우 사용하는가 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 유리 원심 분리기 튜브 내에 적절한 부양 용액에 샘플을 섞는다. vortexer와 기계 교반은 샘플을 혼합하는 데 사용할 수 있습니다. vortexer를 사용하는 경우, 스냅 모자는 spillage 및 교차 오염을 방지하기 위해 튜브의 꼭대기에 위치해야합니다. 일상적으로, 샘플은 그러나 다른 솔루션 이외에 사용 (별도 준비 튜브) 또는 대체에있을 수 있습니다, 비중 1.18의 황산 아연에 준비가되어 있습니다. </li><li> 각각의 튜브에 약간의 긍정적인 초승달 모양을 형성하기 위해 각 튜브에 추가 부양 솔루션을 추가합니다. 각각의 튜브에 플라스틱 커버 슬립을 적용하고, 튜브 입술 전체에 연락이 만들어 있는지 확인합니다. 장소 튜브 (S) 원심 분리기로. </li><li> 10 분 약 616-760 RCF에서 원심 분리기. 커버 전표를 분실하거나 원심 분리 과정에서 깨진 경우, 새로운 커버 슬립이 샘플 튜브에 배치 수 있으며 튜브가 부드럽게 초승달 모양이 새로운 커버 슬립을 건드리면 너무 밀고 수 있습니다. 추가 원심 분리가 필요하지 않습니다. </li><li> 라벨 깨끗한 유리 현미경 슬라이드에 원심 분리기 튜브의 슬립과 장소를 커버 제거합니다. 여러 개의 원심 분리 솔루션 하나의 배설물 샘플을 평가하는 데 사용했다면, 두 커버 전표가 같은 슬라이드에 추가할 수 있습니다. </li><li> 요오드와 슬라이드를 얼룩. 이것은 E에 대한 수cysts의 asier 식별. </li><li> 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 4. 직접 helminths에 대한 창자의 시험 및 원생 동물문 <ol><li> 깨끗한 절개 보드 또는 이와 유사한 작업 표면에 지느러미 드러누움에 euthanized 마우스 또는 쥐 시체를 놓습니다. </li><li> 포셉 사용하여 성기 영역에서 복부 벽에 리프트. 가위를 사용하여 조심스럽게 성기 지역에서 피부와 근육을 모두 제거하고 장의 위치를​​ 노출 ribcage의 기본으로 복부 복벽을 절개. 십이지장에서 시작 (복부의 출구에 대장의 시작의 세그먼트)과 내림차순 콜론 (항문에서 끝나는 주로 형성 대변이 들어있는 소장의 세그먼트)에 계속, 장내를 제거합니다. </li><li> 100 ML 배양 접시에있는 장소 내장. 해부 보드에 euthanized 동물과 장소에서이게 맹장과 십이지장의 일부를 수집합니다. 점막을 폭로 세로 각 장의 세그먼트를 절개. </li><li> 가위를 사용하여 작은 부분으로 남아있는 장내를 잘라. 간신히 잠수함 수집한 조직을 위해 요리에 충분한 수돗물을 추가합니다. </li><li> 35-40 ° C에서 10 분 최소 실험실 오븐이나 인큐베이터에서 샘플 혼합물을 품어. 이것은 해방과 luminal helminths를 노출합니다. 샘플 잠복기지만, 다음 단계를 수행합니다. </li><li> 두 개 창자 세그먼트 (십이지장과 맹장)에서 시료의 준비 있도록 단일 레이블 슬라이드에서 나란히 0.9 % 생리 측면의 두 방울. </li><li> 소독 열과 inoculating 루프 또는 이와 동등한 진정해. </li><li> 십이지장의 점막을 다쳤고, 그리고 슬라이드 (프로스트의 가장자리에 가장 가까운 쪽)의 왼쪽에있는 부스러기를 놓습니다. </li><li> 이게 맹장의 점막을 긁어와 슬라이드의 오른쪽부터 부스러기를 놓습니다. </li><li> 커버 전표와 부스러기를 위로. 위상 대비 현미경 40x 목표를 사용하여 준비 슬라이드를) 검사, 식별을위한 필요에 따라 증가 확대. 기생충이 발견하는 경우, 형태학을 기반으로 식별합니다. </li><li> 요리 내용이 시점에서 시험을 준비합니다. 해부 현미경 접시 내용을 검사합니다. 철저한 검사를 완료 접시 안에 내용을 이동하는 필요에 따라 프로브 또는 작은 주걱 스틱을 사용합니다. pinworms가 존재하는 경우 그들은 작은, 백색, 머리와 같은 벌레로 나타납니다. 촌충이있는 경우, 그들은 세그먼트, 평면 웜 (스레드와 같은 pinworms보다 큰)로 표시됩니다. </li><li> helminths이 감지하거나 의심하는 경우, 포셉의 작은 쌍을 사용하여 표본을 수집합니다. </li><li> 파라핀이나 미네랄 오일 한 방울의 표시, 깨끗한 유리 슬라이드 표본을 탑재하고 시편 위에 커버 전표를 놓습니다. 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 2. Ectoparasite 시험 (표 3) 5. 모피는 ectoparasites 시험 (테이프 테스트)를 뽑다 <ol><li> 디스펜서에서 맑은 길이 아니 프로스트, 셀로판 테이프를 제거합니다. 테이프의 중간 (약 5cm)을 만지하지 않고 한쪽으로 충분히 처리할 수 있어야합니다. 