Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

ويصف هذا البروتوكول إزفاء النووية آثار خفيفة للضيوف في الخلايا الحية باستخدام العلامات الغراء الجزيئية محبوس. هذا الأسلوب واعدة لإيصال الأدوية النووية الاستهداف الانتقائي الموقع.

Abstract

نواة الخلية واحدة من العضيات الأكثر أهمية كهدف إيصال الأدوية سوبسيلولار، منذ التحوير الجيني النسخ المتماثل والتعبير فعالة لعلاج الأمراض المختلفة. هنا، علينا أن نبرهن إزفاء النووية آثار خفيفة للضيوف استخدام قفص العلامات الجزيئية الغراء (قفصالغراء-R)، الذين المعلقات أيون (قو+) جوانيدينيوم متعددة محمية بواسطة جماعة فوتوكليفابل أنيونى (butyrate محل نيتروفيراتريلوكسيكاربونيل؛ مكتبة الإسكندرية نفوك). يجري تناول الضيوف الموسومة محبوسالغراء-R في المعيشة الخلايا عن طريق الالتقام، وتبقى في اندوسوميس. ومع ذلك، عند فوتويرادييشن، يتم تحويل محبوسالغراء-R في أونكاجيد الجزيئية الغراء (الغراءUncaged-R) تحمل المعلقات قو+ متعددة، مما يسهل الهروب اندوسومال وازفاء النووية اللاحقة للضيوف. هذا الأسلوب واعدة بالنسبة للموقع انتقائية النووية تستهدف إيصال المخدرات، حيث يمكن ترحيل الضيوف كلمات داخل السيتوبلازم متبوعاً بنواة الخلية فقط عندما فوتويرادياتيد. قفص يمكن تسليم العلامات الغراء-R الضيوف الجزيئات مثل نقاط الكم (قدس) فضلا عن الضيوف جزيء صغير. قفص يمكن أن تكون العلامات الغراء-R أونكاجيد مع الأشعة فوق البنفسجية ليس فقط ولكن أيضا الضوء اثنين-فوتون (الجرد) القريبة من الأشعة تحت الحمراء، والتي يمكن اختراق عميق في الأنسجة.

Introduction

نواة الخلية، التي تحمل المعلومات الوراثية، واحدة من العضيات الأكثر أهمية كهدف إيصال الأدوية سوبسيلولار، منذ التحوير الجيني النسخ المتماثل والتعبير فعالة لعلاج الأمراض المختلفة بما في ذلك السرطان والوراثية اضطرابات1،،من23. النووية تسليم المخدرات، وتصريف الببتيد العلامات مثل التعريب النووية إشارات (NLS)4،،من56 تم التحقيق على نطاق واسع. ومع ذلك، بغية الحد من الآثار الجانبية غير المرغوب فيها، مراقبة الزمانية المكانية لنقل جسد النووية ضروري.

سابقا، أحرز إزفاء آثار خفيفة من البروتينات في نواة الخلية باستخدام قفص NLS7،،من89. وترحيل NLS في نواة الخلية بالربط بالنقل هيولى البروتينات6. في أساليب الإبلاغ عنها، هي مباشرة أدمج السيتوبلازم microinjection8 ضيف بروتينات تحمل NLS محبوس أو المعرب عنها في الخلايا المستهدفة باستخدام تقنية توسيع الشفرة الجينية9. ولذلك، أسلوب الذي يمكن أن يحقق الإقبال على الهاتف الخلوي والمستحثه بالصورة النووية إزفاء مفيداً للتطبيقات العملية.

