Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

النضج في المختبر (IVM) قبل عملية أمراض النساء (OP-IVM) يجمع بين IVM بعد استرجاع البويضات مع الجراحة النسائية الروتينية ويعمل كامتداد لتطبيقات IVM التقليدية للحفاظ على الخصوبة.

Abstract

استخدام النضج في المختبر (IVM) قبل العملية النسائية (OP-IVM) هو امتداد IVM التقليدية التي تجمع بين IVM بعد استرجاع البويضات مع الجراحة النسائية الروتينية. OP-IVM مناسب للمرضى الذين يخضعون لجراحة أمراض النساء الحميدة الذين يحتاجون إلى الحفاظ على الخصوبة (FP) أو علاجات العقم مثل الإخصاب في المختبر ونقل الأجنة (IVF-ET). في غرفة العمليات، يتم تخدير المرضى الذين يخضعون لجراحة أمراض النساء الحميدة أولا ويتلقون علاجا غير ناضج للجريبات الموجهة بالموجات فوق الصوتية (IMFA). كما يتم إجراء الجراحة النسائية اللاحقة، يتم فحص مجمعات الركاز البويضات (COCs)، ويتم نقل COCs غير ناضجة في المتوسط IVM ومثقفة لمدة 28-32 ساعة في مختبر التلقيح الاصطناعي. بعد التقييم، سيتم اختيار البويضات الناضجة في مرحلة MII و cryopreserved في النيتروجين السائل ل FP أو تخصيبها عن طريق حقن الحيوانات المنوية داخل السيتوبلازم (ICSI) للتلقيح الاصطناعي-ET. من خلال الجمع بين IVM وجراحة أمراض النساء ، يمكن حفظ البويضات غير الناضجة التي كان سيتم التخلص منها واستخدامها في تكنولوجيا الإنجاب المساعدة (ART). ويرد وصف للإجراءات والأهمية والجوانب الحاسمة من البروتوكول الاختياري الرابع في هذه المقالة.

Introduction

IVM هو العلاج بمضادات الفيروسات القهقرية التي يتم فيها استزراع البويضات البشرية غير الناضجة في المختبر لنضوج التلقيح الاصطناعي-ET أو FP. في IVM ، لا يتم استخدام أدوية تحريض الإباضة ، وبالتالي تقليل الألم والعبء المالي والمضاعفات مثل متلازمة فرط تحفيز المبيض (OHSS)1،2. وبالإضافة إلى ذلك، IVM مناسبة بشكل خاص لFP من مرضى السرطان وعلاج العقم من المرضى الحساسة للهرمونات الذين قد تكون غير قادرة على أو ليس لديهم الوقت لتلقي العلاج التعريفي الإباضة3. لذلك ، على الرغم من أن عدد البويضات التي تم استرجاعها ، فإن معدل الحمل السريري (CPR) ومعدل المواليد الأحياء (LBR) أقل من معدل التلقيح الاصطناعي4،5، فإن IVM له مزاياه الفريدة الخاصة.

المرضى الذين يعانون من العقم مع آفات بطانة الرحم، هيدروسالبينإكس، أو أكياس المبيض وعادة ما يكون جراحة أمراض النساء قبل العلاج بمضادات الفيروسات القهقرية، والبويضات عادة ما تكون غير ناضجة. يستخدم OP-IVM الموجات فوق الصوتية المهبلية الموجهة لاسترداد البويضات غير الناضجة وتنميتها في المختبر حتى نضوج التلقيح الاصطناعي ET أو FP. OP-IVM يجمع بين IVM بعد استرجاع البويضات وجراحة أمراض النساء ، وبالتالي تقليل المضاعفات الشائعة في دورات فرط تحفيز المبيض الخاضعة للرقابة وتوفير الوقت والمال. بالنسبة للمرضى الخصبين، يمكن أن يكون OP-IVM بمثابة "تأمين الخصوبة" أثناء خضوعه لجراحة نسائية روتينية.