그것은 깨끗한 작업 표면의 가장자리에 부착하고 필요에 따라 사용하여 한 번에 여러 개의 길이를 분배하는 것이 더 쉽습 수 있습니다. </li><li> 꼬리하여 잡고 케이지 뚜껑에 미치는 케이지 장소에서 마우 스나 쥐가 들어 봐요. 층류 흐름 캐비닛이나 동물의 건강 상태가 그것을 요​​구하는 경우 biosafety 캐비닛에서이 작업을 수행합니다. </li><li> 마우스 또는 쥐을 억제. hemostats와 모피를 파악하고 부드럽게 마우스의 견갑골 구역, 복부 자궁 지역, 겨드랑 지역, 사타구니 주변, 그리고 지느러미 엉덩이에서 모피를​​ 뽑다. 테이프에 모피를 놓습니다. 머리를 성공적으로 고려하는 분석을위한 테이프에 자기편으로 볼 수 있습니다. 그 새장에 마우스 또는 쥐를 다시 넣으십시오. </li><li> 표시 깨끗한 유리 슬라이드에 미네랄 오일 한 방울을 플레이스, 미네랄 오일의 다른 드롭 후, 테이프를 적용합니다. 유리 커버 전표로 커버. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. </li><li> 이 시험은 Radfordia, Myobia 및 Myocoptes 같은 모피 진드기 검출에 가장 적합합니다. </li></ol> 6. 스킨 다쳤어요 <ol><li> 다음 자료 소집해 : 동물 테스트로, 미네랄 오일, 현미경 슬라이드, 커버 슬립, 메스와 가위. 이 테스트는 살아있는 동물에서 수행되어야하는 경우, 그들은 시작하기 전에 anesthetized해야합니다. </li><li> 꼬리와 머리의 관자놀이의 기본 근처 dorsum를 드셔보세요. 또한, 피부 병변 및 / 또는 기타 사이트 까진 수 있습니다. </li><li> 깊이 표피를 침식하는, 헤어 성장의 반대 방향으로 메스 칼날로 피부를 다쳤어요. 근근이 살아가고하기 전에 헤어 코트를 트리밍하면에 시각적 방해 (초과 머리)를 줄임으로써 심사의 감도를 향상시킬 수 있습니다슬라이드. </li><li> 슬라이드에 기름 한 방울을 넣으십시오. 슬라이드의 표면에 날개를 (샘플 첨부)를 닦는하여 오일 드롭 샘플을 적용합니다. 필요한 경우 슬라이드와 커버 슬립과 함께 가기에 추가 기름을 추가합니다. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. </li><li> 피부 다쳤어요는 일반적으로 Demodex (및 dermatophytic 곰팡이) 감지하는 데 사용됩니다. </li></ol> 7. 털가죽의 직접 검사 <ol><li> 해부 현미경의 무대에 euthanized 마우스 또는 쥐를 놓습니다. </li><li> 일부 머리를 작은 주걱 스틱 또는 유사한 악기를 사용하여 약 10X에 펠트의 머리카락을 검사하고 머리 축의 기반을 관찰합니다. </li><li> 눈과 pinnae, pinnae 사이 scapulae 사이의 턱 아래, 그리고 사타구니와 겨드랑 지역 사이의 두개골 영역을 검사합니다. 또는, 전체 시체는 검사 수 있습니다. </li><li> 모든 ectoparasites 또는 포셉의 작은 쌍을 사용하여 본 의심스러운 자료를 수집합니다. Ectoparasites은 종종 비듬이나 머리카락 샤프트의 기본 또는 직접 피부에 노란 밀랍 상승 것처럼 보일 수 있습니다. </li><li> 파라핀이나 미네랄 오일 드롭 깨끗한 유리 슬라이드 표본을 탑재하고 시편 위에 커버 전표를 놓습니다. 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : 다음과 같은 기생충을 식별 첨부 파일을 참조하십시오 (참고 : 다음 절차는 대변이나 피부와 모피에있는 모든 계란, 기생충, 또는 낭종 선물을 감지, 이들 중 몇은 다음과 같습니다) Endoparasites : <table border="0"><tbody><tr><td> Syphacia muris (계란, 웜) </td><td> Chilomastix bettencourti </td></tr><tr><td> Syphacia obvelata (계란, 웜) </td><td> Hexamastix muris </td></tr><tr><td> Aspiculuris tetraptera (계란, 웜) </td><td> Retortamonas SP. </td></tr><tr><td> Rodentolepis 나나 (계란, 웜) </td><td> Giardia 종. </td></tr><tr><td> Tritrichomonas muris </td><td> Spironucleus muris </td></tr><tr><td> Entamoeba muris </td><td></td></tr></tbody></table> Ectoparasites : <table border="0"><tbody><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radfordia affinis </td></tr><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radforida ensifera </td></tr><tr><td> Myobia musculi </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td> 테이프 테스트 </td><td> 방패 선법 </td><td> FCC </td><td> 직접 시험 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> 원생 동물문 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 2 </td></tr><tr><td> Metazoa </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinworm </td><td> + / - 3 </td><td> + / - 4 </td><td> + 4 </td><td> + + + </td><td> + + + </td></tr><tr><td> 촌충 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 기타 roundworms 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 1.이 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. 2. 모든 protozoan 현재 사용할 수 PCR 검출 방법이 없습니다. 3.이 방법은 Syphacia 종을 감지에 가장 적합합니다. 4.이 방법은 Aspiculuris을 감지 가능성이 더 높습 수 있으며, Syphacia를 탐지 가능성이 적습니다. 5. 촌충과 pinworms 이외 roundworms 현대 실험실 마우스 및 쥐에서 매우 드문 있습니다. endoparasite 적절한 검색 방법 표 1. 클래스. 어떤 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 표시 + 문제의 기생충 검출하는 방법의 적합성을 나타냅니다하고, -. 메서드가 해당 기생충 권장되지 않았음을 나타냅니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 용액 </td><td> 비중 </td><td> 1L H 2 O 당 성분 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> 1.20 </td><td> 311g의 나트륨 염화물 </td></tr><tr><td> 나트륨 질산 </td><td> 1.20 </td><td> 338g 나트륨 질산 </td></tr><tr><td> 나트륨 질산 </td><td> 1.30 </td><td> 616g 나트륨 질산 </td></tr><tr><td> 설탕 </td><td> 1.20 </td><td> 1,170그램의 자당 1 </td></tr><tr><td> 쉐더의 설탕 </td><td> 1.27-1.30 </td><td> 1천5백63그램의 자당 1 </td></tr><tr><td> 황산 아연 </td><td> 1.18 </td><td> 493g의 황산 아연 </td></tr></tbody></table> 1. 이러한 솔루션은 냉장이나 방부제로 페놀 9 ML의 추가를 필요로합니다. 표 2. 방패 부양 솔루션 (스미스 외에서.) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 털이 뽑다 (테이프 테스트) </td><td> 스킨 다쳤어요 1 </td><td> 직접 시험 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> 이가 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 진드기 </td><td> + </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 3 </td></tr><tr><td> 벼룩 사 </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 진드기 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 그것이 살아있는 동물에서 수행하는 경우 1.이 방법은 마취가 필요합니다. 2.이 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. 3. 진드기의 모든 종족에 대한 현재 PCR 검출 방법이 없습니다. 4. 벼룩과 진드기 현대 실험 동물 시설 극히 드문 있습니다. ectoparasite 적절한 검색 방법 표 3. 클래스. 어떤 방법은 동물의 안락사가 필요하며, 다른 방법은 마취가 살아있는 동물에서 그들을 수행할 수 있어야합니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 나타냅니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 표시 + 문제의 기생충 검출하는 방법의 적합성을 나타냅니다하고, -. 메서드가 해당 기생충 권장되지 않았음을 나타냅니다.

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	<li>Baker, D. G., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Diseases Vol. 2, (2007).</li><li>Baker, D. G., Baker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+11.">Chapter 11.</a> Flynn's Parasites of Laboratory Animals. , 303-398 (2007).</li><li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Parasites of Laboratory Animals. 12, (1992).</li><li>Pritchett, K. R., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+22.">Chapter 22.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Diseases Vol. 2, (2007).</li><li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M., Baker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+1.">Chapter 1.</a> Flynn's Parasites of Laboratory Animals. , 1-13 (2007).</li><li>Wasson, K., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+21.">Chapter 21.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Vol. 2, 517-550 (2007).</li></ol>

저자는 찰스 리버, 위에서 설명한 검사를 포함한 진단 테스트와 시약의 공급 업체의 모든 직원들이 있습니다.

연구실에 근무하는 경우, 안전은 항상 염려해야합니다. 동물과 작업할 때 적합한 보호 장비를 착용하고 전후에 살균제와 워크 스테이션을 청소하는 것을 잊지 말아주세요. 이 방법은 주로 위치에 실험실 설치류 동물의 기생충을 찾을 수 있도록 설계하는 것은, 검사 즉, 그들은 매우 드문 기생충뿐만 아니라보다 일반적인 pinworms 및 모피 진드기를 검색하거나 이국 수 있습니다. 그들이 다른 수종에 동일하게 적용되지만, 야생 설치류는 상기 방법에 의해 평가되지, 그러한 간, subcutis 및 뇌 같은 위치에 추가 기생충이있을 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 보드를 절단 </td><td> 써모 일렉트론 코프 </td><td> 고양이 # 36114 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 가위 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5910, G204 </td><td> 23mm 블레이드, 3.5 &quot;길이, 스트레이트 </td></tr><tr><td> 중간 가위 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 6808, G207 </td><td> 5 &quot; </td></tr><tr><td> 집게 - 곡선 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8254 (M1/21004) </td><td> 4.5 &quot;, 톱니 모양, 약간의 곡선 </td></tr><tr><td> 집게 - Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5238 </td><td> 허드슨 - (에발트) </td></tr><tr><td> 집게 - 조직 집게 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8160 </td><td> 랫 치아 </td></tr><tr><td> 금속 프로브 </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 25778-000 </td><td></td></tr><tr><td> Hemostats </td><td> 우세 </td><td> V97 - 48 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 주걱 스틱 </td><td> 청교도 </td><td> 6in Applicators, 심판 # 807 </td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> 올림푸스 </td><td> SZ51, 쇼트, ACE1 </td><td></td></tr><tr><td> 페트리 접시 </td><td> VWR </td><td> 100mm, 캣 # 3401PDNL </td><td></td></tr><tr><td> 커버 풀렸는데 </td><td> VWR </td><td> 마이크로 커버 유리, 고양이 # 48366-067 </td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 </td><td> VWR </td><td> VistaVision 현미경 슬라이드 고양이 # 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> 루프 Inoculating </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 50815-040 </td><td></td></tr><tr><td> 라이트 현미경 </td><td> 올림푸스 </td><td> 모델 # BX41TF </td><td></td></tr><tr><td> 실험실 오븐 </td><td> 퀸시 랩 주식 회사 </td><td> 모델 10 랩 오븐 </td><td></td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> 베크맨 쿨터 </td><td> 알레 그라 X - 12R </td><td></td></tr><tr><td> Vortexer </td><td> VWR </td><td> 미니 Vortexer </td><td></td></tr><tr><td> 테스트 튜브 </td><td> 킴블 - 체이스 </td><td> 15 ML 일회용 원심 분리기 튜브, 고양이 # 73790-15 </td><td></td></tr><tr><td> 커버 풀렸는데 </td><td> VWR </td><td> 플라스틱 현미경 커버 풀렸는데, 22mm, 캣 # 48376-049 </td><td></td></tr><tr><td> 화이트 모자 </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 60869-089 </td><td></td></tr><tr><td> 요오드 </td><td> 롤리 생화학 연구소 </td><td> 고양이 # SO - 364 </td><td></td></tr><tr><td> 황산 아연 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> 고양이 # 1000917519, Z4750 - 500G </td><td></td></tr><tr><td> 자당 </td><td> Mallinckrodt 화학 </td><td> 고양이 # 8360-06 </td><td></td></tr><tr><td> 페놀 </td><td> EMD </td><td> 고양이 # PX0510 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> 셀로판 테이프 </td><td> 스테이 플스 </td><td> 오프라인 테이프, 고양이 # 504712 </td><td></td></tr><tr><td> 미네랄 오일 </td><td> Mallickrodt </td><td> 고양이 # 6358 </td><td></td></tr></tbody></table>

diagnosis of ecto- and endoparasites in laboratory rats and mice

내부 및 외부 기생충 실험실 설치류 시설에 큰 관심 유지, 많은 연구 시설 일부 parasitized 동물을 품다. 기생충에 대한 동물 시험에 착수하기 전에, 두 가지가 고려되어야합니다. 하나 : 무엇을 사용이 수집한 정보의 만들어진 두 개의 것이다 : 어느 시험이 가장 적합합니다. 동물 parasitized 것을 아는 것은 시설 받아 무언가 수 있지만 동물 치료 후 치료의 효능을 결정하기 위해 필요가 종종 있습니다 있습니다. 기생충이 사는 euthanized 동물에서 가져온 샘플 등 다양한 기법을 통해 동물에서 검색된 수 있습니다. PCR은 기생충의 여러 유형에 대해 높은 감도 테스트를 사용할 수 있지만 역사적으로 가장 진단 감도 시험은 동물의 안락사를 필요합니다. 이 문서의 감지 엔도와 마우스 및 쥐의 ectoparasites 절차를 보여줍니다. 발견된 기생충의 종류가 다를 수 있지만 동일한 절차는 다른 설치류에 적용됩니다.

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Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

이 문서는 엔도 또는 ectoparasitism을 감지 선별 쥐 및 생쥐를위한 각종 절차에 대해 설명합니다. 여러 진단 assays이 시연되고, 살아있는 동물에서 사용하기에 적합 사람과 동물의 안락사 후 사용되는 모두. 쥐, 마우스 기생충의 식별에 도움을 사진이 포함됩니다.

연구실 고양이와 마우스에 외부의 뜻과 Endoparasites의 진단

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

diagnosis-of-ecto-and-endoparasites-in-laboratory-rats-and-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

41.0K 조회수.  Charles River. 이 문서는 엔도 또는 ectoparasitism을 감지 선별 쥐 및 생쥐를위한 각종 절차에 대해 설명합니다. 여러 진단 assays이 시연되고, 살아있는 동물에서 사용하기에 적합 사람과 동물의 안락사 후 사용되는 모두. 쥐, 마우스 기생충의 식별에 도움을 사진이 포함됩니다.

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Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

연구

면역학 및 감염병학

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her viral population uses the CCR5 coreceptor for cellular entry, and not an alternative coreceptor. One approach to tropism testing is to examine the sequence of the V3 region of the HIV envelope, which interacts with the coreceptor.
Methods: Viral RNA is extracted from blood plasma. The V3 region is amplified in triplicate with nested reverse transcriptase-PCR. The amplifications are then sequenced and analyzed using the software, RE_Call. Sequences are then submitted to a bioinformatic algorithm such as geno2pheno to infer viral tropism from the V3 region. Sequences are inferred to be non-R5 if their geno2pheno false positive rate falls below 5.75%. If any one of the three sequences from a sample is inferred to be non-R5, the patient is unlikely to respond to a CCR5-antagonist.