هنا، يمكننا وصف إزفاء النووية آثار خفيفة للضيوف في الخلايا الحية باستخدام العلامات الجذعية الغراء الجزيئية محبوس (محبوسالغراء-R، الشكل 1). الالتصاق الجزيئية للذوبان في الماء10،11،12،13،14،15،16،،من1718 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 واضعة متعددة قو+ المعلقات سابقا ووضعت أحكام التي تلتزم بالبروتينات11،،من1213،،من1415، 16،17والأحماض النووية18،،من1920و الأغشية فسفوليبيد21وطين نانوشيتس22،23 من خلال تشكيل جسور الملح متعددة بين المعلقات قو+ والجماعات أوكسيانيونيك على الأهداف. المعلقات قو+ آر الغراء محبوسمحمية بجماعة فوتوكليفابل أنيونى، الاستعاضة عن بوتيرات نيتروفيراتريلوكسيكاربونيل (بانفوك). يجري تناول الضيوف الموسومة محبوسالغراء-R في المعيشة الخلايا عن طريق الالتقام وإقامتهم في اندوسوميس (الشكل 2). عند فوتويرادييشن، يتم فصل مجموعات نفوك با محبوسالغراء-R العائد أونكاجيد جزيئية غراء (Uncagedالغراء-R) تحمل المعلقات قو+ متعددة، مما يسهل الهجرة الضيف المعلمة ثم في السيتوبلازم متبوعاً بنواة الخلية (الشكل 2). يمكن أن تكون العلامة الغراء-R محبوسأونكاجيد بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية أو اثنين-فوتون الضوء (الجرد) القريبة من الأشعة تحت الحمراء دون لالضيائيه خطيرة. ونحن تثبت تسليم النووية الخاضعة للرقابة سباتيوتيمبورالي الجزيئات الضيوف، فضلا عن الضيوف جزيء صغير محبوسالغراء-R به، مع استخدام نقاط الكم (قدس) وصبغة فلورسنت (نيتروبينزوكساديازولي؛ بنك دبي الوطني)، على التوالي، كأمثلة.

figure-introduction-3772
الشكل 1: الهياكل التخطيطي محبوسالغراء-ر. المعلقات أيون (قو+) جوانيدينيوم 9 من الغراء محبوس-R محمية بمجموعة نيتروفيراتريلوكسيكاربونيل محل butyrate (بانفوك). هي مجموعات نفوك باالمشقوق التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية أو اثنين-فوتون ضوء الجرد. هو فونكتيوناليزيد جوهر محبوسالغراء-R التنسيق مع نيتروبينزوكساديازولي (دبي) أو ديبينزوسيلوكتيني (دبكو). طبع بإذن من المرجع20. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-introduction-4528
الشكل 2: توضيح التخطيطي لتشغيل ضوء النووية إزفاء الضيوف مترافق مع علامة غراء-R محبوس. الضيف/هو تناول المتقارن الغراء-Rمحبوسفي المعيشة الخلايا عن طريق الالتقام. عند فوتويرادييشن، علامة الغراء-R محبوسأونكاجيد أن تسفر عن علامة غراء-R Uncaged، التي يمكن أن تسهل هروب اندوسومال الضيف المعلمة. وفي وقت لاحق، ترحيل الضيف المعلمة إلى نواة الخلية. طبع بإذن من المرجع20. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Protocol

1-إعداد الضيوف مع قفصالغراء-R والعلامات

  1. إعداد حل الغراء-بنك دبي الوطني محبوس.
    1. توليف محبوسالغراء-دبي (الشكل 1) اتباع الإجراءات الموصوفة سابقا20.
    2. إعداد حل أسهم من محبوسالغراء-دبي (10 مم) في الجافة ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس]).
      ملاحظة: تخزين حل الأسهم في الظلام. يمكن أن تضعف الحل مع المخازن المؤقتة مائي أو خلية ثقافة الإعلام عند الاستخدام.
  2. إعداد حل الغراء-QD محبوس.
    1. توليف محبوسالغراء-ديبينزوسيلوكتيني (محبوسالغراء-دبكو) (الشكل 1) ووصف الإجراءات التالية قبل20.
    2. إعداد حل أسهم من محبوسالغراء-دبكو (10 مم) في [دمس] جافة.
    3. لإعداد محبوسالغراء-QD، أولاً بإعداد فونكتيوناليزيد أزيد قدس (أزيد-QD؛ الشكل 3). إضافة 100 ميليلتر للتوصل إلى حل ثنائي ميثيل ميثلامين (DMF، 125 ميكرومتر) إستر أزيد--PEG4--دائرة الصحة الوطنية (الشكل 3) إلى 400 ميليلتر من DMF (500 nM) حل نقاط الكم (قدس) مغلفة بشماعة فونكتيوناليزيد أمين (أمين-QD؛ الشكل 3). يقلب الخليط ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
    4. دياليزي الحل الناتجة عن ح 24 ضد 800 مل DMF استخدام غشاء السليولوز المجددة مع وقف إنتاج المواد الانشطارية الوزن الجزيئي 3,500 (موكو).
    5. تمييع الحل الأسهم من الغراء محبوس-دبكو إلى 50 ميكرومتر مع DMF. إضافة 200 ميليلتر من الحل إلى الحل بعد انتهاء الغسيل الكلوي (الشكل 3) ويقلب المخلوط ح 3 في درجة حرارة الغرفة.
    6. دياليزي الحل الناتجة عن ح 24 ضد 800 مل DMF استخدام غشاء السليولوز المجددة (موكو 25,000).
    7. تمييع الحل الناتجة إلى 200 نانومتر مع DMF.

