Bu çalışma, Helicobacter pylori'yi ve antibiyotik direncini hızlı bir şekilde tespit etmek için mide mukozasında QPCR kullanmakta ve bu enfeksiyonu tedavi etmek için büyük klinik öneme sahip hızlı, doğru bir tanı aracı sunmaktadır. QPCR için kalite kontrast standartlarını sağlamak çok önemlidir. Sonuç olarak, Helicobacter pylori'yi tespit etmek için QPCR IC belirli kriterlere tabi tutulmuştur ve her koşul aynı anda yerine getirilmelidir.
Erken sapma, yeniden çalıştırma gerektiren testi geçersiz kılar. Helicobacter pylori ve ilaç direncini tespit etmek için güçlü ve kapsamlı bir tanı aracına ihtiyacımız var. Mide mukozası QPCR kullanıyoruz.
Bu amaçla özel astarlar kullanıyoruz. Daha geniş hasta gruplarıyla yapılacak gelecekteki çalışmaların, Helicobacter pylori tanı, izleme ve tedavisini geliştirerek, mide mukozası QPCR'nin tam potansiyelini doğrulayacağına ve gerçekleştireceğine inanıyoruz. Başlamak için biyopsi kelepçe valfini açın ve yavaşça baskın ele doğru hareket ettirin.
Forsepsin başı görüş alanındayken, kelepçe kapağını açın ve endoskopu örnekleme bölgesinin mide mukozasında manipüle edin. Mide mukoza dokusunu klemplemek için hafif bir baskı uygulayın ve biyopsi forsepslerini kapatın. Pense kullanarak doku örneklerini çıkarın ve bunları koruma sıvısı içeren örnekleme tüpüne yerleştirin.
Tüm bölgelerden numune alındıktan sonra, numune alma tüpü kapağını sıkın ve kurumasını önlemek için kapatın. Tüpleri dış kısımda benzersiz bir kimlik numarası ile etiketleyin. Toplanan numuneleri, depolamadan kaçınarak mümkün olan en kısa sürede test için gönderin.
Metal bir banyonun sıcaklığını önceden 100 santigrat dereceye ayarlayın. Numune donmuşsa, çıkarın ve oda sıcaklığına ulaşmasını bekleyin. Aminodiasetik asit reçinesini askıya almak için lizatı iyice karıştırın.
100 mikrolitre lizatı bir filtre elemanı ile bir santrifüj tüpüne alın ve mide mukozasını ekleyin. Girdap salınımı kullanarak içeriği karıştırın. Santrifüj tüpünü 10 dakika boyunca 100 santigrat derecede metal banyoya yerleştirin.
Isıttıktan sonra tüpü çıkarın ve oda sıcaklığına soğumaya bırakın. Numuneyi 9.500G'de beş ila 10 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı dikkatlice başka bir sterilize edilmiş etiketli santrifüj tüpüne aktarın. Hemen bir sonraki adıma geçmiyorsanız, numuneyi geçici olarak dört santigrat derecede saklayın.
Astar probunu, karışık enzim çözeltisini ve algılama tamponunu kitten çıkarın. Tüm bileşenleri buz üzerinde veya iki ila sekiz santigrat derecede eritin. Numuneleri karıştırmak için hafifçe sallayın ve düşük hızda kısa bir santrifüjleme yapın.
12.5 mikrolitre algılama tamponu, yedi mikrolitre primer probu ve 0.5 mikrolitre enzim çözeltisini karıştırın. İçeriği tüpte karıştırın ve kısaca santrifüjleyin. 20 mikrolitre PCR reaksiyon solüsyonu dağıtın ve her bir PCR reaksiyon kuyucuğuna beş mikrolitre nükleik asit ekleyin.
Reaksiyon tüpünü floresan PCR termocycler'a yerleştirin. Döngü parametrelerini ayarlayın ve programı çalıştırın. İstenen belirteçler için 58 santigrat derecede floresan sinyalleri toplayın.
Reaksiyondan sonra, verileri kaydedin ve belirli QPCR yazılımı kullanarak analiz edin. QPCR testleri, A, B, C ve E örneklerinde Helicobacter pylori'nin varlığını doğrularken, örnek F negatif test etti. Örnek A her iki antibiyotiğe de duyarlıydı.
Örnek B, hem klaritromisin hem de levofloksasine direnç gösterdi. Numune C, klaritromisine direnç gösterdi, ancak levofloksasine duyarlı olmaya devam etti. Örnek E, levofloksasine dirençliydi, ancak klaritromisine duyarlıydı.