HIV tropism can be inferred from the V3 region of the viral envelope. V3 is PCR amplified in triplicate using nested RT-PCR, sequenced, and interpreted using bioinformatic software. Samples with with 1 or more sequence(s) with low g2P scores are classified as non-R5 virus.

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Basophil Activation Test for Investigation of IgE-Mediated Mechanisms in Drug Hypersensitivity

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like allergic reactions 1. In clinical practice, diagnosis of drug hypersensitivity is mainly performed by patient history, as skin testing is not reliable and oral provocation testing bears life-threatening risks for the patient 2. Hence, evidence for an underlying IgE-mediated pathomechanism is hard to obtain. 
Here, we present an in vitro method based on the use of human basophils derived from drug-hypersensitive patients that mimics the allergic effector reaction in vivo. As basophils of drug-allergic patients carry IgE molecules specific for the culprit drug, they become activated upon IgE receptor crosslinking and release allergic effector molecules. The activation of basophils can be monitored by the determination of the upregulation of CD63 surface expression using flow cytometry 3. 
In the case of low molecular weight drugs, conjugates are designed to enable IgE receptor crosslinking on basophils. As depicted in Figure 1, two representatives of NSAIDs, PP and DF, are covalently bound to human serum albumin (HSA) via a carboxyl group reacting with the primary amino group of lysine residues. DF carries an intrinsic carboxyl group and, thus, can be used directly 4, whereas a carboxyl group-containing derivative of PP had to be organochemically synthesized prior to the study 1.
The coupling degree of the low molecular weight compounds on the protein carrier molecule and their spatial distribution is important to guarantee crosslinking of two IgE receptor molecules. The here described protocol applies high performance-size exclusion chromatography (HPSEC) equipped with a sequential refractive index (RI) and ultra violet (UV) detection system for determination of the coupling degree.
As the described methodology may be applied for other drugs, the basophil activation test (BAT) bears the potential to be used for the determination of IgE-mediated mechanisms in drug hypersensitivity. Here, we determine PP hypersensitivity as IgE-mediated and DF hypersensitivity as non-IgE-mediated by BAT.

Basophil activation test is a potent tool for the detection of IgE-dependent allergies in vitro. Here, an optimized protocol for basophil activation test is used to investigate drug hypersensitivity. A method for the efficient production of covalent drug-protein conjugates and their physicochemical characterization is described.

약물 과민성의 IGE - 중재 메커니즘을 조사 Basophil 인증 시험

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor treatment options exist. The hallmarks of these laboratories are: custom-designed airtight doors, dedicated supply and exhaust airflow systems, a negative-pressure environment, and mandatory use of positive-pressure (&#8220;space&#8221;) suits. The risk for laboratory specialists working with highly pathogenic agents is minimized through rigorous training and adherence to stringent safety protocols and standard operating procedures. Researchers perform the majority of their work in BSL-2 laboratories and switch to BSL-4 suit laboratories when work with a high-consequence pathogen is required. Collaborators and scientists considering BSL-4 projects should be aware of the challenges associated with BSL-4 research both in terms of experimental technical limitations in BSL-4 laboratory space and the increased duration of such experiments. Tasks such as entering and exiting the BSL-4 suit laboratories are considerably more complex and time-consuming compared to BSL-2 and BSL-3 laboratories. The focus of this particular article is to address basic biosafety concerns and describe the entrance and exit procedures for the BSL-4 laboratory at the NIH/NIAID Integrated Research Facility at Fort Detrick. Such procedures include checking external systems that support the BSL-4 laboratory, and inspecting and donning positive-pressure suits, entering the laboratory, moving through air pressure-resistant doors, and connecting to air-supply hoses. We will also discuss moving within and exiting the BSL-4 suit laboratories, including using the chemical shower and removing and storing positive-pressure suits.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Although researchers are generally knowledgeable about procedures and safety precautions required for biosafety level 1 or 2 (BSL-1/2) experiments, they may not be familiar with experimental procedures in BSL-4 suit laboratories. This article provides a detailed visual demonstration of BSL-4 suit laboratory systems check, laboratory entry, movement, and exit procedures.

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 : 1. 바이오 안전성 레벨 4 정장 연구소 스위트 출입국 절차

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

기자 효소 형광와 쥐에서 이미징 결핵균

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and damaging the testes. During an infection with the ZIKV, immune cells have been shown to infiltrate into the tissues. However, the cellular mechanisms that define the protection and/or immunopathogenesis of these immune cells during a ZIKV infection are still largely unknown. Herein, we describe methods to evaluate the virus-specific T-cell functionality in these immunoprivileged organs of ZIKV-infected mice. These methods include a) a ZIKV infection and vaccine inoculation in Ifnar1-/- mice; b) histopathology, immunofluorescence, and immunohistochemistry assays to detect the virus infection and inflammation in the brain, testes, and spleen; c) the preparation of a tetramer of ZIKV-derived T-cell epitopes; d) the detection of ZIKV-specific T cells in the monocytes isolated from the brain, testes, and spleen. Using these approaches, it is possible to detect the antigen-specific T cells that have infiltrated into the immunoprivileged organs and to evaluate the functions of these T cells during the infection: potential immune protection via virus clearance and/or immunopathogenesis to exacerbate the inflammation. These findings may also help to clarify the contribution of T cells induced by the immunization against ZIKV.

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

A protocol to evaluate antigen-specific T-cell responses in the immunoprivileged organs of the Ifnar1-/- murine model for the Zika virus (ZIKV) infection is described. This method is pivotal for investigating the cellular mechanisms of the protection and immunopathogenesis of ZIKV vaccines and is also valuable for their efficacy evaluation.

감염 된 Ifnar1/- 생쥐의 Immunoprivileged 장기에서 Zika 바이러스 관련 T 세포 응답의 평가

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

포도당-6-인산염 이사머라제(G6PI)-유도 RA 마우스에서 iNKT 세포의 입양 면역 요법

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and generation of high-affinity antibodies. In influenza virus infection, robust Tfh and GC B cell responses are induced to facilitate effective virus eradication, which confers a qualified mouse model for Tfh-associated study. In this paper, we described protocols in detection of basic Tfh-associated immune response during influenza virus infection in mice. These protocols include: intranasal inoculation of influenza virus; flow cytometry staining and analysis of polyclonal and antigen-specific Tfh cells, GC B cells and plasma cells; immunofluorescence detection of GCs; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of influenza virus-specific antibody in serum. These assays basically quantify the differentiation and function of Tfh cells in influenza virus infection, thus providing help for studies in elucidating differentiation mechanism and manipulation strategy.

This paper describes protocols of evaluating Tfh and GC B response in mouse model of influenza virus infection.

인플루엔자 A 바이러스 감염 중 T 여포 도우미 세포 및 발아 센터 반응 평가

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. Identification and monitoring of bacterial species at the ocular mucosa have been challenging due to their low abundance and limited availability of appropriate methodology for commensal growth and identification. There are two standard approaches: culture based or DNA sequencing methods. The first method is problematic due to the limited recoverable bacteria and the second approach identifies both live and dead bacteria leading to an aberrant representation of the ocular space. We developed a robust and sensitive method for bacterial isolation by building upon standard microbiological culturing techniques. This is a swab-based technique, utilizing an &#8220;in-lab&#8221; made thin swab that targets the lower conjunctiva, followed by an amplification step for aerobic and facultative anaerobic genera. This protocol has allowed us to isolate and identify conjunctival species such as Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., etc. The approach is suitable to define commensal diversity in mice under different disease conditions.

Presented here is a protocol for the isolation and amplification of aerobic and facultative anaerobic mouse conjunctival commensal bacteria using a unique eye swab and culture-based enrichment step with subsequent identification by microbiological based methods and MALDI-TOF mass spectrometry.

마우스의 결막 장금 격리 및 식별

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

재발 성 에스케리치아 콜라 이 요로 감염 Gardnerella 질 방광 노출에 의해 유발 마우스에서

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...