figure-protocol-1868
الشكل 3: رسم توضيحي التخطيطي لإعداد محبوسالغراء-QD- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

2-إعداد نموذج الخلية Hep3B للملاحظات المجهرية

  1. الحفاظ على البشرية سرطانه الخلية الكبدية Hep3B الخلايا في متوسطة النسر الأساسية الحد الأدنى (اللور) التي تحتوي على 10% مصل بقرى الجنين (FBS) عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.
  2. بذور الخلايا في اليوم قبل التجربة. بذور 5.0 × 103 Hep3B الخلايا كل بئر الركازة 8 غرف زجاجية في اللور (10% FBS، 200 ميليلتر)، واحتضان العينة الخلية عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 ل 24 ساعة.
  3. إزالة متوسط الثقافة وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من الفوسفات المالحة دولبيكو المخزن المؤقت (د-برنامج تلفزيوني) مرتين.

3-المراقبة النووية إزفاء الضيوف الجزيئات الصغيرة الناجمة عن الأشعة فوق البنفسجية

  1. توريد خلية العينة (أعد الخطوة 2.3) مع 200 ميليلتر من اللور مجاناً FBS تتضمن محبوسالغراء، بنك دبي الوطني (10 ميكرون) واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لح 3.
    ملاحظة: الحضانة للعينة الخلية في اللور خالية من FBS لمدة أطول من 4 ح يتسبب في أضرار خطيرة خلية.
  2. إزالة متوسط الثقافة وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من د-برنامج تلفزيوني مرتين.
  3. للتصور، اندوسوميس وتوريد نموذج الخلية مع 200 ميليلتر من اللور (10% FBS) التي تحتوي على صبغة الفلورسنت الأحمر (مثلاً، ليسوتراكير الأحمر، 100 nM)، واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 ل 20 دقيقة إزالة الثقافة المتوسطة، وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من د-برنامج تلفزيوني مرتين. توفير نموذج الخلية مع 200 ميليلتر من اللور (10% FBS).
  4. للنووية إزفاء من محبوسالغراء، بنك دبي الوطني، تعرض العينة خلية للأشعة فوق البنفسجية الخفيفة ل 2 دقيقة عن طريق ألياف الضوئية باستخدام مصدر ضوء زينون 100-ث مزودة بفلتر ممر الموجه 365 نانومتر. لمرجع خلية عينة دون التعرض للأشعة فوق البنفسجية، تبقى عينة خلية في الظلام.
    ملاحظة: يمكن اتخاذها الغطاء لركائز الزجاج لكفاءة التعرض للأشعة فوق البنفسجية. قد يسبب التعرض طويل الأجل للأشعة فوق البنفسجية سيتوتوكسيسيتي للخلايا.
  5. لتصور الأنوية، إضافة 1 ميليلتر من هويشت 33342 (1 ملغ/مل) إلى متوسط الثقافة، واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لمدة 10 دقائق.
  6. رهنا بعينه خلية [كنفوكل] ليزر المسح المجهري وتسجيل ميكروجرافس على الإثارة في 488 نانومتر (λobs = 500-530 نانومتر)، 543 نانومتر (λobs = 565-620 نيوتن متر)، و 710 نانومتر (اثنين-فوتون؛ Λ obs = 390 465 nm) لبنك دبي الوطني والصبغ الأحمر نيون هويشت 33342، على التوالي.