وعلاوة على ذلك، يمكن تقليل الأضرار الناجمة عن جراحات أمراض النساء، مثل استئصال ورم المبيض6و7 والكهربائية، من خلال استرجاع البويضات قبل الجراحة النسائية. لذلك ، بالمقارنة مع الجراحة النسائية الروتينية ، يمكن أن يقلل OP-IVM من عدد العمليات أثناء علاج العقم ويمنع فقدان البويضات الوظيفية أثناء جراحة المبيض.

وقد أظهرت دراسة سابقة أن الإجراء الإضافي لاسترجاع البويضات لن يزيد من المضاعفات الجراحية ونتائج الحمل السلبية ، ولا يطيل بقاء المستشفى8. وقد أعطى بعض المرضى ولادة حية من خلال OP-IVM8, مما يدل على جدوى هذه الطريقة. تصف هذه الورقة خصائص المرضى الذين قد يستفيدون من OP-IVM وكذلك الإجراءات والنقاط الحرجة في OP-IVM وتناقش تقييم نضج البويضات البشرية.

Protocol

ملاحظة: تمت الموافقة على الدراسات المتعلقة بطريقة OP-IVM من قبل مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) في مستشفى جامعة بكين الثالث ولجنة الأخلاقيات في جامعة بكين (2014S2004). يظهر ملخص OP-IVM في الشكل 1. سيتم تقديم الإجراء خطوة بخطوة في المقطع التالي.

1. إدخال OP-IVM للمرضى المناسبين

  1. تحديد المرضى المحتملين الذين قد يستفيدون من OP-IVM مثل تلك الموصوفة في الخطوات 1.1.1-1.1.3.:
    1. متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) المرضى الذين يعانون من مقاومة الكلوميفين الذين يحتاجون إلى جراحة حفر المبيض بالمنظار.
    2. المرضى الذين يعانون من العقم الذين يحتاجون إلى جراحات أمراض النساء الحميدة، مثل استئصال عضلة الرحم بالمنظار، والفحص المتعدد الأنواع، واستئصال الحاجز والمنظار، واستئصال الأوفوروسيستيك، قبل العلاج بمضادات الفيروسات القهقرية.
    3. المرضى الذين يعانون من السرطان أو أمراض الدم الذين يتلقون العلاج الكيميائي أو العلاج الإشعاعي.

2. الموافقة المستنيرة

  1. توفير المعلومات الكاملة للمرضى، بما في ذلك لماذا OP-IVM قد تكون مفيدة، وإجراءاته، واستخدامات البويضات IVM (التلقيح الاصطناعي-ET أو التبريد)، CPRs المقدرة وLBRs، والمضاعفات المحتملة. اطلب من المرضى إعطاء موافقة مستنيرة عن طريق التوقيع على نموذج الموافقة.

3. إعداد التسميات و IVM البويضات المتوسطة

  1. طباعة بطاقات تعريف (ID) تحمل اسم المريض وتواريخ أطباق الثقافة والأنابيب.
  2. إضافة 0.5 مل من IVM المتوسطة تكملها 0.075 وحدة IU/mL من هرمون تحفيز الجريب (FSH) و 0.075 وحدة IU/مل من هرمون اللوتين (LH) إلى كل بئر من لوحة 4-جيدا. غطي الوسط بالزيت.
    ملاحظة: تنفيذ كافة هذه الإجراءات في مقاعد نظيفة تدفق صفح.
  3. قبل الحربم لوحة 4-جيدا مع IVM البويضات المتوسطة في 37 درجة مئوية في الهواء المرطب التي تحتوي على 5٪ CO2 و 5٪ O2 على الأقل 6 ساعة قبل الاستخدام.

4. إدارة التخدير في غرفة العمليات

  1. تحقق من اسم المريض قبل إعطاء التخدير.
  2. تخدير المريض عن طريق الوريد عن طريق طبيب التخدير.

5. أداء استرجاع البويضات

  1. ضع علامة على التسميات التي تحمل الاسم والتاريخ والبطاقة على أطباق الثقافة والأنابيب.
  2. وضع المريض في وضع استئصال المثانة; تطهير باستمرار، والستائر، وفرك المهبل مع المالحة الدافئة.
  3. وضع التحقيق بالموجات فوق الصوتية داخل المهبل. مسح وتسجيل عدد من بصيلات في كلا المبيضين. ابحث عن أقرب موقع للمبيض كموقع ثقب، وتجنب الأمعاء والمثانة والأوعية الدموية الكبيرة.
  4. أسبيرات السائل الجريبي.
    1. غسل الإبرة مع درجة الحموضة مستقرة التعامل مع المتوسطة قبل ثقب (انظر جدول المواد).
    2. حقن 19 G, إبرة طموح واحد التجويف في المبيضين تحت إشراف الموجات فوق الصوتية.
    3. ثقب بصيلات أكبر مع حدود واضحة الأقرب إلى التحقيق. في وضع منخفض، حقن بسرعة محلول شطف تستكمل مع 25 U / مل من الهيبارين. أسبيرات السائل الجريبي مع الإبرة تحت ضغط 80-90 ملم زئبق، وتناوب الإبرة قليلا لتنشق أكبر قدر ممكن من السوائل الجريبية. ثقب بصيلات أخرى من الجانب القريب إلى البعيد على هذه الطائرة.
      ملاحظة: أثناء الطموح، سيتدفق السائل الجريبي الذي يحتوي على البويضات إلى أنبوب اختبار معقم سعة 10 مل تحت ضغط سلبي. الهيبارين يمكن أن تقلل من لزوجة السائل الجريبي لتسهيل عملية الطموح.
    4. إزالة الإبرة من المبيض (إبقاء الإبرة في جدار المهبل). ضبط اتجاه مسبار الموجات فوق الصوتية، وثقب بصيلات المتبقية على طائرات أخرى. في محاولة لتنشق جميع بصيلات بقطر ~ 5-9 ملم.
      ملاحظة: ضبط موضع المسبار لإبقائه الأقرب إلى المبيضين في جميع الأوقات. اضغط على fornix المهبلية مع القوة المناسبة للحد من الاصابة والنزيف.
    5. سحب الإبرة بعد الانتهاء في المبيض واحد، وغسل الإبرة مع وسيطة التعامل، وثقب الجانب الآخر باستخدام نفس الطريقة.
      ملاحظة: طموح بصيلات كاملة في غضون 25-30 دقيقة.
  5. نقل السائل الجريبي من غرفة العمليات إلى مختبر التلقيح الاصطناعي في غضون دقائق قليلة بعد التأكد من اسم المريض وهوية المريض.
    ملاحظة: نقل السائل الجريبي المصفي إلى مقاعد البدلاء مختبر التلقيح الاصطناعي في أقرب وقت ممكن لمنع التخثر.
  6. الكشف عن نزيف نشط في تجويف الحوض مع الموجات فوق الصوتية وضع B بعد ثقب جميع بصيلات. أدخل منظارا، وصوب الطرف إلى الثقب الخلفي للكشف عن النزيف النشط في موقع الثقب.
    ملاحظة: لا ينبغي ملاحظة أي نزيف نشط في موقع ثقب المهبل إذا كان وضع المبيض طبيعيا ويتم استرجاع البويضات بعناية. للنزيف الخفيف الذي يستمر حتى بعد الضغط، حافظي على ضغط شاش معقم في المهبل لمدة 2-4 ساعة. السيطرة على النزيف المفرط من الشرايين الصغيرة باستخدام المشابك مع ملقط الأوعية الدموية لمدة 2-4 ساعة. النزيف في تجويف الحوض أو المبيض، والذي نادرا ما يحدث، ينبغي السيطرة عليه عن طريق التخثر الكهربائي عن طريق الجراحة بالمنظار.

6. جراحة النساء

  1. بناء على حاجة وحالة المريض ، قم بإجراء جراحة نسائية مناسبة بعد استرجاع البويضات.
    1. إجراء جراحة حفر المبيض بالمنظار لمرضى متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) الذين يعانون من مقاومة الكلوميفين.
    2. إجراء جراحة أمراض النساء الحميدة للمرضى الذين يعانون من العقم قبل العلاج بمضادات الفيروسات القهقرية، مثل استئصال عضلة الرحم بالمنظار، والفحص المتعدد الأنواع، واستئصال الحاجز والبطين بالمنظار، واستئصال الأوفوروسيستيك.
    3. إجراء استئصال المبيضين للحفاظ على التبريد الخصوبة من المرضى الذين يعانون من السرطان أو أمراض الدم الذين يحتاجون إلى تلقي العلاج الكيميائي.
      ملاحظة: هذه العمليات الجراحية النسائية هي العمليات السريرية الأساسية والموحدة. وينبغي أن تكون المبادئ التوجيهية للعمليات في مختلف البلدان والمستشفيات متشابهة نسبيا.

7. تنفيذ IVM

ملاحظة: تنفيذ العملية الكاملة IVM على مسطح متجانس 37 درجة مئوية.

  1. تصفية السائل المسام يستنشق مع مصفاة خلية النايلون 70 ميكرومتر. شطف مرارا وتكرارا أنبوب الثقافة ومصفاة مع درجة الحموضة قبل الدافئة مستقرة التعامل مع المتوسطة. تأكد من نقل جميع COCs غير ناضجة تماما إلى طبق الثقافة. جمع السوائل المصفاة، وشطف، والثقافة في طبق بيتري 100 × 15 ملم.
  2. فحص COCs (الشكل 2) تحت التجسيم مع التكبير 40x. نقل بسرعة غير ناضجة في المتوسط البويضات IVM قبل الحارة.
    ملاحظة: اختر تكبير مناسب حسب عادة المشغل.
  3. سجل عدد COCs غير الناضجة المثقفة.
  4. إبلاغ المريض عن عدد من COCs المستزرعة. مناقشة جمع السائل المنوي مع المرضى وشركائهم. إجراء استخراج الحيوانات المنوية وفقا للإجراء الطبيعي.
  5. زراعة COCs غير ناضجة في 37 درجة مئوية في الهواء المرطب التي تحتوي على 5٪ CO2 و 5٪ O2 لمدة 28-32 ساعة.
  6. تقييم نضج البويضات.
    1. دنود خلايا الركامية عن طريق الأنابيب المتكررة باستخدام ماصة باستور الزجاج تحت مجسمة مع التكبير 40x. فحص قذف الجسم القطبي (PB) لتحديد مرحلة نمو البويضات. انظر الشكل 2 للصور التمثيلية للبويضات في مركبات الكربون الكلورية فلورية، والميتافيزي الثاني (MII)، والميتافيزي الأول (MI)، والفيصلات الجرثومية (GVs) ذات الخصائص المورفولوجية الواضحة.
      ملاحظة: استخدم لهبا عموديا (على سبيل المثال، موقد بونسن) لضبط قطر ماصة باستور الزجاجية إلى حجم البويضات.
    2. عد البويضات MII وتسجيل العدد.
    3. اختر البويضات الناضجة للتلقيح الاصطناعي أو التزجيج.
      ملاحظة: جمع الحيوانات المنوية في اليوم الذي تنضج فيه البويضات للتلقيح الاصطناعي، ولكن ليس لتزجيج البويضات.
    4. ثقافة البويضات غير ناضجة في مرحلة GV و MI في المتوسط ثقافة IVM الأصلي مع خلايا الركاز لآخر 10-14 ح. كرر الخطوات 7.6.2-7.6.3.

8. تنفيذ ICSI أو التزجيج البويضات

  1. اتبع الإجراء القياسي للمركز التناسلي8.

9. زراعة الأجنة وإجراء حفظ الأجنة

  1. اتبع الإجراء القياسي للمركز التناسلي8.

النتائج

حتى ديسمبر 2019، تم استخدام OP-IVM للحفاظ على الخصوبة ل 274 مريضا. نشرت النتائج الجنينية والإنجابية ل 158 مريضا بين عامي 2014 و2016 في ورقة سابقة8. يناقش المثال التالي الإجراء المتبع لمريض PCOS يتلقى OP-IVM في عام 2016. المريض هو 28 عاما تشخيص العقم الأولي، كيس النكسل الأيسر، وكي?...

Discussion

تمتد طريقة OP-IVM الموصوفة في هذه المقالة إلى تطبيقات IVM التقليدية وتجمع بين IVM بعد استرجاع البويضات والجراحة النسائية الروتينية. يمكن الآن استخدام البويضات التي كانت ستفقد في جراحة أمراض النساء في التلقيح الاصطناعي -ET أو FP دون مخاطر جراحية إضافية. تم استخدام OP-IVM لأول مرة لاسترداد البويضات ق?...

Disclosures

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

Acknowledgements

وقد تم دعم هذا العمل من خلال منح من البرنامج الوطني الصيني للبحث والتطوير (رقم 2017YFC1002000، 2018YFC1004001، 2019YFA0801400)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الصينية (رقم 81571386، 81730038)، وصندوق الابتكار CAMS للعلوم الطبية (2019-I2M-5-001)، ومشروع البحوث الخاصة للتنمية الصحية الرأسمالية الصينية (2018-2-4095).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
19 G single-lumen aspiration needlesCook, AustraliaK-OPS-7035-REH-ET
4-well plateCorning
70 μm nylon cell strainerFalcon, USA352350
CO2 IncubatorThermo
Culture oilVitrolife, Sweden10029,OVOIL Step 3.2.
FSH & LHFerring Reproductive Health, GermanyMENOPUR®
Glass Pasteur pipetteHilgenberg GmbH, Germany3154102-26
G-MOPS mediumpH-stable handling medium for washing the needle before puncturing
IVM mediumOrigio, DenmarkART-1600-B
Laminar Flow Clean BenchesESCO
Petri dishThermo Fisher Scientific, Denmark263991
pH stable handing media designed to support the handling and manipulation of oocytes and embryos outside the incubatorVitrolife, Sweden10130, G-MOPS PLUSStep 7.1.
Rinse solutionCook, AustraliaK-SIFB-100
StereoscopeNikon

References

  1. Ho, V. N. A., Braam, S. C., Pham, T. D., Mol, B. W., Vuong, L. N. The effectiveness and safety of in vitro maturation of oocytes versus in vitro fertilization in women with a high antral follicle count. Human Reproduction. 34 (6), 1055-1064 (2019).
  2. Yang, Z. Y., Chian, R. C. Development of in vitro maturation techniques for clinical applications. Fertility and Sterility. 108 (4), 577-584 (2017).
  3. Hatirnaz, S., et al. Oocyte in vitro maturation: A sytematic review. Turkish Journal of Obstetrics and Gynecology. 15 (2), 112-125 (2018).
  4. Gremeau, A. S., et al. In vitro maturation or in vitro fertilization for women with polycystic ovaries? A case-control study of 194 treatment cycles. Fertility and Sterility. 98 (2), 355-360 (2012).
  5. Ho, V. N. A., Braam, S. C., Pham, T. D., Mol, B. W., Vuong, L. N. The effectiveness and safety of in vitro maturation of oocytes versus in vitro fertilization in women with a high antral follicle count. Human Reproduction. 34 (6), 1055-1064 (2019).
  6. Sahin, C., et al. Which should be the preferred technique during laparoscopic ovarian cystectomy. Reproductive Sciences. 24 (3), 393-399 (2017).
  7. Xiao, J., et al. Impact of hemostatic methods on ovarian reserve and fertility in laparoscopic ovarian cystectomy. Experimental and Therapeutic. 17 (4), 2689-2693 (2019).
  8. Song, X. -. L., et al. Enhancing the scope of in vitro maturation for fertility preservation: transvaginal retrieval of immature oocytes during endoscopic gynaecological procedures. Human Reproduction. 35 (4), 837-846 (2020).
  9. Magnusson, &. #. 1. 9. 7. ;., Källen, K., Thurin-Kjellberg, A., Bergh, C. The number of oocytes retrieved during IVF: a balance between efficacy and safety. Human Reproduction. 33 (1), 58-64 (2018).
  10. Larose, H., et al., Wellik, D. M., et al. Gametogenesis: A journey from inception to conception. Current Topics in Developmental Biology. 132, 257-310 (2019).
  11. Broer, S. L., Broekmans, F. J. M., Laven, J. S. E., Fauser, B. C. J. M. Anti-Müllerian hormone: ovarian reserve testing and its potential clinical implications. Human Reproduction Update. 20 (5), 688-701 (2014).
  12. Arce, J. C., La Marca, A., Mirner Klein, B., Nyboe Andersen, A., Fleming, R. Antimüllerian hormone in gonadotropin releasing-hormone antagonist cycles: prediction of ovarian response and cumulative treatment outcome in good-prognosis patients. Fertility and Sterility. 99 (6), 1644-1653 (2013).
  13. Katayama, K. P., et al. Ultrasound-guided transvaginal needle aspiration of follicles for in vitro fertilization. Obstetrics and Gynecology. 72 (2), 271-274 (1988).
  14. Dellenbach, P., et al. Transvaginal sonographically controlled follicle puncture for oocyte retrieval. Fertility and Sterility. 44 (5), 656-662 (1985).
  15. Hirata, T., et al. Concomitant ovarian drilling and oocyte retrieval by laparoendoscopic single-site surgery led to live birth using in vitro maturation of oocyte and transfer of frozen-thawed blastocyst in woman with polycystic ovary syndrome. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 40 (5), 1431-1435 (2014).
  16. Deutinger, J., et al. Follicular aspiration for in vitro fertilization: sonographically guided transvaginal versus laparoscopic approach. European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 26 (2), 127-133 (1987).
  17. Tanbo, T., Henriksen, T., Magnus, O., Abyholm, T. Oocyte retrieval in an IVF program. A comparison of laparoscopic and transvaginal ultrasound-guided follicular puncture. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 67 (3), 243-246 (1988).
  18. Nagy, Z. P., et al. Pregnancy and birth after intracytoplasmic sperm injection of in vitro matured germinal-vesicle stage oocytes: case report. Fertility and Sterility. 65 (5), 1047-1050 (1996).
  19. Söderström-Anttila, V., Mäkinen, S., Tuuri, T., Suikkari, A. -. M. Favourable pregnancy results with insemination of in vitro matured oocytes from unstimulated patients. Human Reproduction. 20 (6), 1534-1540 (2005).
  20. Hwang, J. L., Lin, Y. H., Tsai, Y. L. In vitro maturation and fertilization of immature oocytes: a comparative study of fertilization techniques. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 17 (1), 39-43 (2000).
  21. Walls, M., Junk, S., Ryan, J. P., Hart, R. IVF versus ICSI for the fertilization of in-vitro matured human oocytes. Reproductive Biomedicine Online. 25 (6), 603-607 (2012).
  22. Park, J. H., Jee, B. C., Kim, S. H. Comparison of normal and abnormal fertilization of in vitro-matured human oocyte according to insemination method. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 42 (4), 417-421 (2016).
  23. Ho, V. N. A., Pham, T. D., Le, A. H., Ho, T. M., Vuong, L. N. Live birth rate after human chorionic gonadotropin priming in vitro maturation in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Ovarian Research. 11 (1), 70 (2018).
  24. Zheng, X., et al. Effect of hCG priming on embryonic development of immature oocytes collected from unstimulated women with polycystic ovarian syndrome. Reproductive Biology and Endocrinology. 10, 40 (2012).
  25. Tannus, S., et al. Predictive factors for live birth after in vitro maturation of oocytes in women with polycystic ovary syndrome. Archives of Gynecology and Obstetrics. 297 (1), 199-204 (2018).
  26. Cohen, Y., et al. Decreased pregnancy and live birth rates after vitrification of in vitro matured oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 35 (9), 1683-1689 (2018).
  27. Yazdanpanah, F., Khalili, M. A., Eftekhar, M., Karimi, H. The effect of vitrification on maturation and viability capacities of immature human oocytes. Archives of Gynecology and Obstetrics. 288 (2), 439-444 (2013).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

171 IVM PCOS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved