이 방법을 사용하면 심근 경색 후 심장 복구에서 심장과 그 내용물을 둘러싸고있는 심낭의 역할을 평가할 수 있습니다. 심근 경색을 모델링하기위한 기존의 관상 동맥 결찰 방법과 비교할 때, 우리의 방법은 손상되지 않은 심낭을 유지하여 내용물을 결정하고 심장 허혈성 손상 후 역할을 추적 할 수 있습니다. 심낭의 기여와 심장의 손상 반응을 이해하면 심장 치유를 개선하기 위해 심낭을 표적으로 하는 치료 전략에 대한 중요한 통찰력을 얻을 수 있습니다.
마취 후 시작하려면 마우스의 발을 제지하고 수술대 위에 놓습니다. 원고에 설명된 대로 수술을 위해 마우스를 준비한 후 상업용 인공호흡기를 사용하여 운반 가스로서 2%이소플루란과 100% 산소로 마우스를 환기시킵니다. 그런 다음 분당 110 회 호흡, 250 마이크로 리터의 일회 호흡량, 4 밀리미터의 수은 양의 최종 호기 압력을 설정하십시오.
마우스를 오른쪽으로 30% 굴려 수술을 위해 가슴의 왼쪽을 배치합니다. 그런 다음 가슴 피부에 2-3 센티미터의 측면 절개를하여 왼쪽의 가슴 근육을 시각화합니다. 대흉근과 소흉부를 절단하기 위해 정중선에서 바깥쪽으로 1cm 절개하십시오.
출혈 혈관의 소작 전반에 걸쳐 과도한 출혈을 피하십시오. 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 늑간근을 시각화하십시오. 왼쪽 늑간근을 2cm 절개하여 흉강에 공기를 주입하고 심장과 폐가 절개에서 떨어지도록합니다.
출혈없이 늑간을 절개하려면 인공 호흡기를 일시적으로 멈추고 소작 장치를 사용하여 개구부를 확장하십시오. 견인기를 사용하여 갈비뼈를 수축시켜 심장을 노출시킵니다. 그런 다음 실체 현미경으로 심낭과 밑에있는 심장을 관찰하십시오.
심낭 표면에 집게를 부드럽게 놓아 심낭과 근본적인 심장 움직임을 줄입니다. LAD 관상 동맥의 왼쪽 부속기 아래에서 출현을 추적하여 시각적으로 랜드 마크합니다. 마이크로니들 드라이버를 사용하여 LAD 아래의 심낭을 통해 적절한 봉합사를 안내합니다.
LAD와 심낭의 반대편에서 나오는 봉합사를 관찰하십시오. 영구 결찰 모델을 대표하여 봉합사를 묶어 관상 동맥을 통한 혈류를 제한하여 좌심실 앞쪽 부분의 희게하는 것을 볼 수 있도록합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 과도한 봉합사를 다듬습니다.
수술 후 72 시간 동안 12 시간마다 진통제를 피하 주사합니다. 이소 플루 란을 1 %로 줄인 후 산소로 환기를 유지하면서 이소 플루 란을 끄십시오. 동물이 호흡 징후를 보이면 입에서 23 게이지 기관 튜브를 제거하고 마우스를 회복 케이지에 넣어 호흡 재개를 모니터링합니다.
케이지의 일부를 온난화 패드에 올려 외부 열원을 제공하여 마우스가 케이지에서 회복되도록합니다. 절개 부위와 동물의 불편함을 평가하여 7일 동안 매일 마우스의 건강 상태를 모니터링합니다. 필요한 경우 침습적 수술 후 성공적인 회복을 위해 항생제를 투여하십시오.
산소로 전신 마취하에 마우스를 유지 한 후, 마우스를 가열 된 무대 플랫폼에서 앙와위 자세로 놓고 발을 ECG 리드에 부착하십시오. 그런 다음 가슴을 긁습니다. 트랜스듀서 프로브와 접촉 젤을 사용하여 ECG 이미지를 수집하고 적절한 소프트웨어로 분석합니다.
비 침습적 ECG 평가 후 이소 플루 란을 끄고 마우스를 케이지로 되돌립니다. 적어도 24 시간 동안 10 % 포르말린으로 심장을 고정하십시오. 우심실, 심실 중격 및 좌심실을 통해 직선 면도날을 사용하여 샘플을 절단하여 절개가 경색 영역의 중심을 통과하도록합니다.
그런 다음 파라핀이 조직 샘플을 내장합니다. 그런 다음 절단된 섹션을 장착 카세트에 넣어 추가 파라핀 임베딩을 수행하고 후속 섹션을 5마이크로미터 두께의 섹션으로 절단합니다. 슬라이드에 조직 섹션을 배치한 후 톨루엔을 사용하여 탈파라핀화하고 탈이온수로 등급이 매겨진 알코올을 세척합니다.
그런 다음 수분을 보충하십시오. 다음으로, 실온에서 2 시간 동안 피크린산에서 0.1 % 시리우스 레드로 섹션을 염색합니다. 섹션을 0.5 % 아세트산으로 3 분 동안 씻은 다음 70 % 에탄올로 1 분 동안 헹굽니다.
현미경 평가를 위해 장착하기 전에 에탄올 농도가 증가하고 등급이 매겨진 세척의 역순을 사용하여 섹션을 탈수하십시오. 수정 된 관상 동맥 결찰을 통한 성공적인 심근 경색 유도는 심장의 기능적 매개 변수와 구조적 특징을 검사하여 평가되었습니다. 기능에 대해, 감소된 좌심실 박출률은 심근 경색 후 3-4주 이내에 심초음파로 평가되었습니다.
조직 학적 염색은 기능적 변화가 좌심실 벽의 현저한 섬유증을 동반한다는 것을 입증했으며, 이는 경색 후 4 주에 심장 단면에서 picrosirius 적색 염색 섬유증을 정량화하여 추가로 확인되었다. 형광 비드 표지 방법과 유세포 분석을 결합하면 상주하는 Gata6 양성 심낭 대 식세포를 추적하는 접근법이 제공되었습니다. 중요한 것은 심장이나 혈액에서 표지가 거의 또는 전혀 검출되지 않았다는 것입니다.
심근 경색 후, 세포의 재배치는 유세포 분석 및 영상에 의해 추적 될 수있다. 심근 경색이 있거나 없는 형광 비드 표지된 심낭 골수 세포의 정량화가 도시된다. 시술 중에 실수로 얇은 심낭을 방해하거나 찢어지지 않도록주의해야합니다.
이 방법은 혈통 추적 세포 또는 이펙터 차단과 결합 될 수 있으며, 이를 통해 경색 된 심장의 치유 반응에 대한 심낭 구성 요소의 영향을 추적하고 결정할 수 있습니다. 우리는 심낭이 손상 후 심장을 보호한다는 것을 확인했으며, 이는 부분적으로 상주 심낭 대 식세포에 의해 매개됩니다. 이 접근법은 심혈관 질환에 대한 새로운 연구 영역을 열어줍니다.