4-المراقبة النووية إزفاء الضيوف الجزيئات الصغيرة الناجمة عن نير اثنين-فوتون الضوء

  1. توريد خلية العينة (أعد الخطوة 2.3) مع 200 ميليلتر من اللور مجاناً FBS تتضمن محبوسالغراء، بنك دبي الوطني (10 ميكرون) واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لح 3.
  2. إزالة متوسط الثقافة وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من د-برنامج تلفزيوني مرتين. توفير نموذج الخلية مع 200 ميليلتر من اللور (10% FBS).
  3. رهنا بعينه خلية [كنفوكل] ليزر المسح المجهري وتسجيل ميكروجرافس على الإثارة في 488 نانومتر (λobs = 500-530 نانومتر).
  4. للنووية إزفاء من محبوسالغراء، بنك دبي الوطني، يتهددها المنطقة بما في ذلك خلية اهتمام بليزر إثارة اثنين-فوتون (710 nm)، والمثبتة كمصدر ضوء في المجهر، لمدة 2 دقيقة (30 ثانية × 4). مراقبة نقل جسد كما هو موضح في الخطوة 4، 3.

5-المراقبة النووية إزفاء الضيوف الجزيئات الناجمة عن الأشعة فوق البنفسجية

  1. توريد خلية العينة (أعد الخطوة 2.3) مع 200 ميليلتر من اللور مجاناً FBS تتضمن محبوسالغراء-QD (10 نانومتر)، واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لح 3.
  2. إزالة متوسط الثقافة وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من د-برنامج تلفزيوني مرتين. توفير نموذج الخلية مع 200 ميليلتر من اللور (10% FBS).
  3. للنووية إزفاء من الغراء محبوس-QD، تعرض العينة خلية للأشعة فوق البنفسجية الخفيفة ل 2 دقيقة عن طريق ألياف الضوئية باستخدام مصدر ضوء زينون 100-ث مزودة بفلتر ممر الموجه 365 نانومتر. لمرجع خلية عينة دون التعرض للأشعة فوق البنفسجية، تبقى عينة خلية في الظلام.
  4. لتصور الأنوية، إضافة 1 ميليلتر من هويشت 33342 (1 ملغ/مل) إلى متوسط الثقافة، واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لمدة 10 دقائق.
  5. رهنا بعينه خلية [كنفوكل] ليزر المسح المجهري وتسجيل ميكروجرافس على الإثارة في 405 نانومتر (λobs = 430-520 nm) و 488 نانومتر (λobs = 625-680 نانومتر) هويشت 33342 وقدس، على التوالي.

6-خلية جدوى الفحص

  1. الحفاظ على البشرية سرطانه الخلية الكبدية Hep3B الخلايا في اللور (10% FBS) عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.
  2. بذور الخلايا في اليوم قبل التجربة. بذور 5.0 × 103 Hep3B خلايا كل من لوحة الثقافة 96-جيدا في اللور جيدا (10% FBS، 200 ميليلتر)، واحتضان العينة الخلية عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 ل 24 ساعة.
  3. إزالة متوسط الثقافة وشطف العينة الخلية مع 100 ميليلتر من د-برنامج تلفزيوني مرتين.
  4. توفير نموذج الخلية مع 200 ميليلتر من اللور مجاناً FBS تتضمن محبوسالغراء-بنك دبي الوطني (0.1-100 ميكرومتر) واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لح 3.
  5. يعرض عينة خلية للأشعة فوق البنفسجية ل 2 دقيقة عن طريق ألياف الضوئية باستخدام مصدر ضوء زينون 100-ث مزودة بفلتر ممر الموجه 365 نانومتر. لنموذج خلية مماثلة دون التعرض للأشعة فوق البنفسجية، تبقى عينة خلية في الظلام.
  6. إضافة 10 ميليلتر لخلية العد كيت-8 كاشف (10 ميليلتر) إلى متوسط الثقافة واحتضان العينة الخلية الناتجة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 لح 2.
  7. رهنا بعينه خلية مطيافية الامتصاص (λ = 450 nm) باستخدام قارئ ميكروسكوبية.

النتائج

قبل فوتويرادييشن، Hep3B الخلايا المحتضنة مع محبوسالغراء-بنك دبي الوطني معارضها fluorescence الشروريه الانبعاثات من تلك الداخلية (λext = 488 نانومتر؛ الأرقام 4A ج 4، الخضراء). تم الحصول عليها صورة مجهرية مماثلة عند الإثارة في 543 نانومتر للصبغ الأحمر ...

Discussion

لقد تحققت التحقيقات السابقة من إزفاء آثار خفيفة من البروتينات في نواة الخلية باستخدام قفص NLS7،،من89. وكما ذكر آنفا، هذه الأساليب تتطلب تقنيات إضافية دمج البروتينات معلم NLS في السيتوبلازم. على النقيض من ذلك، يتيح لنا العلامة الغراء-R محبو...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

ونعترف المركز "التكامل نانوبيو"، وجامعة طوكيو. هذا العمل كان يدعمها معونات للشباب العلماء (ب) (26810046) إلى كو ودعمها جزئيا من معونات "بحوث الترويج خصيصا" (25000005) إلى "جمهورية مقدونيا يأتون" بفضل "الزمالات البحثية من الجمعية اليابانية" لتعزيز العلوم (JSPS ) للعلماء الشباب وبرنامج المدارس الرائدة في الدراسات العليا (جبلي).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Azide-PEG4-NHS esterClick Chemistry ToolsAZ103
Q-dot 655 ITKInvitrogenQ21521MP
Regenerated cellulose membrane (MWCO 3,500)NIPPON GeneticsTOR-3K
Regenerated cellulose membrane (MWCO 25,000)Harvard Apparatus7425-RC25K
Hep3B CellsATCCHB-8064
8-chambered glass substrateNunc155411JP
96-well culture plateNunc167008
Eagle's minimal essential medium (EMEM)Thermo Fisher Scientific10370-021
Fetal bovine serum (FBS)GE HealthcareSH30406.02
Dulbecco's phosphate buffer saline (D-PBS)Wako Pure Chemical Industries045-29795
LysoTracker RedLonza WalkersvillePA-3015
Hoechst 33342DojindoH342
Cell Counting Kit-8DojindoCK04
Confocal laser scanning microscopeCarl-ZeissLSM 510Equipped with two-photon excitation laser (Mai Tai laser, Spectra-Physics)
Confocal laser scanning microscopeLeicaTCS SP8
Xenon light sourceAsahi SpectraLAX-102
Microplate readerMolecular DevicesSpectraMax Paradigm

References

  1. Miller, A. D. Human gene therapy comes of age. Nature. 357, 455-460 (1992).
  2. Roth, J. A., Cristiano, R. J. Gene Therapy for Cancer: What Have We Done and Where Are We Going. Journal of the National Cancer Institute. 89, 21-39 (1997).
  3. Verma, I. M., Weitzman, M. D. GENE THERAPY: Twenty-First Century Medicine. Annual Review of Biochemistry. 74, 711-738 (2005).
  4. Ragin, A. D., Morgan, R. A., Chmielewski, J. Cellular Import Mediated by Nuclear Localization Signal Peptide Sequences. Chemistry & Biology. 9, 943-948 (2002).
  5. Martin, R. M., et al. Principles of protein targeting to the nucleolus. Nucleus. 6, 314-325 (2015).
  6. Sun, Y., et al. Factors influencing the nuclear targeting ability of nuclear localization signals. Journal of Drug Targeting. 24, 927-933 (2016).
  7. Ventura, B. D., Kuhlman, B. Go in! Go out! Inducible control of nuclear localization. Current Opinion in Chemical Biology. 34, 62-71 (2016).
  8. Watai, Y., Sase, I., Shiono, H., Nakano, Y. Regulation of nuclear import by light-induced activation of caged nuclear localization signal in living cells. FEBS Letters. 488, 39-44 (2001).
  9. Engelke, H., Chou, C., Uprety, R., Jess, P., Deiters, A. Control of Protein Function through Optochemical Translocation. ACS Synthetic Biology. 3, 731-736 (2014).
  10. Mogaki, R., Hashim, P. K., Okuro, K., Aida, T. Guanidinium-based "molecular glues" for modulation of biomolecular functions. Chemical Society Reviews. 46, 6480-6491 (2017).
  11. Okuro, K., Kinbara, K., Tsumoto, K., Ishii, N., Aida, T. Molecular Glues Carrying Multiple Guanidinium Ion Pendants via an Oligoether Spacer: Stabilization of Microtubules against Depolymerization. Journal of the American Chemical Society. 131, 1626-1627 (2009).
  12. Okuro, K., et al. Adhesion Effects of a Guanidinium Ion Appended Dendritic "Molecular Glue" on the ATP-Driven Sliding Motion of Actomyosin. Angewandte Chemie, International Edition. 48, 3030-3033 (2010).
  13. Uchida, N., et al. Photoclickable Dendritic Molecular Glue: Noncovalent-to-Covalent Photochemical Transformation of Protein Hybrids. Journal of the American Chemical Society. 135, 4684-4687 (2013).
  14. Garzoni, M., Okuro, K., Ishii, N., Aida, T., Pavan, G. M. Structure and Shape Effects of Molecular Glue on Supramolecular Tubulin Assemblies. ACS Nano. 8, 904-914 (2014).
  15. Mogaki, R., Okuro, K., Aida, T. Molecular glues for manipulating enzymes: trypsin inhibition by benzamidine-conjugated molecular glues. Chemical Science. 6, 2802-2805 (2015).
  16. Okuro, K., Sasaki, M., Aida, T. Boronic Acid-Appended Molecular Glues for ATP-Responsive Activity Modulation of Enzymes. Journal of the American Chemical Society. 138, 5527-5530 (2016).
  17. Mogaki, R., Okuro, K., Aida, T. Adhesive Photoswitch: Selective Photochemical Modulation of Enzymes under Physiological Conditions. Journal of the American Chemical Society. 139, 10072-10078 (2017).
  18. Hashim, P. K., Okuro, K., Sasaki, S., Hoashi, Y., Aida, T. Reductively Cleavable Nanocaplets for siRNA Delivery by Template-Assisted Oxidative Polymerization. Journal of the American Chemical Society. 137, 15608-15611 (2015).
  19. Hatano, J., Okuro, K., Aida, T. Photoinduced Bioorthogonal 1,3-Dipolar Poly-cycloaddition Promoted by Oxyanionic Substrates for Spatiotemporal Operation of Molecular Glues. Angewandte Chemie, International Edition. 55, 193-198 (2016).
  20. Arisaka, A., Mogaki, R., Okuro, K., Aida, T. Caged Molecular Glues as Photoactivatable Tags for Nuclear Translocation of Guests in Living Cells. Journal of the American Chemical Society. 140, 2687-2692 (2018).
  21. Suzuki, Y., Okuro, K., Takeuchi, T., Aida, T. Friction-Mediated Dynamic Disordering of Phospholipid Membrane by Mechanical Motions of Photoresponsive Molecular Glue: Activation of Ion Permeation. Journal of the American Chemical Society. 134, 15273-15276 (2012).
  22. Wang, Q., et al. High-water-content mouldable hydrogels by mixing clay and a dendritic molecular binder. Nature. 463, 339-343 (2010).
  23. Tamesue, S., et al. Linear versus Dendritic Molecular Binders for Hydrogel Network Formation with Clay Nanosheets: Studies with ABA Triblock Copolyethers Carrying Guanidinium Ion Pendants. Journal of the American Chemical Society. 135, 15650-15655 (2013).
  24. Mohr, D., Frey, S., Fischer, T., Güttler, T., Görlich, D. Characterisation of the passive permeability barrier of nuclear pore complexes. EMBO Journal. 28, 2541-2553 (2009).
  25. Best, M. D. Click Chemistry and Bioorthogonal Reactions: Unprecedented Selectivity in the Labeling of Biological Molecules. Biochemistry. 48, 6571-6584 (2009).
  26. Klán, P., et al. Photoremovable Protecting Groups in Chemistry and Biology: Reaction Mechanisms and Efficacy. Chemical Reviews. 113, 119-191 (2013).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

143

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved