Name: effect of male accessory gland products on egg laying in gastropod molluscs
Uploaded: 2014-06-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs at JoVE.com

Biz teknik yardım için, ses için CM Popelier, S. Ypenburg ve C. Levesque MR Helmus teşekkür ederim. Bu araştırma, mali Bilimsel Araştırma Hollanda Örgütü (NWO), Fen ve Hollanda Kraliyet Akademisi (KNAW) ve Japonya Öğrenci Hizmetleri Örgütü (jasso) tarafından desteklenmektedir. Bu yayın JMK NWO Open Access hibe tarafından desteklenmiştir.

1.. Yetiştirme Tesisi <ol><li> VU Üniversitesi gibi bir laboratuvar kültür Lymnaea stagnalis (L.) erişkin örnekleri elde. </li><li> Sürekli su değişimi var damızlık tesisi (molluscarium) ve deneysel tanklarda, hem de 20 ° C&#39;de düşük bakır su koruyun. </li><li> 12 saat: 12 saatte aydınlık / karanlık döngüsünü ayarlayın. </li><li> Damızlık, yetişkin salyangoz pestisit içermeyen marul libitumdan beslemek TetraPhyll (Balık) gevreği ile genç gençlere beslemek. 24 saatlik zaman dilimi içinde serilir yumurta kitlelerden başlayarak, yaşlarına göre ayrı tanklarda salyangoz koruyun. </li><li> Salyangoz onlar etkileri önlemek için, iade edilir üreme tanklarından çıkarıldıktan sonra, hafifçe farklı koşullar altında hem de pseudoreplication önlemek için muhafaza edilerek. </li></ol> 2. Diseksiyon <ol><li> 1 hafta salyangoz izole ve tha sağlamak için, ad libitum beslemekt onlar tam sperm ve seminal sıvı mağaza var. </li><li> Bir stereo mikroskop, iğneli bir diseksiyon plaka, küçük bir cerrahi makas, kaba ve ince forseps, 50 mM MgCl2 çözeltisi, enjeksiyon iğneleri (0.3 mm x 13 mm) ve bir kağıt havlu ile doldurulmuş bir 10 ml şırınga hazırlayın. </li><li> MgCl (31.6 ± 2.1 mm ve ıslak ağırlığı 0.55 g ± 2.89 arasında bir kabuk uzunluğu ile erişkin salyangoz genelde 3 ml veya daha fazla) 2 solüsyonu enjekte tarafından bir salyangoz Euthanize. 45 ° açıyla enjeksiyon iğnesi ile ayak nüfuz ve salyangoz rahatlatır ve (saniyeler içinde) uzatılmış kalana kadar yavaşça sürekli basınç uygulanarak enjekte. Enjeksiyon iğnesi çıkarın ve salyangoz (tentacle geri çekilme refleksi yoktur olup olmadığını kontrol ederek, örneğin) ötenazi olup olmadığını kontrol edin. </li><li> Dikkatle kaba forseps kullanarak kendi eğrilik aşağıdaki kabuk kaldırmak. Yarım, hafifçe forseps ile kazıyarak kabuğundan columellar kas ayırmak. Yavaşça t bükümo kabuğun sarma yönünü takip, kabuğundan dışarı salyangoz. </li><li> Diseksiyon plaka üzerinde salyangoz yerleştirin ve ayağın arka ucunu aşağı pin. Sonra, kafasına bir iğne yerleştirin ve diseksiyonu kolaylaştırmak için salyangoz bazı gerginlik koydu. </li><li> Daha sonra diseksiyon için bir referans noktası olacaktır kadın gonopore, lokalize. </li><li> Cerrahi makas ve ince forseps kullanarak, sadece manto kenarı altında, ilk kesi yapmak ve kadın gonopore doğru kesti. Makas &#39;kanatlarının biri beden duvarının altında itildiğinde, sadece vücut duvarı ve iç organların hiçbiri, kesilmiş olduğundan emin olmak için hafifçe yukarı kaldırın. Kafasına doğru gonopore yukarıdaki kesme devam edin ve düz bir çizgide kesti. </li><li> Prostat bezi (posterior) ve seminal (anterior) yerelleştirilmesine. Bunları dikkatle incelemek ve buz üzerinde saklayın. Seminal sıvı ve / veya sperm içeren test çözümler yapmak için bu kullanın. Fizyolojik Lymnaea sal kullanınine (5.83 mmol / L CaCl2 · 2H 2 O, 3.76 mmol / L MgCl2 · 6H 2 O, 42,69 mmol / L NaCl, 37.53 mmol / L KCl) bir taşıyıcı ortam olarak. </li><li> Prostat bezinin lümeni hem de seminal veziküller gelen sperm mevcut olan meni toplayın. Daha sonra, yavaşça onların içeriğini ifade ve bir forseps ile organ dokusuna kaldırarak ayrı şişelerde tuzlu hem de askıya. Buz üzerinde tutmak ve aynı gün kullanın. Daha sonra, farklı tedavi çözümleri oluşturmak için bu süspansiyonlar karıştırın. </li></ol> 3.. İntravajinal Enjeksiyon <ol><li> Vajina içi enjeksiyon işlemi başlamadan önce, (kabuğun uç uyacak şekilde yapılmış) bir silikon kabuk kalıp hazırlanması, 1 mm şırınga, 1 mm bir çapa sahip, 10-12 cm silikon boru, (enjeksiyon iğneleri köreltilmiş 0.3 mm x 13 mm ), iri forseps ve keskin bir enjeksiyon iğnesi ile donatılmış bir 50 mM MgCl2 çözeltisi ile doldurulmuş 10 ml aynı şırınga. </li><li> Bazı tedavilerde seminal sıvı (ya da bireysel seminal sıvı proteinler) eklemek için gerekli sperm, toplayın; Bir biyolojik olarak uygun bir doz bir prostat ve seminal vezikül enjeksiyon başına arasında 1/3 eşittir. NOT: temsilcisi sonuç bölümünde (Şekil 1) üç farklı tedaviler ile deney sonuçları gösterilmiştir: Kontrol yalnız (taşıyıcı ortam, yani tuzlu su), Ovipostatin (tespit seminal sıvı proteinlerden biri) ve Ovipostatin sperm ile eşlik etti. Buna ek olarak, diğer türlerdeki biyolojik olarak uygun doz tahmin etmek için, son şeklindeki 16 ve cinsel yolla izole kalmış kişiler kişilerin prostat bezinin ağırlık farkı ifade eder. </li><li> Hazırlanan test çözeltileri her biri için 1 ml şırınga hazırlayın. Tek çözümü ile her şırınga doldurun ve içinde hiçbir hava kabarcığı olmadığından emin olun. </li><li> Her şırınga Köreldiğini enjeksiyon iğnesi takın. </li><li> Enjeksiyonu 1 kullanın10 sm bir minimum uzunluğa sahip mm çaplı silikon tüp. </li><li> Dikkatle tüpü delmek için değil emin olun, enjeksiyon iğnesi üzerinde silikon tüp kaydırın ve yavaşça şırınga basınç uygulayarak tüpten havayı çıkarın. </li><li> Noktası 2.3 ile aynı protokolü izleyerek bir salyangoz uyuşturan. Bu kez 50 mM MgCl2 fazla 2-3 ml enjekte etmek değil emin olun. </li><li> Sabit bir pozisyonda tutmak için kabuk-kalıba salyangoz yatıyordu. </li><li> (Bu konum aynı zamanda tatlı su salyangoz diğer türler için de geçerlidir) açıkça doğru tentacle ve erkek gonopore için hayvan, anterior sağ tarafında beyaz bir nokta olarak görülebilir kadın gonopore, bulun. Engelsiz erişim için emin olun. </li><li> Silikon tüpün ucunu tutun ve yavaşça dişi gonopore içine silikon tüp yaklaşık 2-4 mm eklemek için bir forseps kullanın. </li><li> Dikkatlice şırıngayla basınç uygulanır ve test çözeltisi 0.03 ml enjekte edilir. Yarım dakika bekleyinTüpü çıkarmadan önce dişi yolu içine yaymak için boru içindeki basıncın izin vermek için katkı sağlayacaktır. </li><li> O izlenebilir onun izolasyon, kapsayıcı, işlenmiş salyangoz dönün ve deneysel tankında sedasyon kurtarmak için izin verir. </li></ol> 4. Biyoassay <ol><li> Tanımlama için her salyangoz Etiket ve kabuk uzunluğu ölçer. İkincisi üreme çıktı hesaplarken alakalı boyutu, iyi bir göstergedir. </li><li> Deney tankı içinde su değişimi sağlamak için delikli bir 460 ml kap içinde her bir salyangoz izole edin. Bu, etkili bir su değişimi sağlamak için, suyun akış yönünde delikleri olan, doğru yönde kapları yerleştirmek önemlidir. </li><li> Biyoassay sırasında, marul standart bir miktarda düzenli salyangoz beslemek. Marul kesmek için yuvarlak, metal zımba kullanın. Bu protokolde 19.6 cm 2 marul diskleri a yaklaştığı, kullanılanonlar en fazla bir gün yiyebilirsiniz montaj. </li><li> Bir spatula düz tarafı kullanarak bir yumurta kitle toplamak ve konteyner duvardan yumurta kütlesi kazıyın. Yumurta kitle toplamak için kaşık tarafını kullanın. NOT: Sadece atılmıştır Opak yumurta kitleler (onlar döşeme sonra birkaç saat içinde saydam hale) Tarama için kullanılan olamaz. Onlar haftada 2-3 yumurta kitleleri üretmek için bu protokolü modeli türler için, Lymnaea stagnalis, her gün yumurta kitleler için kontrol edin. Bu, diğer türlerinde farklılık gösterebilir. </li><li> Tarayıcı sürücüsünü içeren bir (dizüstü) bilgisayar, bir düz yatak tarayıcı, standart bir milimetre ölçek, bir spatula, tabak ve cam karoları kullanarak, dijital toplanan yumurta kitleleri tarayın. </li><li> Transfer plakaları her yumurta kitle yerleştirin ve plakaları tam kadar tekrarlayın. Daha sonra, yumurta kitleler kağıt havlu üzerinde hafifçe dokunmak kurutmak ve aktarma kalıplarda olduğu gibi aynı sırada cam karo üzerine aktarın. </li><li> (Baş aşağı her karo çevirinyumurta kitleler cam karo sopa) ve dikkatle sadece milimetre ölçeği altında, flatbed tarayıcıya yerleştirin olacaktır. Hepsi aynı odak düzlemi içinde görünür böylece eşit yumurta dağıtacak olan yumurta kitleleri düzleştirmek için basınç biraz uygulayın. Tüm yumurtalar eşit basık olduğunu sağlamak için iki kenarlarında bir bant standart miktarda karoları Fit. </li><li> Tarayıcı ayarlarını ayarlayın. Bu, onun maksimum çözünürlüğü ayarlamak bir önizleme taraması yapmak, çalışma alanı kırpma ve parlaklık ve kontrastı ayarlamak için önemlidir. Yumurta kitleleri tarayın. </li><li> Daha da geliştirilmesi ve kuluçka için kendi etiketli 20 ml bir cam şişe içinde, her yumurta kitle yerleştirin. </li><li> Düzgün oksijenli tutmak için her gün şişeleri kuluçka suyu yenileyin. Aşağıdaki sırayla yavru sayı ve büyüklüğüne göre bu yapın: (hayır yavru) dökülen / boşaltılarak (kuluçka başlangıcını) taşan ve bir pipet (birçok yavru) ile suyu dışarı çıkarmak. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Yumurta Ölçme ve Sayma <ol><li> Özgürce kullanılabilir görüntü analiz yazılımı ImageJ (NIH, ABD) ve hücre sayaç eklentisini yükleyin. </li><li> Açık ImageJ yanı sıra veri aktarmak için bir elektronik tablo programı. Sonra ImageJ yumurta kitlelerin taranmış bir resim açın. </li><li> Milimetre ölçeğine gitmek için zoom aracını kullanarak ölçeği ayarlayın. Yakınlaştırmak ve ekranı doldurmak için 1 mm penceresini ayarlamak. 1 mm belirtmek iki çizgi arasındaki satırı aracını kullanarak bir çizgi çizin. Analiz gidin ve ölçeğini ayarlayın. Açılır menüde ölçülen uzunluk seçeneği 1 olarak bilinen mesafeyi ayarlamak ve uzunluk birimi mm, görünür hale gelir. Kutu Küresel kontrol edin ve pencereyi kapatın. </li><li> Analiz gezinme tarafından tercih edilen ölçümler (uzunluk, genişlik, çevresi) ayarlayın ve Alan ve Feret Çapı (uzunluk ve genişlik) seçerek Ölçümleri ayarlayın. Onaylamak ve görüntü analizleri ile devam etmek için Tamam&#39;a tıklayın. </li><li> Yumurta ölçmek için, zoölçülmesi gerekiyor ilk yumurta kütlesinin bir yumurta üzerinde om. % 800 bir zoom tavsiye edilir. Ardından, eliptik alet tam yumurta, ctrl etrafında bir oval çizin kullanarak + D (iki kez aynı yumurta ölçme önlemek için) görüntü üzerinde çevresini çizin. Sonra oval (uzunluk, genişlik, çevresi) özelliklerinin ölçümünü kaydetmek için ctrl + M tuşuna basın; Bir pop-up ekran ölçümlerini görüntüleyerek açılır. NOT: yumurta ölçmek için eliptik araç kullanımı tüm türler için geçerli değildir. Homojen olmayan şekilli yumurta olan türler için, bunun yerine serbest seçimleri kullanın. </li><li> Gerektiği kadar çok yumurta ölçün ve sonra. Xls çalışma sayfası olarak tedbirleri kaydedin. İsteğe bağlı olarak, doğrudan bir çalışma sayfasına verileri kopyalamak. </li><li> Daha sonra sayaç penceresini kullanarak, bir yumurta kitle içinde yumurta sayısı ve manuel çalışma içine sayıları koydu. </li><li> Alternatif olarak, hücre sayacı plug-in yardımı ile yumurta kütlesi başına birey yumurtaları saymak. Bunun için, Plug-ins gidinDaha sonra, analiz ve Hücre sayacı seçin. Hücre sayacı penceresi &#39;başlatmak&#39; kutusunu ve basın &#39;orijinal tutmak&#39; kontrol açılır. Yeni bir sayaç penceresi araç çubuğundan crosshair aracını seçin ve hücre sayacı menüsünde bir sayaç türü seçin, görünür. Hücre sayacı penceresinde tek yumurta tıklayarak tek tek yumurtaları saymak. Hücre sayacı menüsünden sayaç türünün yanındaki toplam sayısını dikkate alınız. Bir e-tabloya elle bu numarayı kopyalamak veya Sonuçlar basarak sonuç elde. </li><li> Gerekirse, sayaç türleri ekleyerek tek sayma olay içinde birden fazla yumurta kitleleri saymak. </li></ol>

<ol>
	<li>Mann, T., Lutwak-Mann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Male reproductive function and semen. , (1981).</li><li>Arnqvist, G., Rowe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Sexual Conflict. , (2005).</li><li>Birkhead, T. R., Hosken, D. J., Pitnick, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Sperm Biology, an Evolutionary Approach. , (2008).</li><li>Koene, J. M., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allohormones":+A+class+of+bioactive+substances+favoured+by+sexual+selection.">Allohormones": A class of bioactive substances favoured by sexual selection.</a> Journal of Comparative Physiology A. 187 (5), 323-326 (2001).</li><li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+evolutionary+consequences+in+the+insects.">Sperm competition and its evolutionary consequences in the insects.</a> Biological Reviews. 45 (4), 525-567 (1970).</li><li>Perry, J. C., Sirot, L., Wigby, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+seminal+symphony:+how+to+compose+an+ejaculate.">The seminal symphony: how to compose an ejaculate.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 28 (7), 414-422 (2013).</li><li>Baldini, F., Gabrieli, P., Rogers, D. W., Catteruccia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+composition+of+male+accessory+gland+secretions+in+Anopheles+gambiae:+a+comparison+with+other+insect+vectors+of+infectious+diseases.">Function and composition of male accessory gland secretions in Anopheles gambiae: a comparison with other insect vectors of infectious diseases.</a> Pathogens and Global Health. 106 (2), 82-93 (2012).</li><li>Xu, J., Baulding, J., Palli, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+of+Tribolium+castaneum+seminal+fluid+proteins:+identification+of+an+angiotensin-converting+enzyme+as+a+key+player+in+regulation+of+reproduction.">Proteomics of Tribolium castaneum seminal fluid proteins: identification of an angiotensin-converting enzyme as a key player in regulation of reproduction.</a> Journal of Proteomics. 78, 83-93 (2013).</li><li>Jarne, P., Auld, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animals+mix+it+up+too:+The+distribution+of+self-fertilization+among+hermaphroditic+animals.">Animals mix it up too: The distribution of self-fertilization among hermaphroditic animals.</a> Evolution. 60 (9), 1816-1824 (2006).</li><li>Nakadera, Y., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+strategies+in+hermaphroditic+gastropods:+conceptual+and+empirical+approaches.">Reproductive strategies in hermaphroditic gastropods: conceptual and empirical approaches.</a> Canadian Journal of Zoology. 91 (6), 367-381 (2013).</li><li>Chase, R., Blanchard, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+snail&#8217;s+love-dart+delivers+mucus+to+increase+paternity.">The snail&#8217;s love-dart delivers mucus to increase paternity.</a> Proceedings of the Royal Society of London B. 273 (1593), 1471-1475 (2006).</li><li>Koene, J. M., Chase, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+reproductive+system+of+the+snail+Helix+aspersa+caused+by+mucus+from+the+love+dart.">Changes in the reproductive system of the snail Helix aspersa caused by mucus from the love dart.</a> Journal of Experimental Biology. 201 (15), 2313-2319 (1998).</li><li>Van Duivenboden, Y. A., Pieneman, A. W., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+mating+suppresses+fecundity+in+the+hermaphrodite+freshwater+snail+Lymnaea+stagnalis:+a+laboratory+study.">Multiple mating suppresses fecundity in the hermaphrodite freshwater snail Lymnaea stagnalis: a laboratory study.</a> Animal Behaviour. 33, 1184-1191 (1985).</li><li>Koene, J. M., Brouwer, A., Hoffer, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+egg+laying+caused+by+a+male+accessory+gland+product+opens+the+possibility+for+sexual+conflict+in+a+simultaneous+hermaphrodite.">Reduced egg laying caused by a male accessory gland product opens the possibility for sexual conflict in a simultaneous hermaphrodite.</a> Animal Biology. 59 (1), 435-448 (2009).</li><li>Hoffer, J. N. A., Schwegler, D., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating+rate+influences+female+reproductive+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite,+Lymnaea+stagnalis.">Mating rate influences female reproductive investment in a simultaneous hermaphrodite, Lymnaea stagnalis.</a> Animal Behaviour. 84 (3), 523-529 (2012).</li><li>Koene, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+accessory+gland+protein+reduces+egg+laying+in+a+simultaneous+hermaphrodite.">Male accessory gland protein reduces egg laying in a simultaneous hermaphrodite.</a> PLoS ONE. (5), (2010).</li><li>Nakadera, Y., Swart, E. M., Hoffer, J. N. A., Den Boon, O., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receipt+of+seminal+fluid+proteins+causes+reduction+of+male+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite.">Receipt of seminal fluid proteins causes reduction of male investment in a simultaneous hermaphrodite.</a> Current Biology. 24, 1-4 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Sunulan protokol seminal sıvı ve nasıl bir biyolojik olarak anlamlı bir şekilde bu test toplamak için nasıl gösterir. Burada bu yöntem, prostat bezi ekstraktı kullanılarak gösterilmiş olmasına rağmen, bir tek saflaştırılmış seminal sıvı proteinin etkisi de aynı prosedür izlenerek test edilebilir. Açıktır ki, bu gibi testlerde bu prosedür ve / veya taşıyıcı ortam soru 14,16 parametreleri etkilemez sağlamak için uygun kontroller (sham tedavileri) eklemek için her zaman çok önemlidir. Bu yöntem kullanılarak, daha önce 14,16 yumurta koyan bir azalmaya aracılık eden bir tek seminal akışkan protein, yani Ovipostatin, olduğu gösterilmiştir. Prostat bezinde üretilir ve sperm ile birlikte çiftleşme sırasında transfer bu protein, bir eş zamanlı hermafrodit ilk olarak tam anlamıyla karakterize seminal sıvı bileşenini ifade eder, ve şu ana kadar bilinen proteinlere herhangi bir benzerlik göstermez. Bulgu Ovipostakalay alıcı yumurta seri üretim meni içindeki maddeler 13-15 döşeme yumurta etkileyebileceğini belirten daha önceki çalışmaları doğrular azaltır. Biyolojik ilgili miktarları aktararak (3.2 16 bakınız), bir ikna edici bu yumurtada gözlenen azalma döşeme (Şekil 1) aracılık eden seminal sıvı protein değil, sperm varlığı kendileri olduğunu gösterebilir. Doğal çiftleşmelerin yoluyla seminal sıvı tekrarlanan makbuz yumurta başına 15 yatırımı artırır göz önüne alındığında, artık yumurtlamanın diğer parametreleri ölçmek için son derece uygun olur. Sunulan protokol şimdi bunu yapmak için gerekli yöntemleri sağlamaktadır. Hiçbir etkisi alıcı 16 tarafından atılmıştır yumurta başarısını kuluçkalık Ovipostatin bulundu rağmen, bu protein ile uyum içinde hareket diğer seminal sıvı protein olabilir. Dolayısıyla, bu bağlamda değerlendirilmesi gerekir parametreleri - Bir sonraki frekansı ve yumurta sayıları döşeme - yumurta büyüklüğü, hatc dahilhing zaman, yavru geliştirme ve yavru boyutu. Buna ek olarak, bu tür sperm depolama ve kullanım yanı sıra, erkek ve dişi üreme fonksiyonunun 14,17 karşı kaynak tahsisi gibi yumurtlama dışında dişi süreçleri, etkilerine bakmak mümkündür. Açıkçası, sunulan bir yöntem Lymnaea stagnalis ve diğer tatlı su salyangozları, hem bu izlem konuların ele vesile oluyor. Özetle, seminal sıvı proteinleri aktarılan bu protokolü show kullanarak deneyler bu eşzamanlı çift cinsiyetli alıcının kadın üreme performansını etkileyebilir. Birkaç çalışmada bu ele sahip olduğu göz önüne alındığında, çok daha yaygın şu anda bilimsel literatürde yansıtılır daha dahili çift cinsiyetli gübreleme olması muhtemeldir. Bir ön-çiftleşme arkadaşı seçimi ve sperm rekabet, bu çift cinsiyetli 14, önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir olduğunu fark Özellikle hangi highlights bu tür erkek donatım bez proteinlerin potansiyel cinsel bu sistemde seçilmelidir. Son olarak, bu araştırma bunlar ayrı-cinsiyetli türler için olduğu gibi seminal sıvı proteinler aynı anda çift cinsiyetli için eşit öneme sahip olduğu, gelişmekte fikrini desteklemeye yardımcı olur.

Devirden sonra spermler genellikle erkek aksesuar bezleri tarafından üretilen seminal sıvı eşlik ediyor. Bazı söyleyivermek bileşenler besleyici ve aktive sperm 1 rol oynarken, diğerleri sperm donör 2-4 fertilizasyon başarısını artırmak amacıyla kadın fizyolojisini etkileyebilir. Bir tür çok karışık ve etkili sperm depolama ve sindirim sperm olduğunda Bu etkiler, özellikle de cinsel seçimi ile, için seçilir. Bu koşullar altında, sperm donör yumurta 5 döllenme için yoğun rekabet. Erkek döllenme başarı için seminal sıvı maddelerin önemi bol correlational kanıtlar olsa da, doğrudan bir kanıt daha nadirdir ve birkaç çalışma fizyolojik değişikliği ve / veya 6 katılan maddelerin ayrıntıları dalmıştır var. Türlerin ayrı cinsiyette (yani, erkek ve kadın; gonochorists) ile bir kaç iyi araştırılmış bir model speci vardırBu seminal sıvı bileşimi ve etkileri söz konusu olduğunda es. Örnekler, meyve sineği, Drosophila melanogaster 6, sıtma sivrisinek, Anopheles gambiae 7 ve kırmızı un böceği, Tribolium castaneum 8 bulunmaktadır. Bu üreme bu mod hayvanlar aleminin 9 boyunca yaygın olsa bile, (yani, bireyler aynı zamanda işlevsel erkek ve kadın) aynı anda çift cinsiyetli olan türler söz konusu olduğunda bu tür meni çalışmalar çok nadirdir. Bir aksesuar bez maddenin transferi en önemli hermaphroditic örneği muhtemelen madde derialtı enjeksiyon 11,12, yani, değil yoluyla sperm donör tarafından aktarılır kara salyangoz 2,10, sözde aşk-dart çekim olduğunu sperm ile birlikte. Ama sperm ile birlikte erkek aksesuar bez ürünleri transferi aynı anda pek çok çift cinsiyetli vardırgibi burada kullanılan modeli türler gibi, büyük gölet Lymnaea stagnalis salyangoz. Önceki araştırma zaten seminal sıvı alınması bu türlerin dişi üreme çıkışını 13-15 etkilediğini ortaya koymuştur ve ilgili seminal sıvı proteinlerin birkaç 16,17 tespit edilmiştir. Koene ark 16 bildirilen yöntemlerden bir uzantısı olan bu protokol, genel amacı, karındanbacaklı yumuşakçalar yumurtlama çeşitli parametreleri üzerindeki seminal sıvı proteinlerin etkisini test etmektir. Bu, prostat bezi (yani, seminal sıvı üreten erkek donatım bez) standart bir laboratuvar kültürden izole edilmiş cinsel verici salyangoz arasında diseksiyon ile gerçekleştirilir. İkincisi, donörün sperm seminal keseciklerin toplanan ve farklı tedavi çözümleri yapılır. , Daha sonra, deney anestezi salyangoz ve intravajinal, örneğin bir test solüsyonu (enjekteYalnız prostat bezi özü, sperm ile prostat bezi özü, yalnız sperm, yalnız taşıyıcı orta). Bu test salyangoz sonra yumurtlama kaydetmek için, standart koşullar altında, hafta için aşağıdaki gün izlenir. Yumurta kitleler dijital sayma ve çeşitli parametreleri ölçmek için taranmış, toplanmış ve daha sonra kuluçka için ayrı ayrı şişelere konur. Yaklaşık iki hafta sonra, yavru sayıldı ve dijital olarak taranır. Yumurta kütleleri ve yavru hem de tüm taramalar, daha sonra, bir serbest mevcut görüntü analiz yazılım paketi kullanılarak analiz edilmiştir. Bu protokol için büyük gölet salyangoz, Lymnaea stagnalis, laboratuvar suşu Amsterdam VU Üniversitesi yetiştirilmiş, hangi kullanılır. Bu tür cinsel seçimi ve çift cinsiyetli üreme hakkında sorular araştırmak için bir model sistem olarak hizmet vermektedir. Hayvanın görece büyük boyutlu deneysel çok erişilebilir hale getirir. İlave olarak, bir çok b tür bir model olarak kullanılıriological disiplinler biz zaten bu hayvanların temel biyolojisi hakkında çok şey biliyorum. Bu yöntem genel olarak seminal sıvı proteinler aracılığıyla olur cinsel seçilim süreçleri hakkında çalışma soruları için yardımcı olacaktır. Bu eş zamanlı çift cinsiyetli olduğu için ek olarak, bunların cinste 16,17 ayrılır türlerde olduğu gibi bu proteinler olarak benzer ve / veya farklı şekillerde hareket olup ele mümkündür.

<table><tbody><tr><td>Fish food flakes</td><td>TetraPhyll</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereo microscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small surgical scissors</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coarse and fine forceps</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml syringe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Injection needles (0.3 mm x 13 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5.83 mmol/L CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#183;2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.76 mmol/L MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#183;6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>42.69 mmol/L NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37.53 mmol/L KCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Two component Silicon</td><td>Sylgard</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mm syringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silicon tubing (diameter 1 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blunted injection needles (0.3 mm x 13 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes</td><td>Eppendorff</td><td></td><td></td></tr><tr><td>460 ml perforated containers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal leaf puncher (19.6 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spatula/spoon</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(Laptop) computer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flatbed scanner</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millimeter scale</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transferring plates</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass tiles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 ml glass vials</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

effect of male accessory gland products on egg laying in gastropod molluscs

Içten hayvanlar gübreleme seminal sıvı genellikle birlikte sperm veya meniyi oluşturan, sperm eklenir. Besleyici ve aktive sperm yanı sıra, seminal sıvı içindeki bileşenler de sperm donörün fertilizasyon başarısını artırmak için dişi fizyolojisi etkileyebilir. Birçok çalışma ayrı cinste olan türlerde böyle etkileri olduğu bildirilmiştir ederken, birkaç çalışmaların eşzamanlı hermaphroditic hayvanlarda bu ele sahip. Bu video protokol model organizma olarak bir anda hermafrodit tatlı su salyangozu, büyük gölet salyangoz Lymnaea stagnalis kullanarak, gastropodlar seminal sıvı etkilerini incelemek için bir yöntem sunar. Prosedür tamamlandıktan prostat bezi özleri kullanılarak gösterilmişse de, ayrı ayrı parçalar seminal sıvı (örneğin, proteinler, peptidler ve diğer bileşikler) aynı şekilde test edilebilir. Yumurtlama tarihinde ejekulat bileşenlerinin alınmasından etkileri yumurtlama sıklığı açısından sayısal edilebilirBöyle her bir yumurta kitleleri içinde yumurta sayı olarak kadın üreme performansının daha ince tahminleri. Sonuçlar seminal sıvı proteinler cinsel seçimi için önemini vurgulayarak, bu eşzamanlı hermafrodit kadın üreme çıkışını etkilediğini göstermektedir.

Şekil 1, bu madde kontrol (tuzlu su) ya da vajinal yolla enjeksiyondan sonra yumurta hayvanların yüzdesini gösterir, Ovipostatin veya Ovipostatin sperm ile birlikte. N, her tedavi için 15 =; . detayları ve istatistikleri için Koene ark 16 (bakınız Kaynak:. Koene ark 2010, PLoS ONE itibaren Şekil 3). <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51698/51698fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1.. Lymnaea stagnalis yumurta seri üretimine Ovipostatin Etkisi. Grafiği kontrol madde (tuz) ya da vajinal yolla enjeksiyonundan sonra yumurta atma hayvanların yüzdesini gösterir Ovipostatin veya Ovipostatin sperm ile eşlik etti. N, her tedavi için 15 =; Koene ark bakın. 2010 detayları ve istatistikleri. Koene ark izni ile yeniden yazdırın 2010 PLoS ONE 5:. E10117.

Watch this Scientific Journal Video about Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs at JoVE.com

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

This video protocol demonstrates a method to study effects of seminal fluid in gastropods, using the hermaphroditic freshwater snail Lymnaea stagnalis.

Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...

effect-male-accessory-gland-products-on-egg-laying-gastropod

Research

JoVE Journal

Biology

10.6K Görüntüleme.  VU University. This video protocol demonstrates a method to study effects of seminal fluid in gastropods, using the hermaphroditic freshwater snail Lymnaea stagnalis.

Video: Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

A Noninvaziv Yöntemi<em&gt; In situ</em&gt; Kadın American Istakoz&#39;ların çiftleşme Başarı (Belirlenmesi<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Çevre

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Biyoloji

Mechanical Separation and Protein Solubilization of the Outer and Inner Perivitelline Sublayers from Hen's Eggs

The perivitelline layer that surrounds the egg yolk plays a fundamental role in fertilization, in egg defense, and in the development of the avian embryo. It is formed by two proteinaceous sublayers that are tightly associated and formed by distinct female reproductive organs. Both structures are assumed to have their own functional specificities, which remain to be defined. To characterize the function of proteins composing each sublayer, the first challenge is to establish the conditions that would allow for the mechanical separation of these two intricate layers, while limiting any structural damage. The second step is to optimize the experimental conditions to facilitate protein solubilization from these two sublayers, for subsequent biochemical analyses. The efficiency of this approach is assessed by analyzing the protein profile of each sublayer by Sodium Dodecyl Sulfate-Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE), which is expected to be distinct between the two structures. This two-step procedure remains simple; it requires classical biochemical equipment and reagents; and is compatible with further in-depth proteomics. It may also be transposed to other avian eggs for comparative biology, knowing that the structure and the composition of the perivitelline layer has been shown to have species-specific features. In addition, the non-denaturing conditions developed for sublayers separation (step 1) allow their structural analyses by scanning and transmission electron microscopy. It may also constitute the initial step for subsequent protein purification to analyze their respective biological activities and 3D structure, or to perform further immunohistochemical or functional analyses. Such studies would help to decipher the physiological function of these two sublayers, whose structural and functional integrities are determinant criteria of the reproductive success.

This article reports a simple method to isolate the outer and inner perivitelline sublayers of chicken eggs while minimizing structural alteration and to optimize protein solubilization of each sublayer for proteomic analyses.

Dış ve İç Perivitellin Sublayerlerinin Tavuk Yumurtalarından Mekanik Ayrıştırılması ve Protein Solubilizasyonu

The perivitelline layer that surrounds the egg yolk plays a fundamental role in fertilization, in egg defense, and in the development of the avian embryo. ...

Biyokimya

Analysis of Transforming Growth Factor &#223; Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos

The two arms of the Transforming Growth Factor &#223; (Tgf&#223;) superfamily, represented by Tgf&#223;/Nodal or Bone morphogenetic protein (Bmp) ligands, respectively, play essential roles in embryonic development and adult homeostasis. Members of the Tgf&#223; family are made as inactive precursors that dimerize and fold within the endoplasmic reticulum. The precursor is subsequently cleaved into ligand and prodomain fragments. Although only the dimeric ligand can engage Tgf&#223; receptors and activate downstream signaling, there is growing recognition that the prodomain moiety contributes to ligand activity. This article describes a protocol that can be used to identify cleavage products generated during activation of Tgf&#223; precursor proteins. RNA encoding Tgf&#223; precursors are first microinjected into X. laevis embryos. The following day, cleavage products are collected from the blastocoele of&#160;gastrula stage embryos and analyzed on Western blots. This protocol can be completed relatively quickly, does not require expensive reagents and provides a source of concentrated Tgf&#223; cleavage products under physiologic conditions.

Analysis of Transforming Growth Factor &#223; Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos

When Transforming Growth Factor &#223; family precursor proteins are ectopically expressed in Xenopus laevis embryos, they dimerize, get cleaved and are secreted into the blastocoele, which begins at the late blastula to early gastrula stage. We describe a method for aspirating cleavage products from the blastocoele cavity for immunoblot analysis.

Xenopus laevis Embriyolarının Blastocoele'sine Salgılanan Dönüşüm Faktörü ß Aile Bölünmesi Ürünlerinin Analizi

The two arms of the Transforming Growth Factor &#223; (Tgf&#223;) superfamily, represented by Tgf&#223;/Nodal or Bone morphogenetic protein (Bmp) ligands, ...

Gelişim Biyolojisi

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Nörobilim

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension and microscopically visualize sperm accumulation around the pipette1. Sperm chemoattraction in vertebrates such as frogs, rodents and humans is more difficult to detect and requires quantitative assays. Such assays are of two major types - assays that quantitate sperm movement to a source of chemoattractant, so-called sperm accumulation assays, and assays that actually track the swimming trajectories of individual sperm.
Sperm accumulation assays are relatively rapid allowing tens or hundreds of assays to be done in a single day, thereby allowing dose response curves and time courses to be carried out relatively rapidly. These types of assays have been used extensively to characterize many well established chemoattraction systems - for example, neutrophil chemotaxis to bacterial peptides and sperm chemotaxis to follicular fluid. Sperm tracking assays can be more labor intensive but offer additional data on how chemoattractancts actually alter the swimming paths that sperm take. This type of assay is needed to demonstrate the orientation of sperm movement relative to the chemoattrractant gradient axis and to visualize characteristic turns or changes in orientation that bring the sperm closer to the egg.
Here we describe methods used for each of these two types of assays. The sperm accumulation assay utilized is called a "two-chamber" assay. Amphibian sperm are placed in a tissue culture plate insert with a polycarbonate filter floor having 12 &mu;m diameter pores. Inserts with sperm are placed into tissue culture plate wells containing buffer and a chemoatttractant carefully pipetted into the bottom well where the floor meets the wall (see Fig. 1). After incubation, the top insert containing the sperm reservoir is carefully removed, and sperm in the bottom chamber that have passed through the membrane are removed, pelleted and then counted by hemocytometer or flow cytometer.
The sperm tracking assay utilizes a Zigmond chamber originally developed for observing neutrophil chemotaxis and modified for observation of sperm by Giojalas and coworkers2,3. The chamber consists of a thick glass slide into which two vertical troughs have been machined. These are separated by a 1 mm wide observation platform. After application of a cover glass, sperm are loaded into one trough, the chemoattractant agent into the other and movement of individual sperm visualized by video microscopy. Video footage is then analyzed using software to identify two-dimensional cell movements in the x-y plane as a function of time (xyt data sets) that form the trajectory of each sperm.

Eggs and the extracellular coatings around eggs frequently release peptides, proteins and small molecules that communicate with sperm to guide them to the egg thereby promoting fertilization. Using frog sperm we describe and compare two classes of assays used to detect sperm chemoattraction &#x2013; sperm accumulation assays and sperm tracking assays.

İki Kurbağa Sperm Chemoattraction saptamak için Tahliller Türleri

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

A Whole Mount In Situ Hybridization Method for the Gastropod Mollusc Lymnaea stagnalis

Whole mount in situ hybridization (WMISH) is a technique that allows for the spatial resolution of nucleic acid molecules (often mRNAs) within a &#39;whole mount&#39; tissue preparation, or developmental stage (such as an embryo or larva) of interest. WMISH is extremely powerful because it can significantly contribute to the functional characterization of complex metazoan genomes, a challenge that is becoming more of a bottleneck with the deluge of next generation sequence data. Despite the conceptual simplicity of the technique much time is often needed to optimize the various parameters inherent to WMISH experiments for novel model systems; subtle differences in the cellular and biochemical properties between tissue types and developmental stages mean that a single WMISH method may not be appropriate for all situations. We have developed a set of WMISH methods for the re-emerging gastropod model Lymnaea stagnalis that generate consistent and clear WMISH signals for a range of genes, and across all developmental stages. These methods include the assignment of larvae of unknown chronological age to an ontogenetic window, the efficient removal of embryos and larvae from their egg capsules, the application of an appropriate Proteinase-K treatment for each ontogenetic window, and hybridization, post-hybridization and immunodetection steps. These methods provide a foundation from which the resulting signal for a given RNA transcript can be further refined with probe specific adjustments (primarily probe concentration and hybridization temperature).

A Whole Mount In Situ Hybridization Method for the Gastropod Mollusc Lymnaea stagnalis

The goal of this protocol is to provide users with a set of methods for the high-throughput decapsulation of Lymnaea stagnalis embryos and larvae in preparation for whole mount in situ hybridization, and for subsequent pre- and post-hybridization treatments.

A Whole Dağı<em&gt; In Situ</emGastropoda yumuşakça için&gt; Hibridizasyon Yöntemi<em&gt; Lymnaea stagnalis</em

Whole mount in situ hybridization (WMISH) is a technique that allows for the spatial resolution of nucleic acid molecules (often mRNAs) within a ...

Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels (Bivalvia: Unionida)

Actively monitoring the timing, development, and reproductive patterns of endangered species is critical when managing for population recovery. Freshwater mussels are among the most imperiled organisms in the world, but information about early larval (glochidial) development and brooding periods is still lacking for many species. Previous studies have focused on the complex life history stage when female mussels are ready to parasitize host fish, but few studies have focused on the brooding period and timing of larval development. The protocol described here allows researchers to non-lethally evaluate the state of gravidity for female mussels. The results of this study show that this method does not affect a female mussel&rsquo;s ability to stay gravid or become gravid again after sampling has been performed. The advantage of this method may permit its use on federally threatened or endangered species or other populations of high conservation concern. This protocol can be adapted for use on both preserved or live individuals and was tested on a variety of mussel species. The database provided is a repository for a breadth of information on timing of reproductive habits and will facilitate future freshwater mussel research, conservation, and recovery efforts.

Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels Bivalvia: Unionida

Freshwater mussel conservation is dependent on monitoring reproductive patterns and processes of species. This study standardizes a non-lethal protocol for sampling gill contents, characterizing larval development, and providing a digital repository for data collected. This protocol-database package will be an important tool for mussel researchers in recovery of imperiled species.

Tatlı Su Midyelerinin Üreme Durumunu ve Larval Gelişimini Karakterize Etmek Için Ölümcül Olmayan Bir Yöntemin Standartlaştırılması (Bivalvia: Unionida)

Actively monitoring the timing, development, and reproductive patterns of endangered species is critical when managing for population recovery. Freshwater ...

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the induction of ovarian maturation is important to meet the consumer demand for mature mud crabs and hasten seed production. Eyestalk ablation is an effective tool to enhance ovarian maturation in mud crabs. However, there is no standard protocol for the eyestalk ablation of mud crabs. In this study, two eyestalk ablation techniques are described: cauterization (the use of hot metal to ablate the eyestalk of an anesthetized crab) and surgery (the removal of the eyestalk using surgical scissors). Before eyestalk ablation, sexually mature females (CW &#62; 86 mm) were anesthetized using an ice bag (&#8722;20 &#176;C) with seawater. When the water temperature reached 4 &#176;C, the ice bag was removed from the water. Flowing seawater (ambient temperature: 28 &#176;C) was used for recovery from the anesthesia immediately after eyestalk ablation. Mortality did not occur during or after the process of eyestalk ablation. The eyestalk ablation protocol presented here accelerated the ovarian maturation of the mud crabs.

Two eyestalk ablation protocols (i.e., cauterization and surgery&#160;approaches) were performed on anesthetized female crabs. The eyestalk ablation of mud crabs hastened the ripening of ovaries without decreasing the survival rate.

Çamur Yengeçlerinde Yumurtalık Olgunlaşmasını Artırmak için Göz Sapı Ablasyonu

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Drosophila Male Accessory Gland Dissection: A Method to Isolate Secondary Cells

Source: Immarigeon, C., et al. <a href="https://www.jove.com/video/60218/" target="_blank">A FACS-based Protocol to Isolate RNA from the Secondary Cells of Drosophila Male Accessory Glands</a>. J. Vis. Exp. (2019).
This video describes the dissection of the accessory glands from male flies and shows an example in which the isolated gland will be dissociated into a single cell suspension.

Drosophila Erkek Aksesuar Bez Diseksiyonu: İkincil Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Source: Immarigeon, C., et al. A FACS-based Protocol to Isolate RNA from the Secondary Cells of Drosophila Male Accessory Glands. J. Vis. Exp. (2019).
...

Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

A Noninvaziv Yöntemi